«Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. В. А. Алмазова Федерального агентства по оказанию высокотехнологичной медицинской помощи»

Вид материала

Автореферат

Содержание 1.13. Оценка пирогенности препарата «Аноцептин» 1.14. Материалы и методы, используемые при изучении фармакокинетики препарата «Аноцептин» 1.14.1. Методика оценки фармакокинетических показателей у здоровых добровольцев. Анализ фармакокинетических данных

Подобный материал:

• Редукция полости левого предсердия при хирургической коррекции порока митрального клапана, 235.93kb.
• Особенности структурно-функциональных изменений миокарда и нарушения сердечного ритма, 287.4kb.
• Работа выполнена в Военно-медицинской академии им., 699.27kb.
• Ишемического инсульта, 630.79kb.
• «Уральский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. В. Д. Чаклина, 485.31kb.
• «Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального, 434.13kb.
• Актуальные вопросы аритмологии, 88.42kb.
• Организация специализированной ортопедической помощи больным остеоартрозами тазобедренного, 840.56kb.
• «Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова», 845.84kb.
• Гусаева ханум замрутдиновна современные аспекты патогенеза, диагностики и лечения сочетанных, 556.52kb.

1.13. Оценка пирогенности препарата «Аноцептин»

Для испытаний препарат подогревали до 37°C и асептически вводили в ушную вену 3 кроликов в дозе 0,5 мл/кг медленно за 30 секунд. Температуру у кроликов измеряли электрическим медицинским термометром ТПЭМ-1 (допустимая основная погрешность от диапазона измеряемых температур ±1%) в фоне (до начала исследования) и три раза с промежутками в 1 час после введения.

1.14. Материалы и методы, используемые при изучении фармакокинетики препарата «Аноцептин»

Исследование проведено на 2-х беспородных собаках-самцах массой 23,3 и 24,5 кг, возраст 3-4 года (питомник «Рапполово»). Обе собаки получили внутривенно по 5 мл 2% аноцептина (общая доза 100 мг). Забор крови осуществляли до введения препарата, сразу после введения на 3–4 минуте, и далее через увеличивающиеся интервалы времени вплоть до 24 ч. Исследование проведено на образцах гепаринизированной плазмы крови. Количественное определение коменовой кислоты производили методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием. Работа выполнена на приборе «Gold System» (Beckman, США), включающем двойной насос (модель 126), спектрофотометрический детектор (модель 166), компьютер (486 DX4). Для описания фармакокинетики препарата в плазме крови были привлечены стандартные показатели (в их условных обозначениях, принятых в литературе (Соловьев В.Н. и др., 1980; Пиотровский В.К., 1985).

1.14.1. Методика оценки фармакокинетических показателей у здоровых добровольцев. Анализ фармакокинетических данных

В исследовании приняли участие 12 здоровых добровольцев, подписавших форму информированного согласия и соответствующих критериям включения в исследование. Все 12 человек были одновременно госпитализированы в стационар Института мозга человека РАН.

Аноцептин вводили внутривенно в общей дозе 60 мг. Образцы плазмы крови отбирали через 10, 20 и 30 мин, а также 1, 2, 4, 6, 8 и 10 часа после введения исследуемого вещества. Кроме того, у каждого из испытуемых брали одну пробу перед введением препарата и одну пробу через 1,5–3,0 мин после инъекции. Отбор образцов крови осуществляли в стеклянные гепаринизированные пробирки через катетер, введенный в вену. Объем каждой пробы составил 8 мл. Определение концентрации препарата в плазме крови проводили с помощью метода, разработанного на стадии доклинических исследований. Для описания фармакокинетики препарата использованы стандартные показатели (Соловьев В.Н. и др., 1980; Пиотровский В.К. 1985; Беллман Р., 1987). Исследование было выполнено на базе психиатрического отделения Института мозга человека РАН совместно с Ю.И.Поляковым и И.К. Журкович.


РЕЗУЛЬТАТЫ

2.1. Исследование влияния оуабаина на потенциалочувствительность активационного воротного устройства медленных Na_v1.8-каналов сенсорных нейронов спинальных ганглиев млекопитающих

Согласно рабочей гипотезе сигнальную (трансдукторную) функцию Na⁺,K⁺-АТФазы можно регулировать двумя путями: 1) непосредственно, когда мишенью атакующей молекулы – молекулы оуабаина – служит сама Na⁺,K⁺-АТФаза; 2) со стороны рецептора – фармакологическим агентом в этом случае может являться коменовая кислота либо лекарственный препарат, изготовленный на ее основе. Для доказательства первого предположения с помощью метода локальной фиксации потенциала исследовали влияние оуабаина (от 1 пмоль/л до 200 мкмоль/л) на величину эффективного заряда (Z_eff) активационного воротного устройства медленных натриевых каналов Na_v1.8 сенсорных нейронов спинальных ганглиев новорожденных крысят. В контроле эффективный заряд составил 6,67±0,59 (n=15). Экстраклеточное приложение 1 пмоль/л оуабаина на эффективный заряд практически не влияло (Z_eff=6,33±0,38; n=12). Оуабаин в концентрации 100 пмоль/л снижал Z_eff до 5,06±0,33 (n=11). Аппликация 1 нмоль/л оуабаина вызывала снижение Z_eff до 4,83±0,37 (n=15), 10 нмоль/л до 4,29±0,23 (n=15), 1 мкмоль/л до 4,1±0,22 (n=10). K_D для оуабаина была рассчитана с помощью уравнения Хилла и составила 3 нмоль/л. Оуабаин в дозе 200 мкмоль/л на величину эффективного заряда и, как следствие, на потенциалчувствительность, активационного воротного устройства Na_v1.8 канала не влиял. Значение Z_eff не отличалось от контрольного и составило 6,67±0,57 (n=9). Исследование эффектов низких концентраций оуабаина показало, что влияние этого гликозида на эффективный заряд и, как следствие, на трансдукторную функцию Na⁺,K⁺-АТФазы носит монотонный дозозависимый характер в диапазоне от 1 пмоль/л до 1 мкмоль/л. Снижение величины эффективного заряда активационного воротного устройства медленных натриевых каналов сохранялось на фоне предварительно добавленного в наружный раствор налтрексона (50 мкмоль/л). Полученный результат свидетельствовал о существовании возможности модуляции сигнальной функции Na⁺,K⁺-АТФазы непосредственно, благодаря трансдуктор-опосредованному действию оуабаина. В аналогичных экспериментальных условиях обнаружено, что K_D для гидрохлорида морфина составляет 8 нмоль/л (Крылов Б.В. и др., 1999), а для производной гамма-пирона коменовой кислоты – 100 нмоль/л (Дербенев А.В. и др., 1999). Проведенные исследования и ранее полученные данные позволили предположить, что коменовая кислота и оуабаин, имея общее эффекторное звено активационное воротное устройство медленных натривевых каналов, могут регулировать ноцицептивные сигналы и влиять на процесс восприятия боли.

В основе действия обоих соединений лежит модуляция сигнальной функции Na⁺,K⁺-АТФазы мембраны сенсорных нейронов теплокровных. Эта функция фермента проявляется в регуляции процессов роста и пролиферации клеток тканей разных типов (Пеннияйнен В.А. и др., 2003; Xie Z., Askari A., 2002; Schiener-Bobis G., 2002; Schoner W., 2002a; Schoner W., 20002b; Schoner W., Schiener-Bobis G., 2005). Поэтому следующая часть работы была проведена in vitro при помощи метода органотипического культивирования ткани.