Тезисы докладов
| Вид материала | Тезисы |
- Тезисы докладов, 4952.24kb.
- Тезисы докладов, 1225.64kb.
- Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
- «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
- Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
- Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
- Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
- Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
- Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
- Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.
НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ДИАГНОСТИКЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ НА ОСНОВЕ ПРОТЕОМНОГО АНАЛИЗА СПЕКТРА СЕРИНОВЫХ ПРОТЕАЗ ПЛАЗМЫ КРОВИ
Д.Г. Матишов1), Е.И. Гоуфман2), Е.Ф. Шин1) , И.В. Браславская1),
А.Ю. Голиков1), Е.А. Черногубова1), С.А.Гусев2)
1)Южный научный центр РАН
2)Научно-исследовательский институт физико-химической медицины
МЗ РФ
В настоящее время ясно, что разработка методов ранней диагностики онкологических заболеваний позволит значительно улучшить результаты последующего лечения.
Анализ данных литературы, связанных с проблемами ранней диагностики онкологических заболеваний, показал, что надежно верифицировать заболевание только по какому-либо одному параметру практически невозможно. В связи с этим в настоящей работе мы попытались обосновать такой подход, реализация которого позволила бы создать многопараметрический метод ранней диагностики онкологических заболеваний.
Есть основания полагать, что фундаментальная составляющая такого подхода может быть реализована на основе новой высокопродуктивной протеомной технологии выявления ранних биомаркеров онкологических заболеваний человека с использованием комплексного подхода, сочетающего в себе аффинное выделение белков из биологических жидкостей, электрофоретическое разделение полученной смеси с последующей масс-спектрометрической идентификацией индивидуаль-ных белковых молекул.
Предварительные результаты проведенной работы позволили ограничить круг поиска маркеров онкодиагностики спектром сериновых протеиназ. Для реализации подхода к созданию многопараметрического метода диагностики разработана технология селективного выделения спектра сериновых протеаз из плазмы крови с помощью методов аффинной хроматографии.
Показана перспективность использования для выделения из плазмы крови сериновых протеиназ с помощью аффинной хроматографии на сорбентах, содержащих в качестве лигандов их ингибиторы: апротенин и соевый ингибитор трипсина, а также лизин как субстрат для широкого круга сериновых протеаз.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДООПЕРАЦИОННОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ НОВООБРАЗОВАНИЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ НА ОСНОВЕ ПАНЕЛИ РЕКОМБИНАНТНЫХ ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫХ АНТИГЕНОВ
С.А. Недоспасов1,2), П.В.Белоусов1), А.Ю. Сазыкин2), К.В. Ланщаков3), В.Э. Ванушко3), Ю.В. Шебзухов2), С.В. Хлгатян2), Д.В. Купраш1)
1)Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
2)НИИ физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского,
МГУ им. М.В. Ломоносова
3)Отделение эндокринной хирургии Института клинической эндокринологии, Эндокринологический научный центр, Москва
Ранее нами был идентифицирован ряд антигенов (ANKRD30A, KIAA1864, RGS5, KIF2C и SSX2), частоты встречаемости аутоантител к которым различаются в группах пациентов с доброкачественными и злокачественными опухолями щитовидной железы (ЩЖ). За отчетный период из пяти вышеуказанных объектов нами были отобраны 3 (ANKRD30A, KIAA1864, RGS5) без существенного снижения чувствительности и специфичности полученной панели в выявлении рака ЩЖ. Оценка прогностической ценности положительного и отрицательного результата анализа на выборке пациентов с «естественной» распространенностью злокачественных опухолей (пациенты с цитологическим диагнозом «фолликулярная неоплазия») составила 100 % и 80 % соответственно.
Нами была разработана и оптимизирована тест-система на основе стандартного иммуноферментного анализа в микропланшетном формате. В качестве модельного был выбран антиген RGS5. Поскольку очистка входящих в панель антигенов оптимизирована для быстрого выделения большого количества различных объектов (одностадийная аффинная хроматография на NI-NTA-агарозе), в большинстве белков выявляются минорные примеси белков E. coli, антитела к которым по данным иммуноблоттинга выявляются приблизительно у 50 % всех пациентов и здоровых доноров. Для блокировки этих антител была применена предварительная инкубация сывороток с осветленным лизатом E. coli, а для дальнейшего повышения отношения сигнал/фон было применено параллельное считывание сигнала от сывороток, в которых специфические антитела к RGS5 блокированы избытком RGS5-содержащих телец включения. Последующее вычитание этого фонового сигнала или расчет индекса ингибирования специфического сигнала позволил оценить концентрацию анти-RGS5-антител в тестовой панели dot-ELISA-положительных и отрицательных сывороток количественно и качественно соответственно.
С целью дальнейшего совершенствования определения антител на опухолеассоциированные антигены, таких как иммуноферментный анализ в микропланшетном формате или с использованием ковалентной иммобилизации на микрочастицах, изучение конформационных эпитопов и пр., нами был оптимизирован метод рефолдинга рекомбинантных антигенов «in situ» на колонке, при котором рефолдинг проводится градиентом концентрации мочевины 8М → 0М с последующей элюцией градиентом имидазола. Все три антигена, входящие в панель, были получены при помощи этого метода в растворимом виде. Чистота полученных антигенов сопоставима или даже выше, чем при элюции денатурированных белков градиентом pH, полученные белки иммунохимически активны. Таким образом, создана платформа для клинической реализации "серологического отпечатка пальцев" злокачественных опухолей ЩЖ для дифференциальной диагностики.