Geum.ru

Коррекция адаптационно компенсаторных механизмов гомеостаза больных с позиций системного подхода на курортном этапе реабилитации 14. 03. 11 восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия

Вид материалаАвтореферат

Содержание


Материалы и методы исследования
Рис. 1-Дизайн исследования
Распределение больных по нозологии и методам лечения
Полученные результаты исследования и их обсуждение
Подобный материал:
1   2   3   4

Материалы и методы исследования


Экспериментальный раздел выполнен в лаборатории клинико-диагностического отделения ЛПУП «Санаторий им. М.Ю.Лермонтова» (г.Пятигорск), а также на кафедре биологии, физиологии и патологии Пятигорской государственной фармацевтической академии. Клинические исследования больных проводились на базе санатория им. М.Ю.Лермонтова (рис. 1).




Рис. 1-Дизайн исследования



В качестве лабораторной модели использовали крыс-самцов линии Вистар, массой 160-220 грамм, стандартного вскармливания в количестве 274 особей, распределенных по группам: 1-контрольная (интактные животные), 2-животные получавшие изолированные ультразвуковые процедуры, 4 группы, получавших процедуры с мазевыми аппликациями изучаемых фитокомплексов и 4 группы животных, получавших сегментарный УФФ БАВ ОП, КД, ЛЛ благородного, а также смеси БАВ ЛЛ и КД.

В самом начале эксперимента путем хроматографии восходящим способом на силуфоле был изучен качественный и количественный (методом спектрофотометрии) состав препаратов ЛЛ, КД и ОП. Исследование проводилось до и после воздействия на фитопрепараты НЧ УЗ. Затем изучена проникающая способность БАВ данных лекарственных препаратов из фитомазей через полупроницаемые мембраны при воздействии НЧ УЗ. Для этого на стерильные стаканчики объемом 50 мл, заполненные до краев водой очищенной (Aqva purificata) натягивали полупроницаемые мембраны (пищевой целлофан и кожа крыс), наносили на них 1 г мази и воздействовали УЗ в течение 10 минут при интенсивности 0,4 Вт/см2. Для контроля проводили идентичное исследование, но без воздействия УЗ.

Отличием при исследовании мази ЛЛ благородного было то, что наличие компонентов фитопрепарата определяли не только в жидкости под естественной мембраной (кожей), но и в самой коже, на которую воздействовали УЗ. Кроме того исследования проводили не только после первой, но и после пятой процедуры фитофонофореза для определения возможности депонирования БАВ в коже.

Для изучения динамики возможных морфологических изменений в коже дорзальной поверхности шеи и печени у интактных животных и животных с ВИДС исследовались гистологические препараты, окрашенные гематоксилин-эозином. Вторичное иммунодефицитное состояние воспроизводили по методике Л.П.Сизякиной и др. (АС № 1205169 от 21.11. 1983).

Заключительным этапом эксперимента было изучение препаратов из кожи и печени после воздействия на животных НЧ УЗ, УФФ БАВ ОП, ЛЛ благородного, КД высокого и смеси ЛЛ и КД. Параллельно, с целью документирования полученных данных проводилось фотографирование гистологических препаратов цифровым фотоаппаратом.

Проведено обследование и лечение 361 больного ДРБТ (180 чел.) и ХВД (181 чел.), находившихся на лечении в санатории им.М.Ю.Лермонтова в течение 21 дня, из них мужчин – 43,1 %, женщин - 57, 2% в возрасте от 30 до 60 лет (82,3 %).

Диагноз устанавливался на основании имеющихся у пациентов санаторно-курортных карт и других документов с места отбора, данных клинического осмотра, а также общего анализа крови, биохимических, гормональных, иммунологических и функциональных исследований. Обследование проводилось в первые два дня их пребывания на курорте до, а также после курса санаторного лечения. Кроме того, исследовалось влияние однократных процедур фитофонофореза на первой и десятой процедурах. Катамнез изучался посредством анализа анкетных данных больных или путем их повторного наблюдения в санатории. Пациенты каждой из двух изучаемых групп были распределены на 6 рандомизированных подгрупп по 30 человек в зависимости от назначаемых лечебных комплексов ( табл.1).

Таблица 1.

