Учебное пособие составлено в соответствии с программой по биохимии для студентов всех факультетов медицинских вузов. Оно предназначено для самостоятельной подготовки студентов и оптимизации их работы на практических занятиях
| Вид материала | Учебное пособие |
- Предлагаемое учебное пособие предназначено для студентов, аспирантов и преподавателей, 2052.38kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов ставрополь 2007, 1394.43kb.
- Учебное пособие по дисциплине «Сестринское дело в хирургии» составлено в соответствии, 2118.11kb.
- Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов интернов по специальности, 390.76kb.
- Учебное пособие томск 2009, 1504.09kb.
- Учебное пособие Чебоксары 2007 удк 32. 001 (075. 8) Ббк ф0р30, 1513.98kb.
- Учебное пособие М.: Педагогическое общество России. 1999 442, 5623.86kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов специальности 040600 «Сестринское, 1354.95kb.
- Новые поступления в библиотеку экономическая теория, 225.89kb.
- Учебное пособие Ставрополь 2005 удк 577. 1 (075. 8) Бкк 28. 072, 277.1kb.
Работа 2. Количественное определение каталазы в крови.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
В основе количественного определения активности каталазы лежит определение количества перекиси водорода, разложенной ферментом за определенный промежуток времени. О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества перманганата калия. израсходованного на титрование перекиси водорода до и после действия каталазы .
Активность каталазы выражают с помощью каталазного числа. Каталазным числом называют количество мг перекиси водорода, которое разлагается под действием 1 мкл крови.
ХОД РАБОТЫ.
Работу проводят по следующей схеме:
| Р е а к т и в ы | Стаканчик № 1 (опыт) | Стаканчик № 2 (контроль) |
| Кровь | 1 мл | 1 мл |
| Вода дистиллированная | 7 мл | 7 мл |
| Перекись водорода 1% | 2 мл | - |
| Серная кислота 10% | - | 5 мл |
| Стаканчики оставляют на 30 мин при комн. t°, изредка встряхивая Через 30 мин | ||
| Перекись водорода 1% | - | 2 мл |
| Серная кислота 10 % | 5 мл | - |
Действие каталазы в кислой среде прекращается, т. к. этот фермент действует при рН=7,4. Поскольку в контрольную пробу серную кислоту приливали до добавления перекиси водорода, то в контроле все добавленное количество перекиси водорода остается нерасщепленным.
Содержимое каждого стаканчика необходимо титровать раствором перманганата калия до розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.
Рассчитать каталазное число (КЧ) по формуле:
КЧ = (А - В) х 1,7,
где:
А - кол-во 0,1 N раствора КМnО4, пошедшее на титрование контрольной пробы в мл.
В - кол-во 0,1N раствора КМnО4, пошедшее на титрование опытной пробы в мл.
1,7 - это коэффициент, показывающий, сколько мг Н2О2 содержится в 1мл 0,1н. раствора Н2О2.
В норме каталазное число колеблется от 10 до 15 единиц у взрослых и 7,5 - 9,9 единиц у детей.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ:
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Структурная организация метаболических мембран.
2. Роль липидов в построении мембран.
3. Группа белков, участвующих в построении мембран.
4. Биологические функции мембран.
5. Виды транспорта веществ через мембрану.
6. Метаболизм мембран. Перекисное окисление липидов. Показатели перекисного окисления, определяемые в клинике.
7. Регуляторы перекисного окисления в клетке (прооксиданты, антиоксиданты).
Для фармацевтического факультета:
- Липосомы как модельная система биомембран, их применение в фармации и медицине.
ЗАНЯТИЕ 6.
КОЛЛОКВИУМ ПО ТЕМЕ: ОБМЕН ЛИПИДОВ
ЗАНЯТИЕ 7
ПЕРЕВАРИВАНИЕ БЕЛКОВ.
БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:
Желудочный сок представляет собой бесцветную жидкость, в состав которой входят вода, белки, ферменты, муцин, соляная кислота, гидрофосфаты и некоторые другие соединения. Кислая реакция желудочного сока обусловлена присутствием соляной кислоты, гидрофосфатов, а при патологических процессах – молочной кислоты и жирных кислот. Совокупность всех веществ, способных быть донорами протонов, желудочного сока, составляют общую кислотность. Соляную кислоту, связанную с белками и продуктами их переваривания, называют связанной соляной кислотой, а находящуюся в несвязанном виде – свободной соляной кислотой. Содержание последней подвержено значительным колебаниям, тогда как количество связанной соляной кислоты достаточно постоянно.
При многих заболеваниях желучно-кишечного тракта нарушается секреция соляной кислоты и пепсиногена в желудке. При патологии кислотность желудочного сока может быть нулевой, повышенной или пониженной. Отсутствие соляной кислоты и пепсина (ахилия ) часто наблюдается при тяжелых атрофических гастритах, злокачественных новообразованиях желудка. Пониженная кислотность ( гипохлоргидрия ) встречается при гипоацидном гастрите, раке желудка. Повышенная кислотность ( гиперхлоргидрия ) бывает при гиперацидном гастрите, язве желудка. Частым следствием ахилии является злокачественная анемия, поскольку отсутствует внутренний фактор Касла, необходимый для всасывания витамина В12 и наступает гиповитаминоз.
