Симбионтное пищеварение у кроликов и пути увеличения использования углеводов кормов
Диссертация - Сельское хозяйство
Другие диссертации по предмету Сельское хозяйство
ь на зерновой диете. Во 2 и 3 периодах кролики в качестве единственного корма получали соответственно сено и траву луговую. В качестве контроля принят типовой рацион, состоящий из концентратов, сена и корнеплодов и содержащий 16% клетчатки.
Химус слепой кишки отбирался для анализа через фистулу 6 раз в сутки - в 1, 5, 9, 13, 17 и 21 час. Численность бактерий, количество кокков и грампозитивных палочек определялись по методу Брида с фиксированных и окрашенных по Грамму мазков.
Кроме этого в настоящем опыте нами исследовалась и численность отдельных групп бактерий, гидролизующих различные субстраты.
Подобные эксперименты, несмотря на очевидное значение для понимания функциональной роли микрофлоры, в особенности, в отношении расщепления клетчатки, в литературе весьма немногочисленны.
Данная задача решалась культуральными методами с использованием анаэробной техники Хангейта (Hungate R., 1969).
Количество молочнокислых, амилолитических, лактатферментирующих и использующих мочевину бактерий подсчитывали методом roll tube culture, соответственно на средах Рогозы, Хамлина, Кистнера и Долгова (Тараканов Б.В., 1972; Humlin L.J. et al., 1956; Долгов И.А., 1987); целлюлозолитических и протеолитических - методом предельных разведений на среде Хангейта (Hungate R., 1950) и лакмусовом молоке.
Для разведения использовали раствор Дейтча (Doetsch R.N. et al., 1952). Вместо рубцовой жидкости, применяемой в оригинальных средах, использовали осветленный центрифугированием химус слепой кишки (1 часть химуса: 4 части воды), вносимый в среды в количестве 10%.
Косвенным показателем брожения в слепой кишки, а следовательно и переваривания клетчатки, служит показатель рН.
Однако взаимоотношения этого показателя со степенью деградации клетчатки пока не выяснены. Ни концентрация, ни тип сены люцерны в стандартных рационах не привели к изменению рН (Pote L.M. et al, 1980; Champe V.A. et al., 1983; Gidenne T. et al, 1991; Garcia J. et al, 1995). При значительной же замене зерна люцерновым сеном и соломой наблюдалось увеличение величины рН (Bellier R. et al., 1996).
С другой стороны, увеличение в рационе доли сахарной свеклы повысило кислотность химуса (Garcia J. et al, 1992, 1993; Carabano R. et al, 1997). рН химуса в нашем опыте определяли потенциометрически.
Еще одним показателем, характеризующим интенсивность процессов брожения в слепой кишке является концентрация ЛЖК, которая определялась нами методом паровой дистилляции в аппарате Маркгама с последующей разгонкой кислот на газовом хроматографе.
Регистрировались также показатели азотистого обмена: общий азот - по Къельдалю; белковый - по разнице между общим и небелковым азотом после осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты; азот мочевины - колориметрическим методом Беляева и Калмыкова (1971), и активность различных ферментов: амилазы - фотометрически (Асатиани В.С., 1965); протеаз - методом Мура и Стейна в модификации Уголева (1969), основанном на учете количества освобожденных L-аминокислот по реакции с нингидрином (субстрат - казеин по Гаммерстену); уреазы - по Самнеру и Соммерсу с последующим определением аммиака по Расселу; эндоглюканазы - вискозиметрически, по начальной скорости уменьшения относительной вязкости раствора карбоксиметилцеллюлозы (Клесов А.А. с соавт., 1980); липазы - титрометрическим методом Альтгаузена.
Определялась также суммарная целлюлозолитическая активность микрофлоры методом in vivo. Результаты исследований приведены в таблицах 25, 26 и 27.
Таблица 25 - Бактерии слепой кишки
ПоказателиРационТиповой (контроль)зерновойсеннойтравянойСухое вещество (СВ), ,81,3723,62,2917,21,1517,50,55Общая численность бактерий, млрд./ г В расчете на сухое вещество36,53,08 182,5 15,4541,52,97 172,9 21,3827,63,15 165,4 16,7237,21,29 218,7 18,41Из них, %:Грампозитивных палочек29,2 1,6732,5 1,24 20,8 1,3641,3 2,27Кокков9,30,2717,01,185,10,5417,11,74Из них, млн./гМолочнокислых4,31,09 25,13,752,90,969,71,20Амилолитических237,1 17.431860,4 213,81109,3 6,5222,6 5,34Целлюлозолитических6,70.530,50,6810,81,3321,03,42Лактатферментирующих197,4 12,64146,6 15,3885,2 10,50102,5 8,19Протеолитических80,4 10,63107,6 25,3135,8 2,5759,0 7,45Использующих мочевину54,2 4,7096,2 11,327,5 1,5715,8 2,06
Как свидетельствуют данные таблицы 25, самая низкая численность бактерий (в расчете на сухое вещество) зарегистрирована на сенной диете, характеризующейся наименьшей доступностью питательных компонентов вследствие медленной ферментации клеточных оболочек.
В составе биоценоза при этом достоверно уменьшилась по сравнению с контролем доля граммположительных палочек (р<0,02) и кокков (р<0,01), то есть тенденция, наблюдаемая при повышении уровня клетчатки в рационе, в данном случае проявилась в виде отчетливой закономерности.
На зерновом корме, несмотря на значительно большую концентрацию в нем энергии и переваримых питательных веществ, содержание симбионтов в химусе слепой кишки также было ниже чем в контроле, очевидно, вследствие обеднения видового состава. Преимущественное развитие при этом получили более кислототолерантные кокковые формы бактерий (в основном представители рода Peptococcus). Их численность достоверно (р<0,01) увеличилась и превысила значения, наблюдаемые у 30-суточных крольчат.
При кормлении свежей зеленой массой, содержащей большое количество растворимых углеводов, главным образом глюкозы, фруктозы и сахарозы, общее количество микроорганизмов возросло по сравнению с контрольным значением в 1,2 раза, доля граммпозитивных палочек - в 1,4 (р<0,02), кокков - в 1,8 (р<0,01) раза.
Что же касается соотношения в симбиоценозе сле?/p>