Geum.ru

Учебное пособие составлено в соответствии с программой по биохимии для студентов всех факультетов медицинских вузов. Оно предназначено для самостоятельной подготовки студентов и оптимизации их работы на практических занятиях

Вид материалаУчебное пособие

Содержание


Работа 4. Обнаружение роданидов в слюне.
Работа 5. Качественная реакция на амилазу слюны.
1. Определение свободной серной кислоты.
Определение общего количества серной кислоты.
Подобный материал:
1   ...   22   23   24   25   26   27   28   29   30

Работа 4. Обнаружение роданидов в слюне.


ПРИНЦИП МЕТОДА.

При взаимодействии CNS- ионов с ионами железа образуется комплексное соединение красного цвета.

ХОД РАБОТЫ.

К 5 каплям слюны добавить 2 капли 2 % раствора НСL и 2 капли 1% раствора хлорного железа. Появляется красное окрашивание.

РЕЗУЛЬТАТЫ:


ВЫВОДЫ:


Работа 5. Качественная реакция на амилазу слюны.


ПРИНЦИП МЕТОДА.

Метод основан на специфичности действия амилазы на полисахариды, содержащие 1,4 -альфа-гликозидную связь. Продукты гидролиза крахмала (декстрины, мальтоза) дают иное окрашивание с йодом, чем исходный субстрат (крахмал).

ХОД РАБОТЫ.

На предметное стекло нанести каплю 0.5% раствора крахмала, смешать с 1 каплей слюны и оставить на 5 минут при комнатной температуре, после чего добавить каплю раствора Люголя.

РЕЗУЛЬТАТЫ:


ВЫВОДЫ:


ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Общая ротовая жидкость (смешанная слюна), слюна индивидуальных слюнных желез, особенности состава, свойства, зависимость от стимуляции слюноотделения. Физиологическая роль слюны.

2. Десневая (гингевальная жидкость). Особенности ее химического состава.

3. Белки слюны, общая характеристика. Муцин. Иммуноглобулины и другие гликопротеины. Специфические белки слюны, их роль в функциях слюны.

4. Ферменты слюны: амилаза, лизоцим, пероксидаза, фосфатаза, пептидилпептидгидролаза (каллекреин) и др. Их происхождение и значение.

5. Небелковые низкомолекулярные органические компоненты слюны: глюкоза, карбоновые кислоты, липиды, витамины и др.

6. Неорганические компоненты слюны, их распределение в слюне, стимулируемой и нестимулируемой. Активная реакция (рН) слюны. Буферы слюны. Причины и значение ацидотического сдвига рН.

7. Неорганиеские компоненты слюны, катионный и анионный состав. Кальций, фосфор, роданиды.

8. Слюнные факторы защиты зубов.

9. Патохимические аспекты патогенеза кариеса зуба.

10. Клинико - диагностическое и судебно - медицинское значение исследования состава слюны.

11. Роль изменений химического состава ротовой жидкости в развитии заболеваний пародонта.

12. Мягкий зубной налет, зубной камень. Биохимическая характеристика.

ЗАНЯТИЕ 18.

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ БИОХИМИЯ.

БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Биохимические исследования проводятся при разработке новых лекарственных форм, стандартизации, контроле качества, анализе и производстве лекарственных препаратов. Также необходима оценка эффективности действия препарата и подбор индивидуальных доз для конкретного больного.

Ксенобиотики, в том числе и лекарственные препараты, подвергаются в печени реакциям конъюгации (соединение с молекулами глюкуроновой, серной, уксусной кислот, глицина, глутатиона и др.). Сульфатной конъюгации подвергаются, как правило, циклические структуры, содержащие -ОН и-NН2 группы: индол, скатол, фенолы, стероиды, иодтиронины, токоферолы, нафтохиноны и др.

Основной путь инактивации сульфаниламидных препаратов - ацетилирование и глюкуронирование, однако, активно идут и процессы сульфатирования. Сульфаниламидные препараты после инактивации увеличивают количество общей и связанной серной кислоты. Чем быстрее происходит связывание сульфаниламида, тем меньше его бактериостатическая активность. Скорость конъюгации зависит от активности ферментативных систем печени. В результате конъюгации происходят большие изменения в свойствах лекарства или другого ксенобиотика. Меняются их биохимическая активность и липидная растворимость и, соответственно, подвижность в тканях.

