Geum.ru

Методическая разработка по подготовке лабораторного занятия №41 для студентов медицинского факультета Тема: Патогенные энтеробактерии.

Вид материалаМетодическая разработка
Роль неспорообразующих анаэробов в развитии инфекций
Методы диагностики
Возбудители газовой анаэробной инфекции
Условия культивирования, среды, признаки роста
Оптимальная температура культивирования +30-37С Образуют R-формы колоний на плотных средах.
Классификация патогенных клостридий по ферментативным свойствам
Клостридии с преимущественно протеолитическими свойствами
Факторы патогенности
3 клинические формы газовой анаэробной инфекции
Дифференцирующие признаки патогенных клостридий – возбудителей газовой анаэробной инфекции
Автор: доцент, к.м.н. Грабик И.Н.
Тема: Коринебактерии дифтерии. Бордетеллы коклюша. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеван
Автор: ст.преподаватель , кандидат биологических наук Р.В.Раковская
Подобный материал:
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   12



              1. Роль неспорообразующих анаэробов в развитии инфекций

Вызывают эндогенные гнойно-воспалительные инфекции в ассоциациях с факультативными анаэробами или аэробами:

А) мягких тканей (флегмоны, абсцессы, нагноение трофических язв, раневые инфекции)

Б) дыхательной системы (абсцессы легких, эмпиема плевры и др.)

В) опорно-двигательного аппарата ( остеомиелиты)

Г) моче-половой системы

Д) стоматологические заболевания (глубокий кариес, периодонтиты, периоститы, пародонтиты, хелитозис и др.).

3. Условия развития заболеваний
  1. нарушение тканевых баръеров кожи и слизистих оболочек
  2. уменшение уровня кислорода иі окислительно-восстановительного потенциала в тканях вследствие травм, спазмо вили нарушения проницаемости кровеносных сосудов
  3. хирургические вмешательства (операции на кишечнике, в челюстно-лицевой области)
  4. сахарный диабет, онкозаболевания, лейкозы, артериосклероз, эндартериит, алкоголизм
  5. длительное использование препаратов с иммуносупрессивным действием (кортикостероиды, иммунодепрессанты, антибиотики
  6. рентгеновское и гамма-облучение



  1. Лабораторная диагностика инфекций, вызванных неспорообразующими анаэробами

Материал для исследования : рановое содержимое, экссудат и др.( помещают в специальные контейнеры, наполненные инертным газом)

Методы диагностики:

Бактериоскопический – предварительная диагностика

Бактериологический – основан на виделении чистой культуры возбудителя и её идентификации по биохимическим свойствам

Биологический – проводят заражение белых мышей и кроликов при условии загрязнения исследуемого материала посторонними микроорганизмами

  1. Возбудители газовой анаэробной инфекции

    Морфология (общая характеристика)

    Грамм-положительные спорообразующие палочки, которые во время споруляции приобретают веретеноподобную форму;

    Не образуют капсулу (кроме C. perfringens);

    Малоподвижные перитрихи (кроме C. perfringens)
    Условия культивирования, среды, признаки роста

    Облигатные анаэробы;

    оптимальное рН 7,2-7,6;

    Культивируют на специальных средах для анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блера, среда Виллиса_Хобса

    C.perfringens

    Грамм (+) толстая палочка (1,5-2,0x4-8 мкм);

    образует центрально или субтерминально расположенную овальную спору;

    имеет капсулу;

    не подвижна

    Оптимальная температура культивирования +30-370С

    Образуют R-формы колоний на плотных средах.

    В среде Китта-Тароцци дает диффузное помутнение и большое количество газа.


    молоко – быстрое сворачивание за 3-5 часов - „штормовая реакция” (интенсивное газообразование и образование губчатого сгустка)

    среда Вильсона-Блера - почернение и разрывы среды

    Классификация патогенных клостридий по ферментативным свойствам

    клостридии с преимущественно сахаролитическими свойствами

    C. perfringens, C. septicum

    Клостридии с преимущественно протеолитическими свойствами


    C. novyi, C. hystoliticum
  2. Краткая характеристика особенностей патогенеза, клинического течения и лабораторной диагностики газовой анаэробной инфекции

Факторы патогенности
Патогенез
Клинические проявления
Лабораторная диагностика
Профилактика и лечение

1. Ферменты патогенности

2. многофрак-ционные экзотоксины:

основные (α, β, ε, ι )

минорные (δ, τ, κ, µ, ξ и др.)

3.Капсула
Действие экзотоксинов: гемолитическое, дермонекротическое, летальное, энтеротоксическое,

нейротоксическое, кардиотоксическое, нефротоксическое. Пусковое звено: разрушение a-токсином клеток в месте поражения, что делает возможным дальнейший протеолиз тканей
3 клинические формы газовой анаэробной инфекции:

эмфизематозная

отечная

смешанная

Характерно: отсутствие ярких проявлений воспаления в ране, бістро прогрессирующий некроз тканей и выраженная интоксикация
Методы:

1.Бактериоскопи-ческий (предварительный диагноз)

2. Бактериоло-гический (основной)

3.Биологический

4. Иммунохими-ческий
Профилактика: Неспецифическая - ПХО раны

Специфическая - поливалентная противогангренозная гетерологическая сыворотка

Лечение

Неспецифическое – антибиотики (цефалоспорины или пенициллины)

Специфическое - видоспецифические антитоксические сыворотки
      1. Перечень теоретических вопросов.
              1. Морфология и культуральные свойства клостридий анаэробной инфекции.
              2. Факторы патогенности клостридий анаэробной инфекции, патогенетическое действие их токсинов и ферментов.
              3. Условия возникновения газовой анаэробной инфекции, основные проявления в ране.
              4. Микробиологическая диагностика раневой анаэробной инфекции.
              5. Специфическая профилактика и терапия раневой анаэробной инфекции.
              6. Основные представители неклостридиальных анаэробных бактерий семейств бактероидов, пептококков, вейлонелл. Их роль в возникновении гнойно-воспалительных процессов в ране.
      1. Источники информации:

Литература (основная):
  1. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 322-329,333-334.
  2. В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 323-330, 336-340.
  3. А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петерб.,2002. Стр.423-427.
  4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999. Стр.286-291.
  5. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков, 1999. Стр.310- 314, 316-317, 318.
  6. Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 141-147.
  7. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр. 448-453.
  8. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр. 147-150.
  9. М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., 1973. Стр.267-270.

Литература (дополнительная):
  1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
  2. А.Н.Маянский. Микробиология для врачей. Н.Новгород, 1999. Стр.139-152, 153-164.
  3. Лекционный материал.
    1. Ориентировочная основа действия (ООД)

Схема микробиологической диагностики газовой анаэробной инфекции

Материал для исследования: некротизированные ткани, экссудат из раны, перевязочный и шовный материал, инородные тела из раны

Бактериоскопическое исследование

- мазок, окраска по Грамму;

- мазок, окраска метиленовым синим;

- мазок, окраска по Бурри-Гинсу;

- РИФ.

Ответ.

Бактериологическое исследование:
      1. посев на среду Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, молоко, среду Виллиса-Хобса;
      2. пересев на кровяной агар с глюкозой;
      3. характер колоний;
      4. мазок, окраска по Грамму;
      5. препарат «висячая капля» для определения подвижности;
      6. пересев на среду Китта-Тароцци (чистая культура);
      7. посев на углеводный ряд Гисса, желатин;
      8. реакция нейтрализации токсина антитоксином (определение серотипа).

Ответ.

Ускоренные методы:
      1. лецитиназная проба для выявления токсина перфрингенс в исследуемом материале с помощью диагностической сыворотки анти-перфрингенс
      2. посев материала на Китта-Тароцци, молоко, среду Вильсона-Блера для определения через 6-8 часов специфичесих признаков роста C.perfringens.

Ответ.

Биологическое исследование (для определения серотипа выделенной чистой культуры)
      1. РН с целью определения типа токсина в опыте на мышак, зараженных смесью фильтрата культуры и типоспецифических антитоксических сывороток.

Ответ.


