Учебное пособие составлено в соответствии с программой по биохимии для студентов всех факультетов медицинских вузов. Оно предназначено для самостоятельной подготовки студентов и оптимизации их работы на практических занятиях
| Вид материала | Учебное пособие |
- Предлагаемое учебное пособие предназначено для студентов, аспирантов и преподавателей, 2052.38kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов ставрополь 2007, 1394.43kb.
- Учебное пособие по дисциплине «Сестринское дело в хирургии» составлено в соответствии, 2118.11kb.
- Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов интернов по специальности, 390.76kb.
- Учебное пособие томск 2009, 1504.09kb.
- Учебное пособие Чебоксары 2007 удк 32. 001 (075. 8) Ббк ф0р30, 1513.98kb.
- Учебное пособие М.: Педагогическое общество России. 1999 442, 5623.86kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов специальности 040600 «Сестринское, 1354.95kb.
- Новые поступления в библиотеку экономическая теория, 225.89kb.
- Учебное пособие Ставрополь 2005 удк 577. 1 (075. 8) Бкк 28. 072, 277.1kb.
Работа 1. Определение активности лактатдегидрогеназы в разных тканях.
ОБОРУДОВАНИЕ: фарфоровые ступки, термостат на 38оС.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Дегидрогеназа молочной кислоты (лактатдегидрогеназа, ЛДГ) окисляет молочную кислоту в пировиноградную при наличии акцептора водорода - 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида, который восстанавливается до формазана, имеющего красную окраску. Интенсивность окраски зависит от количества образовавшегося формазана и свидетельствует об активности дегидрогеназы.
ХОД РАБОТЫ.
Работа выполняется бригадой студентов, каждый из которых исследует активность ЛДГ в определенной ткани.
1.Для работы используют гомогенаты разных тканей (печень, сердце, мозг, селезенка, скелетная мышца, почка и другие).
2. Постановка опыта.
Пробирка №1 /опыт/.
Отмерить 1 мл раствора лактата натрия, 2мл раствора фосфатного буфера (pН = 7.4), 1мл раствора хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия и 1мл профильтрованного экстракта ткани.
Пробирка №2 /контроль/.
Отмерить 1мл лактата натрия, 2 мл раствора фосфатного буфера pH=7,4; 1мл воды вместо раствора тетразолия, 1мл профильтрованного экстракта.
Пробирки встряхнуть, поместить в термостат на 1 час (380С). Через час сравнить интенсивность окраски в опытной и контрольной пробирках.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ:
Работа 2. Обнаружение молочной кислоты в мышечной ткани.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
При взаимодействии хлорного железа с фенолом образуется фенолят железа аметисто-фиолетового цвета. В присутствии молочной кислоты образуется комплексное соединение желтого цвета.
ХОД РАБОТЫ.
Кусочек мышечной ткани растереть в ступке с 5мл фосфатного буфера (pН=7,4). Полученную вытяжку слить в чистую пробирку (№ 1). Во другую пробирку (№ 2) отмерить 2-3 мл раствора фенола, добавить несколько капель раствора хлорного железа до появления аметисто-фиолетового окрашивания.
Во вторую пробирку добавить 5 мл вытяжки из мышцы (первая пробирка), а затем по каплям - 10% раствора NaOH до появления желтого окрашивания.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ:
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Глюкозо-6-фосфат - узловой метаболит. Пути его образования и
возможные пути превращения.
2. Определение понятий "гликолиз" и "гликогенолиз".
3. Последовательность реакций гликолиза. Ферменты, кофакторы,
субстраты, продукты реакций. Особенности функционирования и
регуляции гликолитических ферментов.
4. Гликолитическая оксидоредукция: cущность процесса и значение.
5. Механизм субстратного фосфорилирования в процессе гликолиза:
субстраты и продукты реакций, ферментативное обеспечение, энергетический эффект.
6. Энергетическое значение процессов гликолиза и гликогенолиза. Энергетический эффект полного окисления одной молекулы глюкозы до углекислого газа и воды.
7. Аэробный и анаэробный гликолиз. Молочная кислота как тупиковый
метаболит.
8. Значение процессов гликолиза и гликогенолиза.
9. Включение других углеводов в процесс гликолиза.
10. Регуляция гликолиза. Факторы, влияющие на скорость реакций.
ЗАНЯТИЕ 17.
ГЛЮКОНЕОГЕНЕЗ. ПЕНТОЗОФОСФАТНЫЙ ПУТЬ.
БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Глюконеогенез обеспечивает потребности организма в глюкозе, если диета содержит недостаточное количество углеводов. Механизм глюконеогенеза используется для удаления из крови продуктов тканевого метаболизма, например, лактата, образующегося в мышцах и эритроцитах, и глицерола, образующегося в жировой ткани.
Работа 1. Количественное определение фосфоенолпирувата в печени и мышцах.
ОБОРУДОВАНИЕ: ФЭК
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Метод основан на том, что фосфоенолпируват в щелочной среде окисляется йодом с отщеплением неорганического фосфата. По количеству неорганического фосфата, выделившегося в этих условиях, рассчитывают содержание фосфоенолпирувата.
ХОД РАБОТЫ.
Работа выполняется двумя студентами: один работает с мышечной тканью, другой - с печенью.
1. Приготовление экстракта.
0,5г мышцы или печени растереть в ступке с 5 мл 2,5 % раствора три-
хлоруксусной кислоты (ТХУ), перелить в пробирки, экстрагировать на холоду 10 минут, помешивая стеклянной палочкой. Затем в каждую пробирку добавить по 5мл дистиллированной воды, профильтровать через бумажный фильтр.
2. Постановка опыта.
В пробирку с делением на 10 мл налить 2 мл фильтрата мышцы или печени, 1мл 2М раствора NaOH и 1 мл раствора йода, перемешать, оставить на 15 мин. при комнатной температуре.
Затем в эту же пробирку налить 2,5 мл 2 М раствора HСL и по каплям долить раствор соляной кислоты до появления темно-желтого окрашивания. Потом добавить 2 мл тиосульфата Na и по каплям, постоянно помешивая, окраску довести тиосульфатом Na до светло-желтой. По окончании титрования общий объем в пробирке довести дистилированной водой до 10 мл.
После этого в другую мерную пробирку на 10 мл взять 2мл полученного раствора, добавить 0,5 мл раствора молибденово-кислого аммония и 0,5мл раствора аскорбиновой кислоты, довести до 10 мл водой и оставить на 10 минут, после чего проколориметрировать на ФЭКе с красным светофильтром против воды (толщина кюветы 5 мм).
По калибровочному графику рассчитать количество фосфоенолпирувата в мышце и печени.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОДЫ: