Національний фармацевтичний університет Проблеми клініки, діагностики та терапії гепатитів Збірник праць науково практичної конференції Харків 2005
| Вид материала | Диплом |
- Матер І а л и науково-практичної конференції з міжнародною участю 1-2 березня 2007, 7242.75kb.
- Наукова програма передбачає науково-практичні доповіді та постерну сесію з обговоренням, 40.36kb.
- Міропольська М. А., Капченко Л. М., Алєксєєва А. В., Савченко, 7248.82kb.
- Хx міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1555.53kb.
- Хix міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1754.6kb.
- Хvii міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1402.07kb.
- Хviii міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1642.96kb.
- Запорізька облдержадміністрація запорізька обласна рада запорізький національний університет, 6793.22kb.
- Всеукраїнська федерація «спас» запорізька облдержадміністрація запорізька обласна рада, 3474.89kb.
- Міністерство аграрної політики України Львівський національний аграрний університет, 48.27kb.
Изучение активации субпопуляций иммунокомпетентных клеток при вирусном гепатите А
Сенюков В.В.1, Хохлова Н.И.2, Кожевников В.С.1, Толоконская Н.П.2
НИИ клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН (Россия)1, Новосибирская государственная медицинская академия (Россия)2
Результаты многолетних исследований по проблеме вирусных гепатитов (ВГ) сделали очевидной недостаточную эффективность предложенных ранее диагностических и прогностических критериев. Необходимо формирование системы клинической диагностики, предусматривающей оценку глубины поражения организма в целом. Важным компонентом этой системы является установление характера иммунного реагирования организма, который во многом определяет течение ВГ. При всей целесообразности клеточных иммунных реакций при ВГ, необходимо учитывать их неизбежную двоякую роль: будучи основным фактором элиминации вирусов, они являются и главным индуктором повреждения инфицированных клеток, тканей. Можно полагать, что активность клеточных иммунных реакций во многом обусловливает степень тяжести и характер течения острых ВГ. В настоящее время признается иммуноопосредованный характер повреждения ткани печени при ВГА. Однако значение отдельных клеточных механизмов противовирусного иммунитета и регулирующая роль Т-хелперов в патогенезе ВГА и их прогностическая роль не изучены.
Целью нашего исследования является изучение роли активации отдельных субпопуляций клеток-эффекторов и регуляторных клеток иммунной системы в патогенезе ВГА и для прогнозирования развития его тяжелых форм. Было исследовано 25 человек: 13 больных ВГА (5 чел.- тяжелой формой, 8 чел. – средней тяжести) и 12 человек группы контроля. Помимо определения субпопуляционной структуры иммунокомпетентных клеток периферической крови, впервые при ВГА проводилось определение раннего маркера активации СD8+Т-лимфоцитов и NK-клеток - CD69+. Также определялось процентное содержание СD8+Т-лимфоцитов и СD4+Т-лимфоцитов, продуцирующих после активации in vitro интерферон-гамма, относящийся к цитокинам «1 типа».
У больных ВГА при неизмененной субпопуляционной структуре лимфоцитов выявлена тенденция к повышению содержания Т-лимфоцитов (CD3+), продуцирующих ИФН-гамма, по сравнению с группой контроля. Причем у больных тяжелым ВГА содержание CD3+ИФНгамма+ было достоверно увеличено как по сравнению с группой контроля, так и по сравнению с подгруппой больных среднетяжелым ВГА.
При ВГА также выявлено достоверное увеличение содержания Т-лимфоцитов-хелперов CD4+CD69+, в сочетании с тенденцией к повышению содержания CD4+ИФН-гамма+, что можно рассматривать как свидетельство развития иммунных реакций по клеточному типу с ведущей ролью Т-хелперов 1. При тяжелой степени ВГА тенденция к повышению содержания CD4+69+ сопровождалась достоверным увеличением количества CD4+ИФНгамма+, что является отражением дифференциации Т-хелперов в Т-хелперы1, определяющих развитие иммунных реакций по клеточному типу. Значительная выраженность последних может играть роль в существенном иммуноопосредованном повреждении гепатоцитов с развитием тяжелых форм болезни.
У больных ВГА была выявлена тенденция к повышению содержания CD8+69+ и CD8+ИФНгамма+ и выраженная положительная корреляция (k=0,7) между содержанием CD8+69+ и CD8+ИФНгамма+. При тяжелом ВГА достоверно было увеличено содержание CD8+69+ и наблюдалась тенденция в повышению содержания CD8+ИФНгамма+. Поскольку цитотоксичность CD8-лимфоцитов считается основным механизмом специфической противовирусной защиты и, одновременно, важным фактором повреждения гепатоцитов, можно допустить роль выраженной ранней активации CD8+-лимфоцитов в развитии тяжелых форм ВГА. Это предположение подтверждает установленная в группе больных ВГА выраженная корреляция (k=0,58) между содержанием CD8+69+ и уровнем АЛТ, отражающим степень повреждения гепатоцитов.
Нами установлена выраженная положительная корреляция содержания CD8+ИФНгамма+ и процентом фагоцитирующих моноцитов (k=0,95) и гранулоцитов (k=0,7), что свидетельствует в пользу взаимодействия этих клеток-эффекторов в обеспечении противовирусной защиты при ВГА. Была выявлена тенденция к повышению содержания натуральных киллеров CD16+69+ в общей группе больных ВГА и в подгруппе тяжелого ВГА по сравнению с группой контроля.
