Разработка технологии иммобилизации B-галктозидазы и оценка её биологического действия на молоко и некоторые молочные продукты
Дипломная работа - Разное
Другие дипломы по предмету Разное
2.Установить отсчет 100 по шкале. Поворотом ручки кювету с контрольным раствором заменить кюветой с исследуемым раствором.
.Снять отсчет по шкале Д в единицах оптической плотности.
.Измерение провести 3-5 раз и определить окончательное значение как среднее арифметическое этих измерений.
Рефрактометрический метод. Основан на способности молочной сыворотки по-разному преломлять проходящий через нее свет в зависимости от концентрации лактозы. Показатель преломления молочной сыворотки устанавливают по углу отклонения светового луча сывороткой, заключенной между призмами рефрактометра.
Предварительно готовят молочную сыворотку. В пробирку отмеривают 5мл свежего молока и добавляют 5 капель 4% хлорида кальция. Пробирку плотно закрывают пробкой и для полного осаждения белков ставят ее на кипящую водяную баню. Через 10мин пробирку вынимают из бани и охлаждают. Затем берут пипетку с ватным тампонов в нижней части и набирают сыворотку, фильтруя ее, таким образом, через вату.
Далее каплю прозрачной сыворотки наносят на поверхность нижней призмы рефрактометра. Производят отсчет и находят процентное содержание лактозы.
.5.2 Результаты собственных исследований
Первая серия экспериментов:
1. Цельное молоко. Для проведения опыта брали свежее коровье молоко 2,5% жирности. Добавляли фермент в-галактозидазу в 3-х концентрациях: 0,01; 0,02 и 0,03% и отмечали изменение концентрации лактозы через 3, 6 и 24 часа. Данные результатов исследования занесли в таблицу:
Таблица 2.7 Изменение содержания лактозы в коровьем молоке под влиянием в-галактозидазы
ГруппаВремя измерения, ч13624Контроль % % Р Р4,870,18 100 100 4,720,13 100 96,91 >0,054,560,11 100 93,63 >0,054,490,09 100 92,19 0,053,130,13 68,64 83,24 <0,001 <0,052,970,13 67,65 78,98 <0,001 <0,01
Примечания:
Контроль - концентрация лактозы в коровьем молоке.
- концентрация лактозы в коровьем молоке с 0,01%-ной в-галактозидазой.
- концентрация лактозы в коровьем молоке с 0,02%-ной в-галактозидазой.
- концентрация лактозы в коровьем молоке с 0,03%-ной в-галактозидазой.
Р - достоверность относительно контроля
Р - достоверность относительно первого часа наблюдения.
% - процент падения лактозы относительно контрольной пробы.
% - процент падения лактозы относительно первого часа наблюдения.
Выводы. Концентрация лактозы в коровьем молоке находится в пределах норм. В контрольной группе - коровьем молоке свежем без добавления фермента - изменение содержания лактозы с течением времени незначительное (4,870,18-4,490,09). При добавлении минимальной концентрации фермента (0,01%) через сутки концентрация лактозы снизилась до 3,390,17 и составила 78,65% от первоначальной. По сравнению с контролем процент падения равен 88,50% в начале опыта и 77,22% через сутки.
При добавлении 0,02% в-галактозидазы по сравнению с контролем процент падения увеличился (72,43% после окончания опыта), т.е. эта концентрация фермента более эффективна, чем 0,01%.
При добавлении 0,03% в-галактозидазы содержание лактозы резко падает по сравнению с контрольной группой (77,20% в начале опыта и 67,65% через 24 часа).
Можно сказать, что наиболее эффективная концентрация лактозы в коровьем молоке - 0,03%, с ее введением удалось добиться снижения концентрации лактозы на 32,35%.
. Сухое молоко. Количество сухих веществ в коровьем молоке составляет 10-14%. Необходимо определить, в каком соотношении разводить сухое молоко, чтобы добиться консистенции коровьего.
а) берем 3 тигля, нумеруем и взвешиваем.
Масса тигля № 1 = 17,8г.
Масса тигля №2 = 18,4г.
Масса тигля №3 = 17,1г.
б) прибавляем в тигли по 10г сухого молока:
Масса тигля №1 = 27,8г.
Масса тигля №2 = 28,4г.
Масса тигля №3 = 27,1г.
в) ставим тигли в термостат (100-110СФC) и высушиваем до постоянной массы. После охлаждения в эксикаторе проводим повторное взвешивание:
Масса тигля №1 после сушки = 27,0г.
Масса тигля №2 после сушки = 27,5г.
Масса тигля №3 после сушки = 26,4г.
г) определим постоянную массу сухого молока (разность массы тигля после сушки и массы пустого тигля):
Тигель №1 = 9,2г.
Тигель №2 = 9,1г.
Тигель №3 = 9,3г.
Масса сухого молока = 9,2г.
Количество сухих веществ в сухом молоке чуть меньше, чем в свежем коровьем. Для разведения брали 15г сухого молока и 85мл дистиллированной воды.
Повторили все операции пункта 1 для сухого молока. Данные результатов исследования занесли в таблицу.
Таблица 2.8 Изменение содержания лактозы в сухом молоке под влиянием в-галактозидазы
ГруппаВремя измерения, ч13624Контроль % % Р Р4,690,12 100 100 4,480,04 100 95,52 >0,054,350,14 100 92,75 >0,054,220,21 100 89,97 >0,051 % % Р Р4,650,17 99,14 100 0,052,930,17 67,35 78,76 <0,001 <0,012,290,08 54,26 61,56 <0,001 <0,001
Примечания:
Контроль - концентрация лактозы в коровьем молоке.
- концентрация лактозы в сухом молоке с 0,01%-ной в-галактозидазой.
- концентрация лактозы в сухом молоке с 0,02%-ной в-галактозидазой.
- концентрация лактозы в сухом молоке с 0,03%-ной в-галактозидазой.
Р - достоверность относительно контроля.
Р - достоверность относитель