Разработка технологии иммобилизации B-галктозидазы и оценка её биологического действия на молоко и некоторые молочные продукты
Дипломная работа - Разное
Другие дипломы по предмету Разное
ованиями по транспортированию молочных продуктов транспортными пакетами. Автотранспорт должен иметь санитарный паспорт. Продукты должны храниться упакованными в ящики, уложенными штабелями по высоте не более 2м (для картонных ящиков - не более 1,3м). Укладка ящиков в штабели должна производиться с отступом от стен и от охлаждаемых батарей на 0,4м. Между сложенными штабелями оставляют проход шириной 0,8-1,0м. Нижние ящики должны укладываться на деревянные поддоны и решетки. Хранение продукта совместно с другими пищевыми продуктами (со специфическим запахом) в одной камере не допускается. Хранение продукта должно производиться при температуре от 0 до 10С и относительной влажности воздуха не более 85%. Срок годности продукта должен соответствовать требованиям, указанным в таблице 2.4:
Таблица 2.4 Срок годности сгущенного молока Семь гномов
Наименование продуктаВид упаковкиСрок годности, не более (мес)Семь гномовСтаканчики и коробочки из полимерных материалов (термичная упаковка)8
Энергетическая ценность 100г продукта, содержание пищевых веществ указаны в таблице 2.5:
Таблица 2.5 Энергетическая ценность сгущенного молока Семь гномов
Наименование продуктаЖир, гБелок, гУглеводы, гЭнергетическая ценность, ккалСемь гномов62245313
2.5. Собственные исследования
2.5.1 Материалы и методы исследования
Научно-исследовательская работа дипломного проекта была выполнена на базе лаборатории кафедры биотехнологии, органической и биологической химии СГАУ им. Н.И. Вавилова. Материалом исследования являлся биообъект - фермент микробиологического происхождения в?галактозидаза. В ходе выполнения работы было проведено две серии экспериментов. Во время первой серии экспериментов были выполнены следующие опыты: добавление фермента в-галактозидазы в концентрации 0,01%; 0,02% и 0,03% в свежее и сухое молоко, вареное и невареное сгущенное молоко; определение концентрации лактозы в молочных продуктах после ферментативного гидролиза.
Главным направлением второй серии экспериментов стала иммобилизация фермента в-галактозидазы и использование иммобилизованного фермента для ферментативного гидролиза лактозы в молочных продуктах. На основании этого можно выделись основные пункты задания:
. Подготовка носителей для иммобилизации.
. Оценка активности иммобилизованного фермента. Выявление неэффективных носителей.
. Оценка продолжительности действия иммобилизованного фермента на снижение концентрации лактозы.
. Определить снижение содержание лактозы после ферментативного гидролиза иммобилизованным ферментом в 2-х концентрациях:
а) для цельного молока;
б) для сухого молока.
. Внесение иммобилизованной в-галактозидазы в сгущенное молоко:
а) на стадии полуфабриката внести иммобилизованный фермент; провести ферментативный гидролиз и определить содержание лактозы в вареном сгущенном молоке;
б) определить концентрацию лактозы в вареном сгущенном молоке, приготовленном на молоке с гидролизованной лактозой.
Для определения концентрации лактозы в молоке и продуктах был выбран фотоколориметрический и рефрактометрический методы [5].
Определение концентрации лактозы фотоколориметрическим методом: 1 мл молока или кисломолочного продукта смешивают в колбе с 25мл дистиллированной воды. Добавляют 2 мл 1н раствора гидроксида натрия и помещают в мерную колбу на 100 мл. Перемешивают до растворения белков и доводят объем дистиллированной воды до метки. Раствор фильтруют, 1мл фильтрата смешивают с 1 мл 5% раствора фенола и 5 мл концентрированной серной кислоты. Определяют оптическую плотность на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре (л =490 нм), используя для сравнения контрольную колбу. Контрольной колбой является смесь 1 мл воды с 1 мл 5% раствора фенола ж 5 мл концентрированной серной кислоты.
Массовую долю лактозы в продукте рассчитывают по градуировочному графику, затем пересчитывают на 100 г продукта по формуле:
Л=С/100,
Где Л - массовая доля лактозы в исследуемом продукте, %,
С - концентрация лактозы в растворе для анализа по градуировочному графику, мкг/мл.
Для того, чтобы построить график, из 2% раствора лактозы готовят 0,2% раствор (реактив А). Из полученного раствора готовят следующие разведения:
Таблица 2.6 Концентрация лактозы и объем разведения
Объем, млКонцентрация лактозы, %Реактив АДистиллированная вода199202984039760496805951001090200158530020804002575500307060035657004060800
Для фотометрирования брали 1мл каждого разведения, смешивали с 1 мл 5% раствора фенола и 5мл концентрированной серной кислоты. Определяли оптическую плотность и строили градуировочный график.
Каждое измерение выполняли в 6 повторах. Для каждого опыта проводится статистическая обработка результатов анализа. Результаты приводятся в следующем виде: Mm, где
M=,
=,
К - средняя квадратичная ошибка,- число измерений.
Методика измерения оптической плотности на фотоэлектроколориметре.
Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2 предназначен для измерения коэффициентов пропускания и оптической плотности жидкостных растворов и твердых тел, а также для определения концентрации веществ в растворах методом построения градуировочного графика.
Измерение оптической плотности. В световой пучок поместить кювету с растворителем или контрольным раствором, по отношению к которому производятся измерения.
1.Закрыть крышку кюветного отделения.