Geum.ru

Актуальные вопросы охраны

Вид материалаДокументы

Содержание


Гусева О.Е., Лебедько О.А., Тимошин С.С.
ГОУ ВПО Дальневосточный государственный медицинский университет
Гусева О.Е., Лебедько О.А., Тимошин С.С.
Подвергнутых пренатальной гипоксии
Подобный материал:
1   ...   14   15   16   17   18   19   20   21   ...   123

Гусева О.Е., Лебедько О.А., Тимошин С.С.


ВЛИЯНИЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ АНАЛОГОВ ДЕРМОРФИНА НА СТРУКТУРНО-МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ ГОМЕОСТАЗ СИСТЕМЫ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ БЕЛЫХ КРЫС НА РАННЕМ ЭТАПЕ ПОСТНАТАЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА

ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН – НИИ охраны материнства и детства;

ГОУ ВПО Дальневосточный государственный медицинский университет

Росздрава, г. Хабаровск


В настоящее время фундаментальной основой в пульмонологии является изучение молекулярных механизмов пато- и саногенеза, одним из основных направлений которого считается исследование биогенеза активных кислородных метаболитов (АКМ). В качестве мессенджеров межклеточной и внутриклеточной сигнализации, радикальные дериваты кислорода регулируют морфогенез органов дыхания, обеспечивая реализацию антагонистических процессов детерминации, пролиферации, дифференцировки, редукции и интеграции. Создание нового поколения лекарственных средств, реализующих принципы «молекулярной лингвистики», является одной из основных задач медицины. В этом аспекте, вследствие высокой эффективности, низкой токсичности, возможности применения в наномолярных концентрациях, молекулярные регуляторы пептидной природы привлекают особое внимание исследователей. Пептидными препаратами, проходящими в настоящее время этап доклинических исследований, являются синтетические аналоги регуляторного пептида дерморфина.

Цель работы состояла в исследовании влияния синтетических аналогов дерморфина на биогенез активных кислородных метаболитов в легких и ДНК-синтетическую активность эпителиоцитов и гладких миоцитов трахеи новорожденных белых крыс.

Исследовали синтетические аналоги регуляторного пептида – дерморфина. Олигопептид H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH (условное название «седатин») – смешанный агонист опиоидных периферических μ-/δ- и антагонист центральных μ1- рецепторов, содержащий L-аргинин в N-фланговом положении. Для выяснения возможной роли оксида азота в реализации эффектов препарата, использовали безаргининовый аналог H-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH. Эксперименты проводили на 80 новорожденных белых крысах. Методом хемилюминесцентного (ХМЛ) анализа исследовали оксидативный статус различных биосубстратов экспериментальных животных. Регистрацию ХМЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS 50B «PERKIN ELMER» по методикам Ю.А. Владимирова и соавт. (1991), М.П. Шерстнева (1997), А.В. Арутюняна и соавт. (2000), Z. Cheng et. al. (2003).

Исследованию подвергали гомогенаты легких новорожденных белых крыс. Определяли: (Ssp); (S-luc); (S-lum); (h); (Sind-1); (H); (Sind-2). Процессы синтеза ДНК в гладких миоцитах трахеи исследовали методом радиоавтографии. За 1 час до эвтаназии животным вводили 3Н-тимидин в дозе 1 мкКюри/г (уд.активность 84 Кюри/моль). Радиоавтографы готовили по стандартной методике: определяли количество клеток, находящихся в S-периоде (индекс меченых ядер – ИМЯ, %) и скорость прохождения клетками синтетического периода клеточного цикла (интенсивность метки – ИМ, число треков).

Установлено, что аргининсодержащий синтетический аналог дерморфина в легких активизирует антиоксидантную антирадикальную систему защиты (Sind-2), снижает содержание гидроперекисей липидов (h) и уровень образования и накопления перекисных радикалов (Sind-1) на фоне сохраняющихся в пределах контрольных цифр показателей интенсивности свободнорадикальных процессов – (Ssp); (S-luc); (S-lum) и устойчивости субстрата к перекисному стрессу (H). Полученные данные свидетельствуют о способности аргининсодержащего олигопептида модулировать биогенез АКМ определенным образом – активируя эндогенные механизмы детоксикации и ингибируя генерацию АКМ.

При исследовании ХМЛ гомогенатов легких 7-суточных белых крыс, получавших безаргининовый аналог, не выявлено сколь-либо значимых изменений свободнорадикального статуса. Все показатели сохранились в пределах контрольных значений.

При изучении влияния аргининсодержащего аналога на показатели активности синтеза ДНК в клетках эпителиально-гладкомышечного компартмента трахеи крыс, установлено наличие митогенного эффекта пептида в отношении эпителиоцитов и отсутствие пролиферотропных свойств – в отношении гладких миоцитов.

В эпителии трахеи ИМЯ увеличился на 35%, при этом показатели ИМ оставались в пределах контрольных уровней. Введение безаргининового аналога не оказало влияния на интенсивность клеточного деления и скорость прохождения S-периода эпителиоцитами и гладкими миоцитами.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о способности аргининсодержащего синтетического аналога дерморфина модулировать биогенез АКМ в легких и синтез ДНК в эпителиально-гладкомышечном компартменте трахеи новорожденных белых крыс, а также об оксид-азот зависимых механизмах реализации этих эффектов.