Распределение больных по нозологии и методам лечения

 №

  
Группы больных
Количество больных

По

нозологии
По методам лечения
 всего

мужчин
женщин

Абс., чел.
Отн., %
Абс., чел.
Отн., %

1
ДРБТ
Плацебо

30
14
3,9
16
4,4

2
ХВД
Плацебо

31
11
3,1
19
5,3

3
ДРБТ
УЗТ

30
10
2,8
20
5,6

4
ХВД
УЗТ

30
13
3,6
17
4,7

5
ДРБТ
УФФ отрубей пшеницы
30
13
3,6
17
4,7

6
ХВД
УФФ отрубей пшеницы
30
16
4,4
14
3,9

7
ДРБТ
УФФ девясила

30
14
3,9
16
4,4

8
ХВД
УФФ девясила

30
13
3,6
17
4,7

9
ДРБТ
УФФ лавра
30
13
3,6
17
4,7

10
ХВД
УФФ лавра
31
10
2,8
21
5,8

11
ДРБТ
УФФ лавра-девясила
30
13
3,6
17
4,7

12
ХВД
УФФ лавра-девясила
30
15
4,2
15
4,2

Итого : 
361
155
43,1
206
57,2


Все пациенты были сопоставимы по полу, возрасту, клиническим проявлениям и данным клинического осмотра.

По данным функциональных исследований ДРБТ сочетались с хроническим бескаменным холециститом вне обострения у 38 (21,1%), с хроническим холецистопанкреатитом у 7 (4,0 %) , хроническими гастритами с пониженной, повышенной или сохраненной кислотообразующей функцией желудка 51 (28,3%) , ЯБ желудка и 12-перстной кишки 22 (12,2 %) больных. Хронический колит в фазе ремиссии (смешанной этиологии или вторичный) отмечен у 12 (6,67 %) наблюдаемых, дискинезии толстой кишки у 12 (6,7%). Сопутствующими заболеваниями других органов и систем были: синдром нейроциркуляторной дистонии (нейроциркуляторная астения) и гипертоническая болезнь I-II степени у 16(10,3%) и 18(11,1%) соответственно, первичный деформирующий остеоартроз у 42 (27%) пациентов.

В группе больных ХВД по клиническим проявлениям были выделены синдромы: цервикалгии, цервикокраниалгии, цервикобрахиалгии -38,4 %, торакалгии и люмбалгии в 21,5% и 40,1% случаев соответственно. В беих наблюдаемых группах наиболее частыми общими жалобами были жалобы на повышенную возбудимость и раздражительность (43,8%), общую слабость (16,9%), головные боли (38,2 %). Помимо традиционного клинико-лабораторного исследования у больных изучались основные виды обмена веществ: жирового (холестерина, β-липопротеидов, триглицеридов), пигментного (билирубин), углеводного (глюкоза, α-амилиаза), белкового (СРБ, серомукоид, фибриноген, креатинин, мочевая кислота, альбумины, α1-, α2-, β-, γ-глобулины).

Гормональные исследования включали определение тиреотропного гормона (ТТГ), общего трийодтиронина (Т3), общего тироксина (Т4), тестов функции коры надпочечников (кортизол) - твердофазным иммуноферментным анализом (ИФА). Иммунологические исследования включали определение содержания маркеров иммунокомпетентных клеток CD3:, CD4; CD8; CD4/CD8; CD16, CD20;CD25 и CD95 методом проточной лазерной цитометрии с использованием моноклональных антител (А. Л. Филатов и соавт., 2001). Определение фагоцитарной активности, фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа производилось методом Матусис-Пылаевой, НСТ – спонтанным и стимулированным тестами (по Б.В. Пинегину,1985). Содержание в сыворотке крови основных классов иммуноглобулинов IgА (в т.ч. А секреторный) - твердофазным иммуноферментным анализом (ИФА). IgM, IgG, IgЕ - методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Определение антител к ДНК и кардиолипину, ИЛ – 1 , ИФ и ФНО методом ИФА ( наборами системы «Вектор-Бест»). Функциональные исследования проводили с помощью многофункционального диагностического комплекса Валента (Россия). Ультразвуковое сканирование печени и желчного пузыря выполнялось с помощью аппарата FF Sonic UF-4500 (Япония).

