«Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. В. А. Алмазова Федерального агентства по оказанию высокотехнологичной медицинской помощи»
| Вид материала | Автореферат |
- Редукция полости левого предсердия при хирургической коррекции порока митрального клапана, 235.93kb.
- Особенности структурно-функциональных изменений миокарда и нарушения сердечного ритма, 287.4kb.
- Работа выполнена в Военно-медицинской академии им., 699.27kb.
- Ишемического инсульта, 630.79kb.
- «Уральский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. В. Д. Чаклина, 485.31kb.
- «Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального, 434.13kb.
- Актуальные вопросы аритмологии, 88.42kb.
- Организация специализированной ортопедической помощи больным остеоартрозами тазобедренного, 840.56kb.
- «Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова», 845.84kb.
- Гусаева ханум замрутдиновна современные аспекты патогенеза, диагностики и лечения сочетанных, 556.52kb.
2.3. Оценка обезболивающего действия препарата «Аноцептин» и анальгина в условиях теста «горячая пластина»
Эксперименты показали, что препарат «Аноцептин» при внутривенном введении проявляет выраженное аналгезирущее действие (Таблица 1). Обнаружено, что обезболивающее действие аноцептина в условиях используемого теста имеет дозозависимый характер в диапазоне доз от 5 до 50 мг/кг (Таблица 1). Средняя эффективная доза препарата «Аноцептин» составила 25мг/кг. Латентный период появления двигательного беспокойства и прыжковой активности у животных, получивших аноцептин в дозе 5 мг/кг, или анальгин в дозе 50 мг/кг достоверно не отличались. В дозах 10 мг/кг и 50 мг/кг исследуемый препарат по болеутоляющей активности достоверно превосходил анальгин (50 мг/кг). Эффективность аналгезии в условиях теста «горячая пластина» сохранялась в течение 2-х часов после инъекции препарата «Аноцептин (Таблица 1).
Таблица 1. Влияние препарата «Аноцептин» и анальгина на болевую чувствительность мышей в условиях теста «горячая пластина», М±m
| Препарат, доза | Латентный период (секунды) | ||
| 30 мин | 60 мин | 120 мин | |
| Контроль (1,1% раствор соды) | 10,5±0,9 | 10,8±0,6 | 11,1±0,8 |
| Аноцептин, 5 мг/кг | 22,0±1,1* | 21,7±0,7* | 22,3±0,8* |
| Аноцептин ,10 мг/кг | 31,8±0,7* | 32,5±1,4* | 33,7±1,2* |
| Аноцептин ,50 мг/кг | 37,0±1,6* | 37,2±1,9* | 38,2±1,8* |
| Анальгин , 50 мг/кг | 20,1±0,6* | 22,1±1,8* | 22,5±0,9* |
*— достоверные различия с контролем, Р<0,05
2.4. Исследование свойств препарата «Аноцептин» и оуабаина в условиях формалинового теста
Формалиновый тест позволяет проследить реакции организма крысы на протяжении всего пути передачи ноцицептивного сигнала (Abbott F., Guy E., 1995; Clavelou P., et al., 1995; Hong Y., Abbott F, 1995). Во время эксперимента, после подкожной инъекции 5% раствор формалина, у животных контрольной и экспериментальной групп наблюдали два вида боли: острую и тоническую. Первая фаза формалинового теста характеризует острую боль, возникающую в ответ на инъекцию химического раздражителя (длится около 5 мин). Вторая фаза теста позволяет оценить тоническую боль, возникающую вследствие воспаления от действия формалина (время наблюдения 60-90 мин). Межфазный интервал составил около 10 мин. В этот период животное находилось в покое.
Контрольную группу составили 8 крыс, которым внутрибрюшинно вводили физиологический раствор. 11 экспериментальным крысам, внутрибрюшинно вводили аноцептин в дозе 35 мг/кг. Инъекция аноцептина (35 мг/кг) полностью подавила ответ на введение формалина у 4 из 11 крыс. У этих животных обезболивающее действие препарата фактически составило 100%. У 7 животных инъекция препарата вызвала подавление первой или второй фазы ответа. Обе фазы ответа (первая фаза характеризует острую боль, вторая – тоническую), оцениваемые на спинальном уровне по паттернам «сгибание+встряхивание» (Abbott F., Guy E., 1995; Буткевич И.П., 2009), обнаружены у всех контрольных крыс и только у 4 животных, получивших инъекцию аноцептина. Болевая чувствительность в ответ на острую боль в контроле составила 17,1±0,3 (n=8), у экспериментальных животных она снизилась до 15,3 ±0,1 (n=4).