Гусева О.Е., Лебедько О.А., Тимошин С.С.


ВЛИЯНИЕ H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH НА БИОГЕНЕЗ АКТИВНЫХ КИСЛОРОДНЫХ МЕТАБОЛИТОВ И СИНТЕЗ ДНК

В РЕСПИРАТОРНОЙ СИСТЕМЕ НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫС,

ПОДВЕРГНУТЫХ ПРЕНАТАЛЬНОЙ ГИПОКСИИ

ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН – НИИ охраны материнства и детства;

ГОУ ВПО Дальневосточный государственный медицинский университет

Росздрава, г. Хабаровск


Одной из актуальнейших задач современной детской пульмонологии является поиск эффективных методов коррекции структурно-метаболических нарушений в системе органов дыхания на ранних этапах онтогенеза. Пренатальная гипоксия является ведущим фактором риска формирования пневмопатий новорожденных, сопровождающихся в большинстве случаев ремоделированием воздухоносных путей, в т.ч. нарушениями структурного гомеостаза гладкомышечного компартмента. Пептидными препаратами, проходящими в настоящее время этап доклинических исследований, являются синтетические аналоги регуляторного пептида дерморфина. К ним относится: аргининсодержащий аналог H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH – смешанный агонист периферических μ-/δ- рецепторов и антагонист центральных μ1- рецепторов эндогенной пептидергической системы, широко представленной в органах дыхания и активно участвующей в процессах структурно-функционального созревания легких.

Цель работы состояла в исследовании влияния H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH на биогенез активных кислородных метаболитов и ДНК-синтетическую активность гладких миоцитов трахеи новорожденных белых крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии.

Эксперименты проводили на 102 новорожденных белых крысах. Состояние гипоксии моделировали ежедневным 4-часовым пребыванием самок-крыс в барокамере СБК-49 (высота 9000 м.), с 14-й по 19-й день беременности. Методом хемилюминесцентного (ХМЛ) анализа исследовали оксидативный статус легких экспериментальных животных. Регистрацию ХМЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS 50B «PERKIN ELMER» по методикам Ю.А. Владимирова и соавт. (1991), М.П. Шерстнева (1997), А.В. Арутюняна и соавт. (2000), Z. Cheng et. al. (2003). Исследованию подвергали гомогенаты легких новорожденных белых крыс. Определяли: (Ssp); (S-luc); (S-lum); (h); (Sind-1); (H); (Sind-2). Процессы синтеза ДНК в гладких миоцитах трахеи исследовали методом радиоавтографии. За 1 час до эвтаназии животным вводили 3Н-тимидин в дозе 1 мкКюри/г (уд.активность 84 Кюри/моль). Радиоавтографы готовили по стандартной методике: определяли количество клеток, находящихся в S-периоде (индекс меченых ядер – ИМЯ, %) и скорость прохождения клетками синтетического периода клеточного цикла (интенсивность метки – ИМ, число треков).

Анализ экспериментальных данных продемонстрировал, что воздействие внутриутробной гипоксии интенсифицировало процессы свободнорадикального окисления в легких новорожденных белых крыс (в т.ч. продукцию супероксид-анион, гидроксил- и перекисных радикалов), активизировало перекисное окисление липидов: соответственно, уровни (Ssp), (Sluc), (Slum), (Sind-1), (h) возросли в 1,9-2,3 раза. Выявленные нарушения свободнорадикального статуса обусловлены ослаблением антиоксидантной антирадикальной защиты в целом и снижением резистентности к перекисному окислению, в частности – величины (Sind-2) и (Н) снизились в 2 раза и 3 раза, соответственно.

Одним из основных показателей структурного гомеостаза является ДНК-синтетическая активность. Авторадиографический анализ продемонстрировал, что в трахее 7-суточных новорожденных крыс, перенесших пренатальную гипоксию, имеет место изменение пролиферативной активности гладких миоцитов – ДНК-синтетическая активность гладких миоцитов превышала контрольные показатели в отношении ИМЯ – на 50,1%, ИМ – на 21%.

При исследовании влияния олигопептида на свободнорадикальный статус легких животных, перенесших внутриутробную гипоксию, выявили, что за исключением процесса образования перекисных радикалов в легких (показатель (Sind-1) хотя и снизился, но сохранил статистически значимое увеличение в сравнении с контролем), олигопептид нивелировал все прочие постгипоксические нарушения биогенеза активных кислородных метаболитов в легких (табл. 1). Поскольку повышение активности антиоксидантной защиты является одним из ключевых механизмов цитопротективного эффекта, данный эффект проявился у исследуемого олигопептида. Получены достоверные данные о снижении пролиферативной активности гладких миоцитов – показатель ИМЯ снизился на 31,46%, достигнув при этом значений, близких к контрольным показателям (табл. 2), показатель ИМ гладких миоцитов достоверно снизился на 15% по сравнению с группой «гипоксия».

Таким образом, воздействие пренатальной гипоксии вызывает повышение активности синтеза ДНК в гладких миоцитах трахеи на фоне развития оксидативного стресса в легких новорожденных белых крыс. Результаты наших исследований свидетельствуют, что олигопептид H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH способен корригировать постгипоксические нарушения пролиферативной активности гладких миоцитов трахеи и биогенеза активных кислородных метаболитов в легких на раннем этапе постнатального онтогенеза.