Больным также проводились флюорография органов грудной клетки и рентгенография позвоночника в двух проекциях с функциональными пробами однократно.

Лечение больных проводилось в условиях санатория с назначением соответствующего режима движения - щадящего или тренирующего в зависимости от состояния пациента (при постепенном расширении двигательного режима по мере акклиматизации). Диетическое питание назначали с учетом основного и сопутствующего заболеваний, чаще всего это была диета № 5. Все пациенты принимали минеральную воду источника № 7 из расчета 3,3 г. на 1 кг массы тела больного (200-250 г. на один прием). Минеральная вода источника № 7 является углекислой (свободная СО2 г/л), маломинерализованной (5,117 г/л ) водой, температурой 35 0 С. Кроме того, все больные получали минеральные ванны (формула Курлова):

СО2 0,58 H2S 0,011 М 5,3 CI 40 НСО3 35 SO4 24 pН 6,8 Т 50°С

(Na+K) 63Ca2

Ванны отпускали в течение 12-15 минут через день, 10 процедур на курс лечения. Больные основных исследуемых групп, кроме упомянутых ранее процедур, принимали УФФ БАВ одного из фитопрепаратов на основе ЛЛ благородного, ОП, КД высокого и смеси БАВ ЛЛ и КД.

Фитомазь наносили паравертебрально на зоны шейного отдела позвоночника и надплечья в области проекции на кожу трапециевидных мышц. Методика воздействия лабильная, интенсивность ультразвука 0,4 Вт/см2, продолжительность - по 5 минут на симметричную зону с каждой стороны. Процедуры проводили ежедневно, на курс лечения 10 воздействий.

Данные проведенных исследований подвергнуты статистической обработке с использованием критериев Стьюдента и Фишера, а также корреляционного анализа (Пакет программ STATISTICA, версия 6,0). При проведении исследований, а также в процессе обработки материала нами использованы компьютеры системы PS INTEL Pentium - 4.


Полученные результаты исследования и их обсуждение


Экспериментальное обоснование


Качественным анализом мази экстракта ЛЛ благородного установлено, что составными частями фитопрепарата являются флавоноиды, каротиноиды, органические кислоты, эфирные масла. Спектрофотометрическое определение флавоноидов в пересчете на рутин показало их содержание в фитопрепарате в пределах 0,10- 0,11 %.

