Разработка технологии иммобилизации B-галктозидазы и оценка её биологического действия на молоко и некоторые молочные продукты
Дипломная работа - Разное
Другие дипломы по предмету Разное
В»и до комнатной температуры и помещали в свежеприготовленный 5% раствор лактозы. Через сутки снова определяли концентрацию лактозы. Данную процедуру повторяли через 3,5,7,10 и 15 суток до достижения практически полной инактивации фермента. Статистически обработанные данные этой серии экспериментов представлены в таблицах 2.14 и 2.15.
Таблица 2.14 Продолжительность действия 0,01% иммобилизованной в-галактозидазы на снижение концентрации лактозы (исходный раствор лактозы - 5%)
Время измерения, сутЗначенияФермент, иммобилизованный на носителях:лавсанасбестопилки1Mm %
Р3,570,008
,11
<0,0013,180,008
,34
<0,0012,880,012
,37
<0,0012Mm %
Р3,480,012
,92
<0,0013,290,016
,53
<0,0013,020,021
,15
<0,0013Mm %
Р3,590,01
,51
<0,0013,360,021
,93
<0,0013,070,04
,15
<0,0015Mm %
Р4,020,21
,07
<0,0013,620,012
,11
<0,0013,870,025
,09
<0,0017Mm %
Р4,420,004
,04
<0,0013,950,004
,68
<0,0014,720,029
,02
<0,0110Mm %
Р4,900,012
,60
<0,014,270,037
,05
<0,05---15Mm %
Р---4,570,037
,03
<0,05---
% - процент падения относительно контроля (5,02% раствор лактозы);
Р - достоверность относительно контроля.
Выводы. При иммобилизации в-галактозидазы на лавсане фермент дает максимальное снижение лактозы в первые трое суток (концентрация лактозы снизилась на 28,9; 36 и 28,5% соответственно через 1,2 и 3 суток). Затем активность фермента снижается, и через 10 суток концентрация лактозы после ферментативного гидролиза снизилась на 2,5%. Можно отметить, что снижение активности составляет в среднем 8,17% за сутки. в-галактозидаза, иммобилизованная на асбесте, дала большее снижение лактозы, чем иммобилизованная на лавсане. За первые трое суток концентрация снизилась на 36,7; 34,5 и 33% соответственно. Фермент, иммобилизованный на асбесте, дольше сохраняет свою активность: через 15 суток с начала опыта концентрация лактозы составляет 91% от контроля (с 5,02 упала до 4,57%). Снижение активности составляет 4,28% в сутки.
Иммобилизованный на опилках фермент показал максимальное снижение концентрации лактозы: через 1 сутки - на 42,6; через 2-е - 39,9; через 3-е - 38,9%. Однако галактаза сохраняет свою активность меньше времени, чем иммобилизованная на других носителях. Через 7 суток фермент показал снижение лактозы на 6%. Среднесуточное снижение активности - 9,16%. Итак, иммобилизованный на асбесте фермент показал не только значительное снижение лактозы, но и сохранил свою активность дольше, чем на других носителях.
Таблица 2.15 Продолжительность действия 0,03% иммобилизованной в-галактозидазы на снижение концентрации лактозы
Время измерения, сутЗначенияФермент, иммобилизованный на носителях:лавсанасбестопилки1Mm %
Р2,810,012
,95
<0,0012,910,037
,96
<0,0012,030,025
,43
<0,0012Mm %
Р2,280,016
,41
<0,0012,820,033
,17
<0,0012,110,008
,03
<0,0013Mm %
Р2,690,021
,58
<0,0013,010,012
,96
<0,0012,120,428
,23
<0,0015Mm %
Р3,170,025
,14
<0,0013,130,462
,35
<0,052,750,029
,78
<0,0017Mm %
Р3,640,033
,69
<0,0013,320,016
,13
<0,0013,600,021
,71
<0,0110Mm %
Р4,150,012
,66
<0,0013,750,504
,70
>0,054,640,025
,43
<0,00115Mm %
Р4,770,042
,01
<0,054,570,037
,03
<0,05---
% - процент падения относительно контроля (5,02% раствор лактозы);
Р - достоверность относительно контроля.
Рисунок 2.2 Продолжительность действия 0,03% иммобилизованной в-галактозидазы на снижение концентрации лактозы (исходный раствор лактозы - 5%)
Выводы. 0,03% раствор в-галактозидазы, иммобилизованный на различных носителях, более эффективно снижает концентрацию лактозы, чем 0,01%. в-галактозидаза, иммобилизованная на лавсане, дала снижение концентрации в ее растворе на 44% за 1-е сутки; на 44,6% - за 2-е сутки и на 46,4% за 3-и сутки. Затем активность фермента стала уменьшаться примерно на 8,23% в сутки; и через 15 суток концентрация лактозы после гидролиза составила 95% от контроля (4,77 от 5,02%).
При гидролизе ферментом, иммобилизованным на асбесте, концентрация лактозы через 1 сутки снизилась на 42% по сравнению с контролем; через 2 суток - на 43,83%, а через 3 суток - на 40%. После активность фермента снижается в среднем на 5,24%. Через 15 суток концентрация лактозы снизилась с 5,02 до 4,31% и составила 85,85% от контроля.
Фермент, иммобилизованный на древесных опилках, при гидролизе проявил наибольшую эффективность: через 1 сутки концентрация лактозы упала на 69%, через 2 суток - на 58%, через 3 суток - на 57,8%. Однако активность иммобилизованной на опилках в-галактозидазы ниже, чем на других носителях. Активность снижается в среднем на 10,4% в сутки. Через 10 дней концентрация лактозы снижается лишь на 8% (с 5,02 до 4,64%).
Определить снижение содержание лактозы после ферментативного гидролиза иммобилизованным ферментом в 2-х концентрациях:
а) для цельного молока;
В 4 колбы вносили по 100мл свежего коровьего молока 2,5% жирности производства ОАО Энгельсский Молочный Комбинат. 1 колба - контроль - молоко без добавления фермента, а в остальные вносили по 10г носителя с предварительно иммобилизованным ферментом. Концентрация лактозы определялась рефрактометрическим методом через 3,6 и 24 часа. Результаты эксперимента представлены в таблицах 2.16 и 2.17.
Таблица 2.16 Изменение содержания лактозы в коровьем молоке под влиянием 0,01% иммобилизованной в-галактозидазы
Время измерения, чЗначенияКонтрольФермент, иммобилизованны