Geum.ru

Под общей редакцией проф. Малого В. П., проф. Кратенко И. С. Харьков 2008

Вид материалаДиплом

Содержание


Ненько А.М., Дерябин А.В., Андрианов А.А.
Непомнящих Т.С., Гилева И.П., Гражданцева А.А., Лебедев Л.Р., Щелкунов С.Н.
Подобный материал:
1   ...   113   114   115   116   117   118   119   120   ...   188

Ненько А.М., Дерябин А.В., Андрианов А.А.

Центральный детский клинический санаторий Министерства обороны Украины, г. Евпатория


Инфекционные осложнения в области хирургического вмешательства у детей при плановых ортопедических операциях составляет 9-12%. Наиболее эффективной профилактикой послеоперационных осложнений считается применение антибиотиков в пери-операционном периоде. Практикуемое нами назначение 2-7 дневных курсов антибиотикотерапии за последние 6 лет были малоэффективными.

В санатории хирургическое лечение детей с органическими поражениями нервной системы проводится с 1950 года – детский церебральный и акушерский паралич, последствия травм и нейроинфекций, спинно-мозговые грыжи. Из оперативных вмешательств с целью коррекции контрактур и деформаций применялись вмешательства на сухожильно-мышечном аппарате (удлинения, дезинсерции, перемещения) и костно-пластические (трехсуставная резекция костей, межвертельные, подвертельные деторсионные остеотомии, деротационные и корригирующие остеотомии длинных трубчатых и мелких костей, компрессионные артродезы и лавсанодезы) с применением металлических конструкций, компрессионно-дистракционных аппаратов Илизарова и стержневых аппаратов внешней фиксации. За указанное время прооперировано 3850 больных детей в возрасте 4-16 лет. На наш взгляд развитие постхирургических инфекций у оперированных нами детей зависит от вирулентности микрофлоры, состояния защитных функций детского организма, типа операции и ряда факторов, известных как «факторы риска».

По нашему практическому опыту все больные дети с органическими поражениями нервной системы имеют как минимум 2-3 фактора риска развития инфекционных осложнений в послеоперационной ране. Этому контингенту больных детей мы проводили пери-операционную профилактику. Противопоказанием являлась поливалентная аллергия к антибиотикам. При выборе антибиотика ориентировались на фармакологические свойства, клиническую эффективность и стоимость препарата. Предпочтение было отдано «Цефтриаксону» из-за фармакокинетических свойств: высокие сывороточные концентрации, хорошее проникновение в ткани, наибольшее время полужизни среди всех цефалоспориков (до 24 часов), что весьма важно для детского возраста с 1 разовым введением в сутки. Антибиотик нами применялся по схеме: за 30 мин. – 1 час до операции внутривенно вводится 1-2 гр. цефтриаксона в зависимости от массы тела и возраста больного ребенка. При реконструктивных костно-пластических операциях длительностью более 2-х часов, дополнительно вводили четверть первоначальной дозы цефтриаксона внутривенно. За последние 6 лет нами выполнено более 1500 оперативных вмешательств у 410 больных детей с органическими поражениями нервной системы. Нагноение послеоперационных ран отмечено у 4 (менее 1%).

Таким образом, профилактика антибиотиком широкого спектра в единичной дозе значительно уменьшает риск раневой инфекции и ранней нозокоминальной инфекции после хирургических вмешательств у детей с органическим поражением нервной системы, является антибиотиком выбора и может быть рекомендована для детских хирургических, ортопедических стационаров. Отсутствие побочных эффектов подчеркивает ее преимущество перед ранее проводимыми традиционными курсами профилактической антибактериальной терапии.


Изучение свойств рекомбинантного Фно-связывающего белка вируса натуральной оспы и его химеры с фрагментом тяжелой цепи IgG в качестве блокатора биологической активности ФНО

Непомнящих Т.С., Гилева И.П., Гражданцева А.А., Лебедев Л.Р., Щелкунов С.Н.

Федеральное государственное учреждение науки ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотренбнадзора


Фактор некроза опухолей (TNF) является одним из ключевых цитокинов воспалительного ответа, однако его гиперпродукция приводит к ряду заболеваний человека, таких как болезнь Крона, ревматоидный артрит, псориаз и других [1]. Тяжелой патологией, обусловленной высоким уровнем TNF и часто завершающейся летальным исходом, является септический или бактериально-токсический шок [1]. Одним из направлений разработки терапевтических средств для коррекции этих иммунопатологий является создание препаратов, связывающих данный цитокин.