Таким образом, приведенные данные позволяют предполагать роль клеток-эффекторов иммунной системы (цитотоксических Т-лимфоцитов CD8, возможно и NK-клеток и макрофагов) в повреждении гепатоцитов при ВГА, а также демонстрируют значение повышенной активации регуляторных клеток CD4, клеток-эффекторов CD8 и NK-клеток в развитии тяжелой формы ВГА. Изученные иммунологические параметры может иметь значение в прогнозировании характера течения болезни лишь в сопоставлении с клиническими данными. Они могут рассматриваться как дополнение к системе клинической диагностики, в которой оценка системы защиты организма возможна по определению характера, последовательности развития и взаимосвязи патологических состояний в течение всей жизни пациента.
Роль циклических и адениловых нуклеотидов, активности Na+, K+, Ca2+ АТФ-аз в патогенезе острого и хронического гепатита В
Сервецкий К.Л., Миронов В.Ю., Никитин Е.В., Пясецкий Б.Н., Усыченко Е.М., Роганкова А.Л., Скрипник Л.М., Чабан Т.В., Буйко Е.А., Усыченко Е.Н., Совирда О.С., Федоренко Т.В., Гудзь В.А.
Одесский государственный медицинский университет
Учитывая высокую заболеваемость вирусным гепатитом В (ВГВ), причем как острым (ОГВ), так и хроническим (ХГВ), целый ряд вопросов, касающийся патогенеза остаются неуточненными. Сегодня известно, что ежегодно в мире регистрируется более 500 млн. случаев ОГВ. Вирус способен персистировать в организме, что обуславливает частую хронизацию процесса, с формированием ХГВ и цирроза. Установлено, что кардинальной основой ОГВ является иммунологически опосредованная инфекция, при которой активность гибели гепатоцитов зависит от интенсивности иммунных реакций, т.е. антителзависимым цитолизом, а также аутоиммунными реакциями. Кроме иммунологических проблем значительное количество работ посвящено исследованию особенностей метаболизма углеводов, жиров, витаминов и мембранной патологии.
Одной из нерешенных проблем является роль системы циклических и адениловых нуклеотидов, контролирующей метаболические процессы на клеточном и субклеточном уровне. Регуляторное влияние циклических нуклеотидов на обмен белков и нуклеиновых кислот осуществляется не только на транскрипционном и посттранкрипционном уровне, но и на ферментном, через изменение активности ряда ферментов биосинтеза и катаболизма аминокислот, нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Исследование этих процессов, на наш взгляд, дает возможность выяснить молекулярные механизмы нарушения метаболизма и степень деструкции в печени, особенно при тяжелых формах ОГВ, в различных возрастных группах и в зависимости от пола.
В литературе до настоящего времени отсутствует целостное представление о механизмах нарушения трансмембранного транспорта, его связь с энергетическим обменом, лежащим в основе цитопатических трансформаций в гепатоците, также недостаточно исследованы механизмы дезинтеграции мембран гепатоцитов и дезорганизации клеточных энзимных систем, которые определяют функциональную способность паренхимы печени при ее вирусном поражении, что сопровождается снижением эндогенного пула АМФ и АДФ, вследствие чего уменьшается содержание АТФ в эритроцитах.
Известно, что одной из основных теорий лизиса гепатоцитов при ХГВ является теория пероксидации. Одной из важнейших сторон этой теории является повреждение и деструкция мембран гепатоцитов, однако практически отсутствуют сведения по трансмембранному транспорту ионов Na+, K+, Ca2+ и их взаимосвязи с регуляторными системами.
Под наблюдением находилось 60 больных ОГВ и 60 больных ХГВ. Распределение больных по полу и возрасту было равномерным. Диагноз верифицирован с помощью эпидемиологических, клинических, биохимических исследований, выявлением маркеров гепатита В с помощью иммуноферментного анализа и в полимеразной цепной реакции. Контрольные исследования проведены у 30 доноров (женщин и мужчин).
Определение содержания циклических нуклеотидов – циклического аденозинмоенофосфата (цАМФ) и циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) проводили в эритроцитах с использованием стандартных наборов Ria фирмы “Amersham” (Великобритания).
Концентрацию адениловых нуклеотидов - аденозинмонофосфата (АМФ), аденозиндифосфата (АДФ) и аденозинтрифосфата (АТФ) определяли с помощью наборов Test-Combination фирмы “Boeshringer”. Размерность концентрации нмоль на 1 мл эритроцитарной массы.
Активность Na+, K+, Ca2+ аденозинтрифосфатаз (Na+, K+, Ca2+ АТФ-аз) определяли по разнице активностей при добавлении убаина и при его отсутствии. Активность АТФ-аз оценивали по приросту неорганического фосфата в среде инкубации. Неорганический фосфат определяли по методу В.П. Скулачова и выражали в нмоль неорганического фосфата на 1 мл эритроцитарной массы.
Статистическую обработку данных проводили в электронных таблицах Microsoft Excel 2000 с помощью пакета статистического анализа.
Результаты исследований позволяют сделать следующие выводы:
1. Исследование системы циклических нуклеотидов в эритроцитах больных ОГВ выявило снижение содержания цАМФ и увеличение цГМФ, что свидетельствует о сдвиге метаболических процессов в сторону катаболизма. Наиболее выраженные изменения отмечены у мужчин зрелого и пожилого возраста.
2. Установлено, что концентрация АМФ, АДФ и АТФ в крови доноров имеют существенные отличия в зависимости от возраста и пола.
3. При ОГВ отмечено статистически достоверное снижение концентрации АМФ, АДФ и АТФ в эритроцитах. Снижение более выражено у мужчин зрелого и пожилого возраста.
4. При обследовании доноров было установлено, что активность Na+, K+, Ca2+ АТФ-аз существенно зависит от пола и возраста.
5. Отмечено статистически достоверное (t>2)снижение активности Na+, K+, Ca2+ АТФ-аз в эритроцитах больных ХГВ в зависимости от пола и возраста.