Учебное пособие составлено в соответствии с программой по биохимии для студентов всех факультетов медицинских вузов. Оно предназначено для самостоятельной подготовки студентов и оптимизации их работы на практических занятиях
| Вид материала | Учебное пособие |
- Предлагаемое учебное пособие предназначено для студентов, аспирантов и преподавателей, 2052.38kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов ставрополь 2007, 1394.43kb.
- Учебное пособие по дисциплине «Сестринское дело в хирургии» составлено в соответствии, 2118.11kb.
- Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов интернов по специальности, 390.76kb.
- Учебное пособие томск 2009, 1504.09kb.
- Учебное пособие Чебоксары 2007 удк 32. 001 (075. 8) Ббк ф0р30, 1513.98kb.
- Учебное пособие М.: Педагогическое общество России. 1999 442, 5623.86kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов специальности 040600 «Сестринское, 1354.95kb.
- Новые поступления в библиотеку экономическая теория, 225.89kb.
- Учебное пособие Ставрополь 2005 удк 577. 1 (075. 8) Бкк 28. 072, 277.1kb.
ЗАНЯТИЕ 17.
БИОХИМИЯ СЛЮНЫ.
БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:
Слюна имеет рН, близкий к нейтральной (6,7-7,2). Сдвиг в кислую сторону нарушает процесс минерализации и способствует развитию кариеса, сдвиг рН в щелочную сторону способствует возникновению зубного камня. Так же создаются условия для воздействия кислых протеиназ на ткани пародонта.
Диагностическое значение: в норме в слюне активность протеиназ в пределах 1,5-10,0 мкМ/мин/л
При воспалительных процессах, большом количестве налета на зубах активность протеиназ повышается.
В слюне курильщиков велико содержание роданидов, что связано с поступлением в их организм синильной кислоты табачного дыма. Синильная кислота под действием роданезы (тиосульфат-сульфит-трансферазы) превращается в тканях в роданиды и в их составе выводится из организма.
Работа 1. Определение рН слюны.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Индикатор в зависимости от активной реакции среды дает различную окраску.
ХОД РАБОТЫ.
Каплю слюны нанести на универсальную индикаторную бумажку. Немедленно сравнить со стандартной шкалой.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ:
Работа 2. Определение активности пептидил-пептидгидролазы в слюне.
ОБОРУДОВАНИЕ: термостат на 38оС, центрифуга, ФЭК.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Основан на определении количества тирозина и других циклических аминокислот, образовавшихся после гидролиза протеиназами слюны денатурированного гемоглобина. В щелочной среде образуются комплексные соединения аминокислот с реактивом Фолина и медью, дающие голубое окрашивание.
ХОД РАБОТЫ.
Опыт ставить в мерных центрифужных пробирках в соответствии с таблицей:
-
Р е а г е н т ы
Опыт
Контроль
Стандарт
Гемоглобин денатурированный 2% рН=7.5
0.5 мл
0.5 мл
-
Слюна
0.25 мл
-
-
И Н К У Б А Ц И Я 38оС 1 ЧАС
ТХУ 5%
1.25 мл
1.25 мл
-
Слюна
-
0.25 мл
-
Ц Е Н Т Р И Ф У Г И Р О В А Н И Е
3000 об/мин 20 мин
Центрифугат (в чистые, сухие пробирки)
1 мл
1 мл
-
Раствор тирозина
-
-
1 мл
NaOH 0.5 н
2 мл
2 мл
2 мл
Реактив Фолина
0.5 мл
0.5 мл
0.5 мл
Через 15 минут интенсивность окраски определить на ФЭКе при красном светофильтре (длина волны 670 нм) против контроля в кюветах толщиной 5 мм. Расчет по формуле:
, где: Х - активность пептидил-пептидгидролазы в мкМ/мин.л,
0.16 - кол-во микромолей тирозина в 1 мл,
0.25 - кол-во слюны в пробе,
2 - объем пробы,
Dоп и Dст - оптическая плотность "опытной" и "стандартной" пробирки соответственно,
1000 - пересчет на 1мл слюны,
60 - время инкубации в мин.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ:
Работа 3. Выделение муцина из слюны.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Метод основан на способности муцина давать осадок, нерастворимый в избытке уксусной кислоты.
Углеводный компонент (глюкозу) в муцине выявляют действием концентрированной серной кислоты и альфа-нафтола, в результате которого получается окрашенный продукт.
ХОД РАБОТЫ.
В две пробирки собрать примерно по 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) прибавить концентрированную уксусную кислоту. Выпадает осадок муцина.
Изучить состав муцина:
1. Обнаружение белка в осадке муцина.
Провести биуретовую реакцию на белок (см. занятие № 3 1-го семестра).
2. Обнаружение углеводного компонента в муцине.
К осадку муцина добавить 1-2 капли 1% спиртового раствора альфа-нафтола, перемешать и по стенке ОСТОРОЖНО! спустить 10-20 капель концентрированной серной кислоты.
На границе двух слоев жидкости постепенно появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо заметное на белом фоне.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ (Охарактеризовать структуру муцина):