Дифференцирующие признаки патогенных клостридий – возбудителей газовой анаэробной инфекции


Вид
Сахаролитические свойства
Разжижение желатина
Рост в молоке
Колонии на среде Виллиса-Хобса

лактоза
глюкоза
маннит

C.perfringens
+ (КГ)
+ (КГ)
-
+
Быстрое створажива-ние («штормовая реакция»)
Красные, с зоной опалесценции (за счет расщепления лактозы и образования лецитиназы)

C.hystoliticum
-
-
-
+
Быстрое створажи-вание и пептонизация
Бесцветные, без зоны опалесценции (лактозо- и лецитиназо-отрицательные)

C.novyi
-
+
-
+
Медленное створажива-ние

Бесцветные с зоной опалесценции (образуют лецитиназу, лактозо-отрицательные)

C.septicum
+(КГ)
+(КГ)
-
+
Медленное створажива-ние
Бесцветные с зоной опалесценции

C.sporogenes
-
+ (КГ)
-
+
Медленное створажива-ние
Бесцветные, без зоны опалесценции (лактозо- и лецитиназо-отрицательные)

C.sordelii
-
+(КГ)
-
+
Медленное створажива-ние
Бесцветные с зоной опалесценции (образуют лецитиназу, лактозо-отрицательные)

C.difficile
-
+
+
+
Не створажи-вает
Бесцветные, без зоны опалесценции (лактозо- и лецитиназо-отрицательные)



    1. Краткие методические рекомендации для работы студентов на лабораторном занятии.
      1. Методика проведения занятия.
  1. Приготовить препараты из споровых культур клостридий, выращенных в молоке, окрасить по Грамму и Цилю-Нильсену, промикроскопировать, обращая внимание на морфологию вегетативных клеток, размеры и расположение спор.
  2. Изучить характер роста клостридий газовой анаэробной инфекции на средах Китта-Тароцци, Вильсон-Блера, кровяном агаре, молоке.
  3. Изучить в демонстрационном опыте сахаролитические свойства клостридий на средах Гисса.
  4. Провести ускоренную диагностику газовой анаэробной инфекции путем обнаружения в материале лецитиназы C.perfringens. Для этого в 3 пробирки вносят по 0,3 мл исследуемого материала, в две из них – по 0,1 мл лецитина, затем в первую добавляется 0,1 мл сыворотки анти-перфрингенс, во вторую – 0,1 мл, а в третью – 0,2 мл физиологического раствора. Учет результатов производится через 40 мин. инкубации в термостате. При положительном результате (в материале лецитиназа C.perfringens) в первой пробирке раствор остается прозрачным за счет нейтрализации лецитиназы сывороткой анти-перфрингенс. Во второй пробирке содержимое мутнеет за счет расщепления лецитина, а в третьей – жидкость остается прозрачной.
  5. Ознакомиться с лечебно-диагностическими препаратами, которые используют для лечения, профилактики и лабораторной диагностики раневых клостридиозов.
  6. Внести в протокл данные про несопрообразующих анаэробов, возбудителей гнойно-воспалительных осложнений.
      1. Организационная структура проведения занятия.

№ этапа
Этапы работы
Время мин..
Средства обучения
Оборудование
Место проведения

1.
Организационная часть
2
-
-
У


Ч


Е


Б


Н


А


Я


К


О


М


Н


А


Т


А

2.

Проверка исходного уровня знаний:

Устно по предварительным вопросам

Письменно – по тестам


5

10
Джерела навч. інформації

Тести на вихідний рівень знань-умінь
-

3.

Инструктаж преподавателя по выполнению практической работы в соответствии с методическими рекомендациями
5
Методична розробка
-

4.
Самостоятельная работа студентов:
  • Приготовление, окраска по Грамму, микроскопия мазков-препаратов возбудителей газовой анаэробной инфекции, культивированных на молоке;
  • изучение характера роста патогенных клостридий в среде Китта-Тароцци, в лакмусовом молоке, на бреде Вильсона-Блера;
  • учт демонстрационной реакции выявления лецитинази C.perfringens в раневом экссудате для ускоренной диагностике газовой анаэробной инфекции ;
  • ознакомление с биопрепаратами, которые используют для лабораторной диагностики, специфической профилактики и лечения газовой анаэробной инфекции, занесение сведений в протокол;
  • внесение в протокол сведений про неспорообразующих анаэробов;
  • оформление выводов после проведения лабораторного занятия


15


5


10


5


10


3
Таблицы «Лабораторная диагностика газовой анаэробной инфекции»,

«Методы культивирования анаэробов»,

«Виделение чистых культур анаэробных бактерий»,

«Схема определения лецитинази C.perfringens в исследуемом материале”

алгоритмы исследования
Молоко, засеянное почвой;

Микроскоп;

Набор для окраски по Грамму;

Предметные стекла

Среды: кровяно-сахарный агар Цейсслера, Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, лакмусовое молоко


Демонстрационная реакция для определения лецитиназы клостридий перфрингенс в материале из раны

Профилактические и лечебные препараты, которые используют при анаэробных раневых инфекциях

5.