Работа 1. Определение сульфатов в моче.

ОБОРУДОВАНИЕ: бюретки для титрования.


Продукты обезвреживания ксенобиотиков выводятся с мочой. Рост связанной серной кислоты в моче отмечается вследствие усиления сульфатной конъюгации в печени. В обычных условиях неорганические сульфаты составляют 85-95 % всего количества содержащейся в моче серы, и только остальные 5-15% выделяются в связанном виде. При усилении процессов конъюгации происходит увеличение содержания эфиросерных кислот в моче.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

Сульфаты осаждаются раствором бензидина и количество серной кислоты определяется титрованием едким натром. 1 мл 0,02 н раствора едкого натра соответствует 0.98 мг серной кислоты.

Проводят определение свободной и общей серной кислоты в моче. По разнице между общей и свободной серной кислотой можно вычислить связанную серную кислоту.

Работы по определению содержания свободной и общей серной кислоты

проводятся студентами со 2 пункта описания методик, и заключаются в титровании растворенного осадка едким натром.


Схема постановки эксперимента.

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНОЙ СЕРНОЙ КИСЛОТЫ.

1). В центрифужную пробирку внести 2 мл мочи, прилить, помешивая, 10 мл бензидинового реактива, затем 02 мл 0,05% раствора динитрофенола и по каплям разведенную соляную кислоту (1:4) до исчезновения желтого цвета, после чего прибавить еще 0,5 мл НСl. Через 10 минут отцентрифугировать, надосадочную жидкость слить. Осадок промыть 2 раза раствором сернокислого бензидина .

К осадку, соответствующему 2 мл мочи, добавить 5 мл дистиллированной

воды и нагреть на водяной бане до растворения осадка.


ХОД РАБОТЫ.

2). В колбочку отмерить 5 мл полученного растворенного осадка, прибавить 5 капель фенолфталеина и титровать 0,02 н раствором NaOH до появления слабо-розового окрашивания.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА СЕРНОЙ КИСЛОТЫ.

1). В колбочку отмерить 25 мл мочи и 10 мл концентрированной HСl, кипятить 15 минут, добавить 1 г активированного угля и вновь осторожно кипятить 3 минуты,

довести водой до метки 25 мл и профильтровать.

К 2 мл фильтрата (соответствует 2 мл мочи) прилить 10 мл бензидинового реактива далее работа проводится как при определении свободной серной кислоты.

К осадку, соответствующему 2 мл мочи, прилить 5 мл дистиллированной воды, нагреть на водяной бане до растворения осадка.


ХОД РАБОТЫ.

2). В колбочку отмерить 5 мл растворенного осадка, прибавить 5 капель фенолфталеина и титровать 0,02 н раствором NaOH до появления слабо-розового окрашивания.


РАСЧЕТ свободной серной кислоты и общего количества серной кислоты проводится по формуле:


V х 0,98 х 100

Х= ---------------------------

2

Х - содержание сульфатов в мг на 100 мл мочи

V - количество мл 0,02 н раствора NaOH, пошедшего на титрование

0,98 мг - количество мг серной кислоты, титруемой 1 мл раствора NaOH

2 мл - количество мл мочи, взятой для анализа.

В нормальных условиях с мочой выделяется 180-210 мг свободной серной кислоты и 220-240 мг общей серной кислоты (на 100 мл мочи).


ВЫВОДЫ (на основании полученных результатов):
  1. установить наличие процесса инактивации сульфаниламидных препаратов в печени.
  2. оценить возможность усиления процесса конъюгации в печени в результате поступления в организм каких-либо иных ксенобиотиков.



Работа 2. Выявление ацетилирования гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) в организме.

ОБОРУДОВАНИЕ: ФЭК, водяная баня.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

Метод основан на выявлении свободной формы ГИНК, которая с метаванадатом аммония в кислой среде дает комплексное соединение коричнево-красного цвета. Разница в окраске между пробами мочи до и после гидролиза указывает на степень ацетилирования ГИНК в организме.

Реакция N-ацетилирования ГИНК осуществляется ацетилтрансферазой, содержащейся в различных тканях организма. Часть ГИНК не подвергается превращениям и выделяется с мочой в свободном виде. По степени ацетилирования ГИНК устанавливается эффективная индивидуальная доза препарата и осуществляется прогнозирование побочного действия препарата. У больных, которые являются слабыми инактиваторами, есть вероятность развития побочных реакций.