У новорожденных низкая активность протеолитических ферментов и высокая проницаемость слизистой кишечника могут привести к всасыванию нативных белков пищи и вызвать повышенную чувствительность к ним организма (пищевая аллергия ).
Работа 1. Определение свободной, связанной, общей соляной кислоты и общей кислотности желудочного сока раздельно и в общей пробе.
ОБОРУДОВАНИЕ: бюретки для титрования.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Для определения общей кислотности и свободной соляной кислоты используется метод титрования 0,1н раствором NаОН в присутствии соответствующих индикаторов (фенолфталеина и диметиламиноазобензола). Кислотность желудочного сока оценивается в единицах кислотности по количеству миллилитров 0,1н раствора NAOH, необходимого для нейтрализации 100 мл желудочного сока.
1.Количественное определение общей кислотности желудочного сока
ХОД РАБОТЫ.
В тщательно вымытую водой и ополоснутую соляной кислотой колбу
прилить 10 мл профильтрованного желудочного содержимого, добавить 1-2 капли 0,5% раствора фенолфталеина* (зона перехода окраски индикатора при рН=8,2-10,0).
Провести титрование 0,1н раствором едкого натра до появления слабо-розового окрашивания, неисчезающего в течение 1 минуты. При титровании колбочка ставится на лист белой бумаги.
РЕЗУЛЬТАТЫ: (выразить в условных единицах кислотности, сравнить с нормой)
2. Количественное определение свободной соляной кислоты
ХОД РАБОТЫ.
К 10 мл желудочного сока добавить 1-2 капли спиртового раствора диметиламиноазобензола (зона перехода окраски в пределах рН=2,9-4,2). Титрование вести 0,1н раствором NаОН до появления оранжевой окраски. Свободная соляная кислота почти вся оттитровывается при рН=3.
РЕЗУЛЬТАТЫ (выразить в единицах кислотности, сравнить с нормой)
3. Количественное определение общей кислотности, общей соляной кислоты, свободной соляной кислоты и связанной соляной кислоты желудочного сока в одной пробе.
ХОД РАБОТЫ.
Определение перечисленных видов кислотности в одной пробе желудочного сока титрованием 0,1н раствором NаОН с одновременным присутствием двух индикаторов; диметиламиноазобензола и фенолфталеина.
В колбочку отмерить 10 мл фильтрата желудочного сока, добавить 1-2 капли диметиламиноазобензола и 2 капли фенолфталеина. Титрование ведется 0,1н раствором едкого натра до появления желтовато-красной (оранжевой) окраски. Далее продолжается титрование до лимонно-желтого цвета (вторая отметка) и, наконец, до появления розовой окраски (третья отметка), не исчезающей в течение 1 минуты. В каждом случае регистрировать количество мл 0,1н раствора едкого натра, потраченного на титрование.
Первый результат титрования находится в соответствии с количеством свободной кислоты, второй используется для вычисления связанной соляной кислоты, по последнему - рассчитывается общая кислотность.
Среднее арифметическое между вторым и третьим титрованием используется для расчета содержания общей соляной кислоты.
Пример: до первой метки (оранжевый цвет) на титрование пошло 3,2 мл 0,1н раствора едкого натра, до второй - 4,5 мл (лимонно-желтый цвет), до третьей - 5,5 мл (розовый цвет). Среднее арифметическое между второй и третьей отметкой:
4.5 + 5.5 = 5.
2
Свободная соляная кислота 3.2 . 10 = 32 ед.
Общая соляная кислота 5.0 . 10 = 50 ед.
Связанная соляная кислота 50 -32 =18 ед.
Общая кислотность 5.5 . 10 = 55 ед.
Показатели кислотности желудочного сока в норме:
Общая кислотность – 40 – 60 ед.
Общая HCl – 30 – 50 ед.
Свободная HCl – 20 – 40 ед.
Связанная HCl – 8 – 16 ед.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
| Кол-во мл 0.1 н раствора NaOH, пошедшего на титрование | В желудочном соке с нормальной кислотностью | В задаче № |
| а) До первой отметки | | |
| б) До второй отметки | | |
| в) До третьей отметки | | |
| Результаты расчета кислотности желудочного сока (ед) | ||
| 1. Свободная HCL | | |
| 2.Общая HCL | | |
| 3. Связанная HCL | | |
| 4. Общая кислотность | | |
ВЫВОДЫ (результаты задачи сравнить с показателями нормальной кислотности желудочного сока):
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Азотистый баланс, биологическая ценность белков.
2. Переваривание белков:
-переваривание белков в желудке, превращение профермента в фермент, пепсин, значение соляной кислоты в переваривании белков,
-переваривание в кишечнике под действием ферментов поджелудочного и кишечного соков (трипсин, химотрипсин, карбоксипептидазы А и В, эластаза, аминопептидаза),
-всасывание аминокислот из кишечника,
-гниение белков в кишечнике.
3. Пристеночное пищеварение.
ЗАНЯТИЕ 8.