Воздействие НЧ УЗ существенно не изменяло этот уровень (0,10 - 0,11%). При нанесении на полупроницаемую мембрану искусственного происхождения мази экстракта ЛЛ благородного проникновения ее составных частей за счет диффузии через мембрану не происходило. В то время как под действием НЧ УЗ оптическая плотность раствора изменялась за счет появления в жидкости под мембраной флавоноидов в количествах, колеблющихся в пределах от 0,1 % до 0,11 %, что доказывало факт фореза БАВ ЛЛ. Идентичные эффекты были получены и при изучении проникновения БАВ ЛЛ через мембраны животного происхождения. Исследование кожи в месте воздействия процедуры выявило наличие в ней флавоноидов, что указывало на депонирование лекарственного вещества под влиянием УЗ. В то же время, только после пятой процедуры флавоноиды определились и в жидкости, куда проводили УФФФ и в спиртовом извлечении из кожи, что свидетельствовало о завершении процесса формирования депо лекарственного вещества в коже. Качественный анализ БАВ содержащихся в ОП свидетельствует о наличии в исследованной 20% настойке следов фолиевой кислоты, а также витаминов Bl, B2, В6, что согласуется с данными о наличии именно этих веществ в качестве основных действующих ингредиентов данного фитосредства (Н.И.Мазнев, 2006), а количество сухого остатка в настойке из ОП составило 1,14% . Затем по той же методике определяли количество сухого остатка в мази, содержащей настойку из ОП, которое составило 0,093%. При этом, в мази, как и в настойке также определялись следы фолиевой кислоты и витаминов В1, В2, В6. При воздействии УФФ была показана возможность проникновения БАВ ОП через кожу (количество сухого остатка 0,01%) и через целлофан (количество сухого остатка 0,0001%). Также была показана способность БАВ корней девясила (фруктозанов) под действием НЧ УЗ проходить через целлофан и кожу. В контрольном опыте (те же условия, но без воздействия УЗ) эта способность не была зарегистрирована. Полученные результаты явились основанием для более детального исследования УФФ БАВ мазевых лекарственных форм изучаемых растений в эксперименте на лабораторных животных. Анализ гематологических показателей, характеризующих состояние иммунной системы при изолированном воздействии УЗ, выявил, что при отсутствии изменений общего числа лейкоцитов ПК, произошло их перераспределение в сторону увеличения количества лимфоцитов. Отмечена активация пролиферативной активности этих клеток (РБТЛ ФГА с 1,19±0,04 до 1,58±0,08·109 /л., а также рост эффекторного потенциала фагоцитов, что документировалось увеличением числа функционирующих нейтрофилов (ФАЛ, % с 47,4±1,12 до 51,3±1,04; ФИЛ,% с 1,19±0,03 до 1,32±0,05; ПЗФЛ,% с 45,2±1,06 до 50,1±1,3), макрофагов (ФАЛ,% с46,8±1,56 до 52,9±1,24; ФИЛ, ед. с 1,31±0,06 до 1,75±0,11; ПЗФМ,% с 44,3±1,29 до 52,2±1,21), активацией их метаболизма и бактерицидности. Воздействие УЗ принципиально не влияло на уровень холестерина, но приводило к активации углеводного метаболизма, что проявлялось снижением уровня глюкозы ПК. Таким образом, полученные результаты согласуются с литературными данными и свидетельствуют о стимулирующем влиянии НЧ УЗ на процессы активации, пролиферации и реализации эффекторных функций ИКК (Л.П.Сизякина, Е.Н.Сологуб, 2000). В этой связи представлял интерес анализ изменений параметров иммунного статуса интактных животных при сочетанном воздействии УЗ и БАВ изучаемых растительных препаратов. Было показано, что сочетанное воздействие УЗ и БАВ ОП не влияло на параметры иммунного статуса, углеводного и липидного обменов, которые после воздействия фитофонофореза оставались на уровне изменений, обусловленных изолированным воздействием УЗ. В то же время при УФФ БАВ ЛЛ отмечено потенцирование эффектов НЧ УЗ, что проявлялось в усилении процессов дифференцировки в сторону лимфоидного ростка кроветворения (с 45,9±1,11 до 53,2±1,56%) в сочетании с активацией пролиферативной активности Т-лимфоцитов (РБТЛ на ФГА с 1,19±0,04 до 1,41±0,07у.е.). При отсутствии статистически значимых изменений количества клеток-участников фагоцитоза зарегистрировано усиление их эффекторных свойств, в том числе элиминационной функции, что документировалось уменьшением уровня ЦИК. При сочетании эффектов УЗ и БАВ ЛЛ в сравнении с изолированными эффектами УЗ существенного влияния на углеводный и липидный обмен не выявлено. УФФ БАВ КД способствовало активации лейкопоэза (с 12,2±0,42·109 до 13,2±0,37·109) без существенного влияния на процессы дифференцировки, активации и пролиферации ИКК, при этом отмечены изменения липидного обмена, что документировалось снижением уровня холестерина ПК. Учитывая отсутствие иммунотропных эффектов при сочетанном воздействии УЗ и БАВ ОП, потенцирование иммуностимулирующего воздействия УЗ и БАВ ЛЛ, а также БАВ КД на липидный обмен представлял интерес анализ изучаемых параметров метаболических и иммунных процессов при совместном применении УЗ и БАВ ЛЛ и КД. Анализ полученных данных выявил усиление направленности дифференцировки клеток в сторону лимфоидного ростка (с 45,9±1,11% до 54,4±1,23%) при отсутствии статистически значимых изменений общего числа лейкоцитов ПК. При этом отмечена существенная активация пролиферативных свойств Т-лимфоцитов и, соответственно, угнетение апоптотических процессов (РБТЛ ФГА с 1,19±0,04 до 1,91±0,09 у.е., как в сопоставлении с интактной группой, так и в сравнении с экспериментом при использовании изолированного воздействия УЗ, УФФ БАВ КД и ЛЛ. Кроме того, выявлено усиление эффекторных свойств фагоцитов, что документируется активацией их бактерицидных свойств (К НСТ с 1,19±0,05 до 2,0±0,10 у.е.), увеличением переваривающей активности как НФ, так и МФ крови, а также снижением ЦИК в связи с усилением их элиминации. При этом нивелировано выраженное гипогликемическое воздействие НЧ УЗ и отсутствует значимое влияние на обмен холестерина.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о стимулирующем влиянии сочетанного воздействия УЗ с БАВ ЛЛ и КД на процессы дифференцировки, пролиферативной активности лимфоцитов и активации эффекторных свойств ИКК при отсутствии выраженных эффектов на углеводный и липидный обмены. Выявленные иммуностимулирующие эффекты НЧ УЗ в сочетании с БАВ растительного происхождения в экспериментах на интактных животных послужили основанием для изучения их эффектов у животных с моделью ВИД. При УФФ БАВ ОП животным с экспериментальным ИД не выявлено статистически значимых изменений иммунного статуса в сравнении с изолированным эффектом НЧ УЗ. Исключение составляет лишь дальнейшее восстановление уровня глюкозы. Сочетанное применение БАВ мази ЛЛ и УЗ оказывало потенцирующее воздействие на иммуностимулирующие эффекты НЧ УЗ. В частности, количество лейкоцитов (с 8,94±0,39 ·109 до 10,7±0,53 ·109) и лимфоцитов (с 36,7±1,94 до 42,2±2,46%) восстановилось до уровня контрольной группы (11,9±0,34 ·109 и 45,9±1,11% соответственно), так же как и показатели пролиферативной активности лимфоцитов, поглотительных и микробицидных свойств нейтрофилов и макрофагов, снижение ЦИК.