По количеству связанного ГИНК больных делят на сильных, средних и слабых инактиваторов ( в зависимости от способности печени к обезвреживанию препарата).

-ацетилировано 100-90% ГИНК – сильный инактиватор.

-ацетилировано 89-85% ГИНК – средний инактиватор.

-ацетилировано менее 84% ГИНК – слабый инактиватор.

ХОД РАБОТЫ.

Собранную мочу развести в 20 раз дистиллированной водой. В две пробирки внести по 1 мл разведенной мочи. В первую пробирку добавить 1 мл 0,5 М раствора соляной кислоты (определение общего ГИНК), во вторую пробирку добавить 1 мл дистиллированной воды (определение свободного ГИНК).

Первую пробирку закрыть пробкой и поставить на 20 минут в кипящую водяную баню, после чего охладить под струей воды. В обе пробирки налить по 2 мл 0,1% раствора метаванадата аммония и колориметрировать на ФЭКе с зеленым светофильтром против воды.

Расчет провести по формуле:

( Е 1 - Е2 ) х 100%

Х= --------------------------

Е1

Х - ацетилирующая способность организма, % ацетилированного ГИНК

Е1 -экстинкция общего ГИНК

Е2 - экстинкция свободного ГИНК

РЕЗУЛЬТАТЫ:


ВЫВОДЫ:


ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
  1. Основные закономерности метаболизма лекарственных средств. Локализация метаболических превращений лекарств в организме.
  2. Значение эндоплазматического ретикулума печени в биотрансформации лекарств. Основные типы реакций метаболизма ксенобиотиков и лекарственных веществ.
  3. Синтетичесие пути трансформации лекарственных препаратов.
  4. Значение микросомального и немикросомального окисления в метаболизме лекарственных веществ.

СПИСОК ОСНОВНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С.Северина. – 3-е изд., испр. – М.: Гэотар-Медиа, 2005. – 784 с.: ил.



  1. Николаев А.Я. Биологическая химия. - 3-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицинское информационное агентство. – 2004. – 556 с.: ил.



  1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химии: Учебник. -3-е изд. переработ. и доп.- М.: Медицина, 1998. -704 с.: ил.



СПИСОК ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
    1. Щербак И.Г. Биологическая химия: Учебник. - СПб.: Издательство СПбГМУ, 2005. – 480 с. - для стоматологического факультета
    2. Комов В.П. Биохимия: Учебник для вузов / В.П.Комов, В.Н.Шведова. – М.: Дрофа, 2004. – 640 с.: ил. - для фармацевтического фак-та
    3. Равич – Щербо М.И., Новиков В.В. Физическая и коллоидная

химия: Учебник.- М.: Высшая школа, 1975. - 255 с.: ил.
    1. Строев Е.А. Биологическая химия: Учебник для фармац. ин-тов и фармац. фак. мед. ин-тов. – М.: Высшая школа, 1986. – 479 с.: ил.
    2. А. Уайт и др. Основы биохимии: в 3-х томах. - Пер. с англ. - М.: Мир, 1981.
  1. Л. Страйер Биохимия: в 3-х томах. - Пер. с англ. - М.: Мир, 1984.
  2. А. Ленинджер Основы биохимии : в 3-х томах. - Пер. с англ. - М.: Мир, 1985.
  3. Р. Марри и др. Биохимия человека: в 2-х томах. - Пер. с англ. - М.: Мир, 1993.
  4. В.Эллиот, Д.Эллиот. Биохимия и молекулярная биология.- Пер.на русский язык .- НИИ биомед. химии РАМН, 1999.- 372 с.: ил.
  5. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами./ Под ред. Е.С.Северина и А.Я.Николаева. - 2-е изд., испр. и доп. – М.: Гоэтар Мед, 2002.- 448 с.
  6. Забросаева Л.И., Козлов Н.Б. Биохимия слюны: учебно-методическое пособие. - Смоленск: СГМИ, - 1992. - для стоматологического факультета.



СОДЕРЖАНИЕ




ИНСТРУКЦИЯ ПО ТЕХНИКЕ БЕЗОПАСНОСТИ…………………………………………...4


СЕМЕСТР 1.


ЗАНЯТИЕ 1. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В БИОХИМИИ