Обезболивающее действие аноцептина по отношению к тонической боли, возникающей при воспалении, было более значительным. В контроле болевая чувствительность на спинальном уровне составила 294,6±1,4 (n=8). Применение аноцептина достоверно снижало болевую реакцию до 93,7 ±0,4 (n=4; р<0,05).
Ощущение боли на супраспинальном уровне характеризует длительность паттернов вылизывания (Abbott F., Guy E., 1995; Буткевич И.П., 2009). Животные, у которых имелись обе фазы ответа, отсутствовали. У 6 из 7 экспериментальных животных ответ на острую боль, которую характеризует первая фаза формалинового теста, на супраспинальном уровне не наблюдался, то есть инъекция аноцептина вызывала 100% обезболивание.
Вторая фаза формалинового теста, отражает тоническую боль, возникающую при воспалении, и на супраспинальном уровне наблюдалась только у 3 экспериментальных животных. У контрольных животных болевая реакция была 219,5±0,9 (n=8). Применение аноцептина снижало болевой ответ до 204,7 ±1,1 (n=3).
Практически полное блокирование комплекса реакций нервной системы крысы, возникающего в ответ, как на острую, так и на тоническую боль на спинальном и супраспинальном уровне, у животных является доказательством глубоких изменений в процессе передачи и рецепции ноцицептивной информации, развивающихся под влиянием аноцептина. Статистическая обработка результатов экспериментов показала их (статистическую значимость). Таким образом, аноцептин проявляет выраженное аналгетическое действие и модулирует ноцицептивный сигнал, как на периферии, так и в центральных структурах. Средняя эффективная доза препарата составила 17,5 мг/кг. Аналгетический эффект развивался через 4 минуты после инъекции и сохранялся до 6 часов.
Анализ результатов, полученных в условиях формалинового теста, и в тесте «горячая пластина», позволил обнаружить, что аналгетические свойства разработанного препарата на спинальном уровне реализуются после его внутривенной или внутрибрюшинной инъекции в дозе 5 мг/кг. В дозе 50 мг/кг аноцептин купирует болевой синдром в целом. Получены экспериментальные доказательства, подтверждающие способность препарата «Аноцептин» проникать через гематоэнцефалический барьер и адекватность применения инъекционной лекарственной формы.
Внутрибрюшинная инъекция оуабаина в дозе 0,3 мг/кг вызывала достоверное снижение болевой чувствительности у крыс. На спинальном уровне оуабаин в 2 раза снижал реакцию крыс, развивающуюся в первой фазе формалинового теста в ответ на острую боль. Число паттернов сгибания+встряхивания в контроле составило 39,3±0,2, после инъекции препарата – 17,1±0,3 (n=6; p<0,05). Продолжительность паттернов вылизывания в первой фазе формалинового теста также снижалась с 30,6±0,3 в контроле до 21,3 ±0,1 (n=6). Исследование показало, что оуабаин достоверно уменьшает ответ организма крысы на ноцицептивный раздражитель на фоне острой боли на спинальном уровне. На супраспинальном уровне обезболивающее действие гликозида в первой фазе формалинового теста, оцениваемое по изменению продолжительности паттернов вылизывания, выражено менее.
Обнаружено, что гликозид регулирует восприятие ноцицептивного стимула на спинальном и супраспинальном уровне, на фоне болевой реакции, возникающей при воспалении. Оуабаин в 5 раз уменьшал число паттернов сгибания+встряхивания (354,3±59 в контроле; 71,7±13,6 в эксперименте, n=6; p<0,05) во вторую, тоническую фазу ответа в формалиновом тесте и продолжительность паттернов вылизывания в 4 раза (158,5±24,9 в контроле; 42,8±17,9 в эксперименте, n=6; p<0,05). Необходимо отметить, что у всех экспериментальных животных был выявлен не только аналгетический, но и седативный эффект препарата. Таким образом, in vivo нашла подтверждение гипотеза о том, что оуабаин в низких, сопоставимых с эндогенными, концентрациях может оказывать болеутоляющее действие.
С помощью формалинового теста доказана возможность регуляции ноцицептивного сигнала in vivo, в основе которой лежит фармакологическая модуляция сигнальной функции Nа+,К+-АТФазы.