На основе гена TNF-связывающего белка (CrmB) вируса натуральной оспы (VARV) и фрагмента гена тяжелой цепи иммуноглобулина G1 (IgG1) человека (h) получили рекомбинантный бакуловирус, детерминирующий синтез химерного белка VARV-CrmB/IgG1 в клетках насекомых линии Sf21. Рекомбинантный белок выделили методом аффинной хроматографии из культуральной среды инфицированных клеток. Биологическую активность VARV-CrmB/IgG1 изучали в сравнении с белком VARV-CrmB (2, 3) in vitro по его способности нейтрализовать цитотоксическое действие человеческого и мышиного (m) TNF на культуру клеток L929. Было показано, что добавление иммуноглобулинового домена не влияет на эффективность нейтрализации in vitro цитотоксического действия hTNF и mTNF VARV-CrmB.

Провели сравнение эффективности нейтрализации цитотоксичности hTNF in vitro некоторыми TNF-антагонистами [препарат REMICADE (infliximab), растворимые клеточные рецепторы TNF I-го и II-го типов] и полученными вирусными белками. Оказалось, что в используемом тесте TNF-нейтрализующая активность рекомбинантных вирусных белков на два порядка превышает аналогичную активность растворимых клеточных рецепторов и несколько уступает активности препарата REMICADE. Также согласно литературным данным (R&D system catalog, США) биологическая активность химерного рекомбинантного человеческого рецептора TNF II-го типа с фрагментом тяжелой цепи IgG соответствует биологической активности полученных нами белков VARV-CrmB/IgG1 и VARV-CrmB.

Полученные in vitro данные позволили нам использовать VARV-CrmB и его химерный аналог в эксперименах in vivo для изучения его влияния на выживаемость мышей при развитии экспериментального эндотоксического шока. Мыши, получившие инъекции бактериального липополисахарида (ЛПС), становились вялыми и малоподвижными, с взъерошенной и влажной шерстью. В течение 72 ч наблюдения смертность животных составила 80-100 %. Эти изменения, а также выявленная нами ранее гистологическая картина внутренних органов экспериментальных животных [4] соответствуют таковым, описанным в литературе при развитии экспериментального эндотоксического шока у мышей [5]. Как было показано нами ранее [4], в сыворотках крови мышей в течение 1 ч после индукции шока концентрация TNF резко возрастала, затем постепенно снижалась и достигала уровня контрольных образцов к 24 ч наблюдения. Эти данные свидетельствуют, что в используемой нами модели после введения ЛПС наблюдается быстрый ответ, выражающийся в суперпродукции TNF. При введении рекомбинантных VARV-CrmB (0,2 или 2 мкг/мышь) выживаемость животных увеличилась до уровня 47 + 6,7 % и 62 + 8,6 %, а при введении VARV-CrmB/IgG1 (0,4 или 4 мкг/мышь) - до 56 + 7,2 % и 70 + 9,7 %, соответственно. Как видим, химерный белок VARV-CrmB/IgG1 обусловливал больший терапевтический эффект. Хотя химерный белок VARV-CrmB/IgG1 не изменяет свою активность по нейтрализации цитотоксического действия TNF in vitro, при терапевтическом воздействии на модели эндотоксического шока он проявляет больший эффект по сравнению с прототипным белком VARV-CrmB. Возможно, это обусловлено большей стабильностью химерного белка in vivo.

Также ранее нами было проведено патоморфологическое исследование внутренних органов животных, которым вводили белок VARV-CrmB на фоне ЛПС-индуцированного шока. Было показано, что введение препарата не предотвращает развития морфологической картины шока, однако ослабляет тяжесть его протекания с последующей нормализацией внутренних органов экспериментальных животных [4].

Представленные данные позволяют надеяться, что белок VARV-CrmB и его химерный аналог могут стать основой для разработки нового класса TNF–антагонистов для терапии заболеваний человека, связанных с нарушениями обмена TNF, в частности для такого тяжелого состояния как септический шок.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант 06-04-48074).

Литература:

1. Непомнящих Т.С и др. (2007). Успехи современной биологии. 127: 576-587.

2. Гилева И.П. и др. (2005) Молекулярная биология 39:245-254.

3. Gileva I.P. et al. (2006). Biochimica et Biophysica Acta. 1764: 1710–1718.

4. Гилева И.П. и др. (2006). Цитокины и воспаление. 5: 44–48.

5. Черствой Е.Д и др. (1990). Арх. патол. 9: 51-56.