Geum.ru

Актуальные вопросы охраны

Вид материалаДокументы

Содержание


Морозова О.И., Генова О.А. , Корягина А.А. , Козлов В.К.
Подобный материал:
1   ...   65   66   67   68   69   70   71   72   ...   123

Морозова О.И.1, Генова О.А. 2, Корягина А.А. 1, Козлов В.К. 1


ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К РАЗВИТИЮ НЕФРОПАТИЙ И ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА У ДЕТЕЙ ХАБАРОВСКОГО КРАЯ

ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства1,

ГОУ ВПО «Дальневосточный государственный медицинский университет» Росздрава2

г. Хабаровск


В последние годы мы снижение числа здоровых детей, рост хронической и рецидивирующей патологии, снижение возраста начала заболевания при параллельном повсеместном ухудшении экологической ситуации.

В организме человека существует ферментативная система, ответственная за обезвреживание экзо- и эндотоксинов, которая кодируется генами «внешней среды» – гены ферментов системы цитохрома Р450 (CYP), ацетилтрансфераз (NAT), глутатионтрансфераз (GST), параоксоназы (PON1) и др. Результатом дефектной работы генов может быть избыточное образование токсических веществ или задержка их выведения из организма, что и приводит к развитию различных заболеваний. Выявление связи генетических полиморфизмов системы детоксикации ксенобиотиков (СДК) с различными мультифакториальными заболеваниями открывает возможности для их первичной профилактики, начиная с детского возраста.

С использованием метода полимеразной цепной реакции проведено исследование генетических полиморфизмов в генах СДК у 30 детей с нефропатиями и у 35 – с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Группу контроля составили 14 здоровых детей 10-17 лет. Изучали однонуклеотидные замены в генах: CYP1A1(Ile462Val), CYP2E1(-1293G/C), GSTP1(Ile105Val), GSTP1(Ala114Val), NAT2(Gly286Glu), NAT2(Lys268Arg), NAT2(Leu161Leu), NAT2(Arg197Gln), PON1(Gln192Arg) и делеционные полиморфизмы: GSTT1del, GSTM1del.

Использовали тест-системы для диагностики SNP производства НПФ «Литех» (Москва). Геномную ДНК выделяли с помощью реагента «ДНК-ЭКСПРЕСС-кровь». Для детекции делеционного полиморфизма генов глутатионтрансферазы М1 и Т1 применяли тест-системы производства ООО «Центр молекулярной генетики» (Москва). Геномную ДНК выделяли сорбционным способом с помощью реагента «DNA-prep» (Москва). Визуализацию результатов амплификации проводили методом электрофореза в 3,0% агарозном геле.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета прикладных программ Statistica v.6, Microsoft Office XP for Windows. Различия между величинами определяли с помощью t-критерия Стьюдента с учётом нормального распределения. Полученные различия считали достоверными при вероятности события не менее 95%. Для оценки ассоциаций полиморфных вариантов генов с патологическим фенотипом рассчитывали показатель OR «отношение шансов» (Брагина Е.Ю., 2008).

При сравнении частот генотипов выявлено значимое различие по генам 2 фазы СДК в группе детей с нефропатиями и в контроле. Мутантная гомозигота в гене GSTP1(Ala114Val) генотип Val/Val и в гене NAT2(Leu161Leu) генотип t/t обнаружены только у детей основной группы (p<0,01) Результатом работы дефектных генов является нарушение 2 фазы детоксикации ксенобиотиков, которая заключается в дезактивации токсических продуктов метаболизма 1 фазы (активированных кислородных метаболитов). Повышенное содержание гидроперекисей оказывает повреждающее действие на органы и ткани и вызывает развитие патологического процесса. Также установлено, что однонуклеотидные замены в гене PON1(Gln192Arg) выявляются в 3 раза чаще у детей с уронефрологическими заболеваниями (60,0%), чем в группе контроля (21,4%) (p<0,01). Выявлена статистически значимая ассоциация аллеля Gln/Arg гена PON1 с развитием нефропатий у детей (OR=5,5; DI=51,1-68,9; p<0,02). По данным литературы, фермент параоксоназа гидролизует широкий диапазон токсических фосфорорганических метаболитов, которые широко используются в качестве сельскохозяйственных удобрений. Выявленная нами закономерность установлена впервые и может свидетельствовать о повышенной чувствительности детей с почечной патологией к экотоксикантам, в частности, к повышенному содержанию фосфорорганических соединений в пище.

При анализе полиморфизмов в генах 1 и 2 фазы СДК у детей с различными нефропатиями установлено, что генотип Ile/Val гена CYP1A1(Ile462Val) наблюдается только в группе детей с тубулоинтерстициальными нефритами и врождёнными пороками развития (p<0,05 в сравнении с группой здоровых детей). Результатом дефектной работы гена является избыточная продукция активированных кислородных метаболитов и повреждение органов-мишеней, в данном случае – почек. Достоверно чаще у детей с тубулоинтерстициальными нефритами определяется мутантаная гомозигота Val/Val с заменой аланина на валин в 114 положении гена GSTP1 (p<0,05 с группой контроля). Таким образом, нами выявлена генетическая диссоциация экспрессии ферментов СДК у детей с тубулоинтерстициальным нефритом, что может являться основой формирования данной патологии. У всех детей с врождёнными пороками развития органов мочевыделительной системы обнаружен делеционный полиморфизм гена GSTM1, разница с группой контроля достоверна (p<0,05). Наличие выявленного генотипа предопределяет чувствительность этой группы детей к экотоксикантам, развитию тяжёлых инфекционных процессов и окислительному стрессу. Не исключено, что развитие пороков мочевыделительной системы у детей является результатом реализации генетического риска в ответ на воздействие экотоксикантов во время беременности матери.

При изучении состояния генов СДК у детей с заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта обнаружены различия c группой контроля в генах 2 фазы. Мутантные гомозиготы в гене NAT2(Lys268Arg) выявлены только у детей с патологией органов желудочно-кишечного тракта (p<0,05). Фермент ацетилтрансфераза (NAT2) у человека экспрессируется в печени и кишечнике, как органах-мишенях на пути экотоксикантов, поступающих с пищей. Дети с заболеваниями органов пищеварения, по нашим данным, достоверно чаще являются «медленными ацетиляторами», что приводит к задержке в организме токсических веществ. Нормальный аллель гена PON1(Gln192Arg) обнаружен в 1,7 раза реже в группе наблюдения, чем у здоровых детей (p<0,05). Таким образом, дети с заболеваниями желудочно-кишечного тракта составляют группу риска по развитию токсических осложнений при попадании в организм фосфорорганических соединений.

Достоверные различия получены при анализе полиморфизмов в гене NAT2 у детей с различными заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта. Мутантная гомозигота t/t гена NAT2(Leu161Leu) чаще обнаруживается у детей с хроническими гастродуоденитами и дискинезией желчевыводящих путей. Поэтому дети с данной патологией, являясь «медленными ацетиляторами», составляют группу риска по развитию токсических осложнений.

Таким образом, основой формирования нефропатий у детей в Хабаровском крае является генетически детерминированная диссоциация в работе ферментов 1 и 2 фаз СДК. Выявлена ассоциация генотипа Gln/Arg гена PON1 с развитием нефропатий у детей. Дети с хроническими гастродуоденитами и дискинезией желчевыводящих путей достоверно чаще являются «медленными ацетиляторами», что предрасполагает их к развитию токсических реакций в ответ на воздействие экзотоксикантов.