Оценка деятельности каждого студента и проверка усвоения темы:

письменно – с помощью обучаючих заданий;
15
Система обучающих заданий



6.
Подведение итогов занятия, задание для самостоятельной работы студентов при подготовке следующей темы
5






Автор: доцент, к.м.н. Грабик И.Н.


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №49

для студентов медицинского факультета.


Тема: Коринебактерии дифтерии. Бордетеллы коклюша. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
    1. Актуальность темы.

Случаи заболевания дифтерии и коклюша встречаются на Украине, поэтому изучение этой темы является обязательным для студентов медицинского университета.
    1. Цели изучения темы.

1.2.1. Цель общая: усвоить методы микробиологической диагностики дифтерии и коклюша.

1.2.2. Цель конкретная:

а). студенты должны знать морфологию и свойства возбудителей дифтерии и коклюша.

б). должны знать методы диагностики заболевания.

в). студенты должны знать методы специфической терапии и профилактики дифтерии и коклюша.

1.3.1. Обеспечение исходного уровня знаний- умений.

а). Определение понятий «патогенность» и «вирулентность».

б).Факторы вирулентности бактерий.

в).Характеристика токсинов бактерий.

г). Периоды развития инфекционной болезни.

Перечисление исходных знаний умений: знать факторы вирулентности бактерий и уметь их определять.

1.3.2. Тесты исходного уровня знаний – умений.


1.Пример ситуационной задачи:

В препарате от больного дифтерией выявлены желтые палочки с синими зернами на концах. Какой метод окраски был использован в этом случае?

А. Грама.

В. Циля – Нильсена.

С. Романовского – Гимзе.

Д. Нейссера.

Е. Леффлера.

Правильный ответ: Метод Нейссера
    1. Содержание обучения

1.4.1.Граф логической структуры содержания

- изучить морфологию коринебактерий и бордетелл в демонстрационных препаратах покрашенных по Грамму и Леффлеру;

- познакомиться с питательными средами на которых культивируют коринебактерии и бордетеллы ( среда Ру, среда Леффлера, среда Клауберга, среда Бучина, кровяной агар, теллуритовый кровяной агар, казеино-угольный агар);

- осуществить забор материала из зева с помощью ватно – марлевого тампона, приготовить препарат, покрасить по Грамму, промикроскопировать и зарисовать;

- провести дифференциацию коринебактерий дифтерии биоваров гравис, митис и дифтероидов по биохимическим свойствам в демонстрационном опыте

- познакомиться с методами определения токсигенности коринебактерий (метод преципитации в агаре)

- изучить биопрепараты, используемые для диагностики, профилактики и лечения дифтерии и коклюша

1.4.2.Перечень теоретических вопросов:

- морфология, тинкториальные и культуральные свойства возбудителей коклюша и дифтерии .

- токсинообразование.Методы изучения токсигенности коринебактерий дифтерии .

- методы лабораторной диагностики дифтерии и коклюша .

- особенности иммунитета при дифтерии и методы изучения уровня антитоксинов в крови человека,

- специфическая профилактика и лечение дифтерии и коклюша.


1.4.3.Источники обучающей информации:

Основная литература.

: К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Мікробіологія К.1992 (укр) с.240-243,286-292

К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. М. 1980 (рос) с.301-305,335-341.

А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Мед.микробиология, иммунология и вирусология. С-П.2002 (рос) с.406-412.

И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, Практическая микробиология Харьков. 1999 (рос) с.274-279.