Общим свойством препаратов, вызывающих лекарственную зависимость, является интенсификация реакции самостимуляции (СС) (Буров Ю.В., Борисенко С.А., 1978; Звартау Э.Э., 1979; Звартау Э.Э., Паткина Н.А., 1974; Шабанов П.Д., Штакельберг О.Ю., 2001; Carlezon W.A., Wise R.A., 1993). Поэтому, чтобы оценить возможность формирования физической зависимости от применения препарата «Аноцептин», было проведено специальное исследование.
2.5. Исследование возможности формирования физической зависимости от применения препарата «Аноцептин» с помощью метода стимуляции латерального гипоталамуса
В опытах на крысах оценивали реакцию СС структур мозга, входящих в систему положительного подкрепления гипоталамуса. Аноцептин угнетал реакцию СС латерального гипоталамуса в дозах 1, 10 30 мг/кг. Внутрибрюшинная инъекция препарата достоверно снижала вознаграждающий эффект СС. Действие аноцептина было пропорционально его дозе. В дозе 1 мг/кг препарат практически не влиял на реакцию СС. Аноцептин в дозе 10 мг/кг угнетал реакцию СС. Число нажатий на педаль было ниже контрольного значения на 12%. Максимальный эффект обнаружен при инъекции аноцептина в дозе 30 мг/кг. Препарат уменьшал число нажатий на педаль на 40% по сравнению с контролем. Ослабление реакции СС, вызванное препаратом, проявлялось сразу после его инъекции. Таким образом, обнаружено, что аноцептин не вызывает усиления реакции СС, а, наоборот, подавляет ее. Такой же подавляющий эффект исследуемого препарата на реакцию СС был получен при повторных его инъекциях. Исследование показало, что физическая зависимость от введения препарата «Аноцептин отсутствует.
2.6. Эффективность препарата «Аноцептин» при лечении экспериментальных туберкулезных хориоретинитов
Поскольку коменовая кислота, действующая субстанция препарата «Аноцептин», наибольшую тропность проявила в отношении тканей нейронального происхождения, для экспериментов по дальнейшему исследованию фармакологической активности препарата «Аноцептин» была выбрана модель туберкулезного хориоретинита (Беллиндир Э.Н., 1971). Эта модель объединяет в себе компонент воспаления и элементы деструктивных изменений в клетках ткани сетчатки.
2.6.1. Действие «Аноцептина» на M.tuberculosis in vitro.
Антимикробным действием на M. tuberculosis препарат «Аноцептин» в дозах от 200 до 1,56 мкг/мл не обладал.
Предварительные исследования показали, что аноцептин при парабульбарном введении не проявляет раздражающих свойств, не оказывает негативного влияния на структуры переднего отрезка глаза. Инъекции препарата были безболезненными.
2.6.2. Результаты эффективности лечения экспериментальных туберкулезных хориоретинитов по офтальмоскопическим признакам
Эффективность лечения экспериментальных хориоретинитов оценивали по офтальмоскопическим признакам и гистоморфологической картине. Эффективность проводимой терапии в основной серии для размера очага составила 25%, для уровня проминенции 130%, для уровня экссудации 124%. В контрольной серии значения этих параметров составили 4%, 53% и 109%, соответственно. У животных контрольной серии сохранялись помутнения и инфильтрация в стекловидном теле. Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат «Аноцептин» достоверно повышает эффективность ПТТ по всем исследуемым параметрам и сочетается с антибиотиками. Для проявления противовоспалительных свойств необходим курс препарата. Эффект, в отличие от аналгетического, развивается не сразу.
2.6.3. Результаты гистологических исследований тканей глазного дна экспериментальных животных с туберкулезными хориоретинитами
Анализ 164 гистоморфологических срезов, полученных с 40 глаз кроликов опытной и контрольной серий, показал, что во всех глазах присутствовали туберкулезные гранулемы в хориоидее, которые располагались рядом с диском зрительного нерва или миелиновым волокном. Изменения сетчатки просматривались на препаратах всех глаз; основные изменения касались вершины очага, где сетчатка была частично, либо полностью разрушена, с деструкцией пигментного эпителия. В 33 % случаев в основной серии исследования пигментный эпителий имел свою нормальную структуру даже на периферии очага, а в 90% - в перифокальной зоне, что не наблюдалось ни в одном случае контрольной серии. В гистологических срезах контрольной серии определялась деструкция пигментного эпителия с выходом пигмента из клеток.
Изучение фармакологической активности препарата «Аноцептин» in vivo позволило выявить и оценить его болеутоляющее действие и обнаружить противовоспалительные и трофотропные свойства.
Для того чтобы рекомендовать препарат для применения в клинических условиях, необходимо было оценить безопасность его действия.