Учебное пособие составлено в соответствии с программой по биохимии для студентов всех факультетов медицинских вузов. Оно предназначено для самостоятельной подготовки студентов и оптимизации их работы на практических занятиях
| Вид материала | Учебное пособие |
- Предлагаемое учебное пособие предназначено для студентов, аспирантов и преподавателей, 2052.38kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов ставрополь 2007, 1394.43kb.
- Учебное пособие по дисциплине «Сестринское дело в хирургии» составлено в соответствии, 2118.11kb.
- Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов интернов по специальности, 390.76kb.
- Учебное пособие томск 2009, 1504.09kb.
- Учебное пособие Чебоксары 2007 удк 32. 001 (075. 8) Ббк ф0р30, 1513.98kb.
- Учебное пособие М.: Педагогическое общество России. 1999 442, 5623.86kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов специальности 040600 «Сестринское, 1354.95kb.
- Новые поступления в библиотеку экономическая теория, 225.89kb.
- Учебное пособие Ставрополь 2005 удк 577. 1 (075. 8) Бкк 28. 072, 277.1kb.
ЗАНЯТИЕ 2.
ВНУТРИТКАНЕВЫЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ ЛИПИДОВ. КЕТОНОВЫЕ ТЕЛА.
БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Кетоновые тела - нормальный продукт липидного обмена. Значение кетоновых тел - энергетическое.
Кетоз возникает при патологических состояниях, связанных с недостатком углеводов в тканях (сахарный диабет, голодание, мальабсорбция пищевых сахаров у детей младшего возраста, токсикозы беременности и др.). Кетоз сопровождается ацидозом тканей, что приводит к нарушению метаболизма. При этом определяется повышение уровня кетоновых тел в крови - кетонемия и появление их в моче - кетонурия.
Работа 1. Образование и окисление кетоновых тел в тканях организма.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Смесь нитропруссида Nа и аммиака при наличие кетоновых тел в тканях дает малиновое окрашивание.
ХОД РАБОТЫ.
1. Получение экстрактов из тканей, печени, почек, сердца, скелетной мышцы, мозга.
Навеску каждой ткани (кроме печени) - 1г всухую растереть в охлажденной ступке, постепенно добавляя 10 мл дистилированной воды. Гомогенаты профильтровать в охлажденные пробирки. Готовые фильтраты ( экстракты) использовать для опыта как источник ферментов, окисляющих ацетоновые тела. Ткань печени используется полностью, растирается в охлажденной ступке с постепенным добавлением 25 мл дистиллированной воды, фильтруется в охлажденный стаканчик. Экстракт используется как источник ацетоновых тел.
2. С экстрактами каждой ткани проделать реакцию на наличие кетоновых тел. Для этого взять по 1мл экстракта печени, сердца, мозга почки и по 7 капель реактива Имберта, тщательно перемешать и осторожно по стенке наслоить примерно 1 мл 25% раствора аммиака. При наличии кетоновых тел на границе двух жидкостей возникает малиновое кольцо.
3. Подготовить пробирки для инкубации.
В чистую пробирку добавить 1мл соответствующей ткани, 1мл экстракта печени как источник кетоновых тел и 1мл раствора фосфатного буфера, перемешать, закрыть пробкой и поставить в термостат на 1 час при температуре 45о.
В контрольную пробирку налить 2мл экстракта печени и 1мл раствора фосфатного буфера, закрыть пробкой и поставить в термостат на 1час.
4. Через 1час после инкубации со всеми пробирками проделать реакции на кетоновые тела так же, как описано выше.
РЕЗУЛЬТАТЫ – появление или отсутствие кольца обозначить знаком (+) или (-) и занести в таблицу.
| Ткань | До инкубации | После инкубации |
| Печень | | |
| Сердце | | |
| Почки | | |
| Мышца | | |
| Мозг | | |
ВЫВОДЫ (сделать вывод о том, какие органы синтезируют кетоновые тела и какие органы используют их в качестве источников энергии):
Работа 2. Определение кетоновых тел в моче.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
К ацетоновым или кетоновым телам относятся ацетон, b-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты.
Обнаружение в моче ацетона основано на взаимодействии его с нитропруссидом натрия и образовании окрашенного соединения. Качественное выявление ацетоуксусной кислоты основано на образовании комплексного соединения железа с енольной формой ацетоуксусной кислоты.
ХОД РАБОТЫ:
1. Экспресс-метод определения ацетона в моче( по Лестраде).*
На предметное стекло, помещенное на лист белой бумаги, нанести небольшое количество порошка, состоящего из смеси натрия нитропруссидного, аммония сернокислого, натрия углекислого и добавить 2-3 капли исследуемой мочи. При наличии ацетона максимальное вишневое окрашивание наступает обычно через 1-2 минуты. Пробу считать отрицательной, если изменения цвета мочи не наступает, положительной - при отчетливо фиолетовой окраске, появляющейся через 1-3 минуты.
2. Реакция Легаля на ацетон с нитропруссидом натрия.*2
К небольшому количеству ( 1 мл) исследуемой мочи прибавить несколько капель раствора нитропруссида натрия и затем 3-4 капли 10% раствора едкого натрия. Образуется красное окрашивание. Затем жидкость подкислить 10% раствором уксусной кислотой. При этом в присутствии ацетона красная окраска приобретает вишневый оттенок, а если ацетона нет, то при добавлении уксусной кислоты красное окрашивание исчезает.
3. Реакция Герхарда на ацетоуксусную кислоту.*
В пробирку налить 1-2 мл исследуемой мочи и прибавить 4-5 капель раст-твора хлорного железа. Наблюдается вишнево-красное окрашивание, если присутствует ацетоуксусная кислота.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ:
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Мобилизация жира из жировых депо /липолиз/, гормональная регуляция липолиза, гормончувствительная липаза.
2. Окисление глицерина в тканях. Энергетический эффект окисления глицерина до углекислого газа и воды.
3. Механизм окисления жирных кислот в тканях. Особенности окисления ненасыщенных жирных кислот.
4. Энергетический эффект полного окисления пальмитиновой и стеариновой жирных кислот.
5. Синтез кетоновых тел в печени. Пути образования ацетоуксусной кислоты.
6. Пути активации ацетоуксусной кислоты.
7. Нарушения, приводящие к накоплению кетоновых тел в тканях. Кетонемия, кетонурия.