Микробиология.Руководство к лабораторним занятиям Под ред. И.Л.Дикого Харьков 2004 (рос) с.433-440

О.І.Климнюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоков Практична мікробіологія, Тернопіль 2004 (укр) с.257-264

Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М.1984 (рос) с.171-175

М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед.микробиологии. М.1973 (рос) с.262-264,276-283.

Ю.С.Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии.М.1986 (рос) с.154-160.

Додаткова: Словник по мікробіології, вірусології, імунології та іефекційним захворюванням. Заг.ред. проф.Г.К.Палій К. 2004 с.64.

1.5.Ориентировочная основа действия.

Граф логической структуры микробиологической диагностики коклюша:

- материал для исследования: слизь из носоглотки и гортани, которые получают методом «кашлевых пластинок», мокроту, кровь;

- бактериоскопическое исследование: приготовление мазков – препаратов, окраска по методу Грама;

- бактериологическое исследование: посев материала на одну из элективных питательных сред ( КУА, Борде – Жангу, кровяной МПА);

- изучение подозрительных колоний

- мазок, окраска по Граму;

- пересев на скошенный агар;

- посев на углеводный ряд Гиса, среду с тирозином, среду с мочевиной;

- одновременно проводят РА на стекле со специфической сывороткой;

Серологическое исследование:

- РПГА, РСК, РА с сывороткой больного,

Окончательный ответ.

Граф логической структуры лабораторной диагностики дифтерии:

- материал для исследования: отделяемое пораженной слизистой оболочки зева, носа, конъюнктивы глаза, наружных половых органов.

- бактериоскопическое исследование

- приготовление мазков, окраска по Грамму, Леффлеру, Нейссеру.

Предварительный результат.

- бактериологическое исследование:

посев материала на одну из элективных питательных сред.

- через 8 – 12 часов инкубации готовят мазки, при отрицательном результате микроскопическое исследование повторяют через 18 – 24 часа;

- через 24 – 48 час. Изучают выросшие колонии и подозрительные пересевают на сывороточную среду;

- чистые культуры засевают на «пестрый ряд», среду с цистеином и мочевиной;

- одновременно проводят РА на стекле со специфическими противодифтерийными сыворотками;

- определяют токсигенность в РП в геле;

Биологический метод исследования.

- внутрикожное введение или подкожное введение материала морским свинкам.

Серологическое исследование

- РА или РНГА

Окончательный ответ.


1.7.Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1.Методика проведения занятия.


1этап. Промикроскопировать демонстрационные препараты из коринебактерий и бордетелл, окрашенные по методу Грамма, Нейссеру, Лефлеру.

Способы изучения: готовые демонстрационные препараты.

Оборудование – микроскопы, иммерсионное масло.

Место изучения – учебная комната.

Время обучения – 15 мин.

2 этап. Ознакомиться с питательными средами, которые используют для культивирования коринебактерий и бордетелл,

Способ обучения – готовые питательные среды Бучина, кровяной агар, Клауберга, казеино – угольный агар, свернутая сыворотка.

Место обучения – учебная комната.

Время обучения – 10 мин.

3. этап.Ознакомиться с методом изучения токсигенности коринебактерий

Способы изучения – таблица «Реакция преципитации», Чашка «реакция преципитации в геле».

Место изучения – учебная комната.

Время изучения – 15 мин.

4 этап. Провести дифференциальную диагностику биоваров коринебактерий дифтерии и дифтероидов.

Способы изучения – демонстрационный штатив с дифференциально – диагностическими средами ( МПБ с глюкозой, сахарозой, крахмалом, мочевиной)

Место проведения – учебная комната.

Время проведения – 15 мин.

5 этап. Изучить биопрепараты которые применяют для профилактики и специфического лечения дифтерии и коклюша.

Способы изучения – противодифтерийная сыворотка, вакцинв АКДС, АД анатоксин, АДС анатоксин.

Место изучения – учебная комната.

Время изучения – 15 мин.

6 этап. Зарисовать возбудителей и записать методы диагностики, определения токсигенности, дифференциальные признаки, схему микробиологической диагностики.

Место проведения – учебная комната.

Время проведения – 20 мин.


Автор:

ст.преподаватель , кандидат биологических наук Р.В.Раковская


Методическая разработка

по подготовке и проведению лабораторного занятия №50

для студентов медицинского факультета