Эффект совместного влияния УЗ и БАВ КД на параметры иммунного статуса экспериментальных животных в условиях смоделированного ИД проявился активацией лейкопоэза (с 8,94±0,39·109 до 11,2±0,65·109). Отмечена активация функциональных параметров лимфоцитов, что документируется восстановлением показателей РБТЛ на Т-митогены (с 1,01±0,05 до 1,18±0,03 у.е.). При этом фагоцитарная и микробицидная активность фагоцитирующих клеток, их элиминационные свойства не отличались от эффектов, обусловленных изолированным действием НЧ УЗ. Не претерпевали существенных изменений и параметры, характеризующие углеводный и липидный обмены. Учитывая отсутствие выраженных эффектов мази из ОП, различную направленность иммунокорригирующих эффектов ЛЛ и КД в сочетании с УЗ выявленный на модели ВИДС, представлял интерес анализ совместного использования в этих условиях фитопрепаратов ЛЛ, КД и НЧ УЗ.Было показано, что при сочетанном воздействии количество лейкоцитов ПК восстанавливалось до уровня контрольной группы (с 8,94±0,39·109 до 11,2±0,56·109). Несмотря на то, что относительное число лимфоцитов оставалось ниже нормативных показателей, их пролиферативная активность находилась в пределах физиологически значимых величин. Также интересен тот факт, что при отсутствии восстановления количества фагоцитирующих нейтрофилов и макрофагов увеличилась их функциональная активность. В частности, восстановилась микробицидная активность и элиминационная функция, а поглотительные свойства нейтрофилов превысили контрольные показатели. Следует также отметить нормализацию липидного и углеводного обменов. Таким образом, проведенный эксперимент не только подтвердил иммунокорригирующие эффекты УЗ, но и убедительно доказал потенцирование его эффектов при добавлении фитопрепаратов. В наибольшей степени это было выражено при УФФ смеси БАВ ЛЛ и КД, при этом отмечено отсутствие выраженного влияния на углеводный и липидный обмены. Для выявления возможного негативного влияния фонофореза растительных препаратов ЛЛ, КД и ОП на кожу дорзальной поверхности шейного отдела и печень интактных животных, сравнивались гистологические препараты до и после первого и седьмого сеансов воздействия. На гистологических срезах кожи всех исследуемых групп животных морфологическая картина соответствует физиологическим нормам. Следовательно, разработанные нами технологии лечения в применяемых дозировках воспринимаются тканями адекватно и могут быть испытаны в клинических условиях.