Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №31 для студентов медицинского факультета Тема: Вирус иммунодефицита человека. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики спида

Вид материала

Методическая разработка

Содержание Обеспечение исходного уровня знаний-умений. 3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений. Содержание обучения. Система целевых обучающих задач. Организационная структура проведения лабораторного занятия. Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановская Тема: Вирусы бешенства и энцефалитов. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний. Цели изучения темы. Цель конкретная. Обеспечение исходного уровня знаний-умений. 3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений. 4. Содержание обучения. Вирусы клещевого и японского энцефалитов 4.2. Перечень теоретических вопросов. 4.3. Источники учебной информации. 6. Система обучающих задач. 7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии. Разведение сыворотки Разведение сыворотки Разведение сыворотки ... Полное содержание

Подобный материал:

• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №11 для студентов, 777.95kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №21 для студентов, 595.87kb.
• Методическая разработка по подготовке лабораторного занятия №41 для студентов медицинского, 1130.19kb.
• План лабораторных занятий по микробиологии для студентов 3 курса лечебного факультета,, 392.08kb.
• Информационный материал, 270.01kb.
• Правила радиационной безопасности при рентгенодиагностическом исследовании больных., 206.33kb.
• Методическая разработка по хирургии для студентов IV курса медицинского факультета, 49.72kb.
• Методическая разработка для студентов тема №1 Тема: «Острые и хронические бронхиты», 1824.04kb.
• Календарныйпла нлекций по микробиологии, вирусологии для студентов 2 курса агротехнического, 14.9kb.
• Методическая разработка по хирургии для студентов IV курса медицинского факультета, 42.2kb.

Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №31

для студентов медицинского факультета


Тема: Вирус иммунодефицита человека. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики СПИДа.

1. Актуальность темы. Среди пораженных вирусом иммунодефицита 10-30 % пациентов болеют тяжелой формой, 30-40 % - средней тяжести, а другие много лет остаются носителями.
   
2. Цели изучения темы.
   
   0. Цель общая. Ознакомиться с методами диагностики ВИЧ-инфекции.
      
   1. Цель конкретная. Знать этапы постановки иммуноферментного анализа для выявления противовирусных антител; интерпретировать результаты ИФА, поставленную с целью выявления противовирусных антител.
      
3. ^ Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
   

Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Современные методы диагностики инфекционных болезней”, „Иммунитет. Особенности противовирусного иммунитета”.


^ 3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.

Пример теста.

У пациент диагностировано вирусное заболевание. Какой метод микробиологической диагностики был использован для установления диагноза?

А. Аллергический

В. Микроскопический

С. Молекулярно-генетический

Д. Биохимический

Е. Фаготипирование

Ответ: С. Молекулярно-генетический

4. ^ Содержание обучения.
   
   0. Граф логической структуры содержания.
      

Вирус иммунодефицита человека

Семейство	Retroviridae
Морфология	Тип НК	Двухниточная РНК
	Форма	Сферическая
	Сложность строения	Сложный
Антигенное строение	Поверхностные Аг (гликопротеины суперкапсида (gp 41, gp 120) Внутренние типоспецифические Аг (структурные белки капсида - матриксный белок - р17, капсидный белок - р 24, связывающие белки - р9 и р6)
Методы культивирования	Перевиваемые культуры лейкозных Т-хелперов Монослойные культуры астроцитов Первичные культуры Т-хелперов, стимулированные ИЛ-2.
Резистентность	Чувствительный к Н2О2, концентрированным кислотам и щелочам, жирорастворителям (этиловый спирт, эфир, ацетон), глютаральдегиду. Стойкий к низким температурам, ионизирующей радиации, УФЛ
Источник заражения	Больной человек, носитель (ВИЛ-инфицированный)
Механизм и пути передачи заболевания	Парентеральный и трансплацентарный механизмы. Половой, трансфузионный, инструментальный, инъекционный, трансплантационный, трансплацентарный пути.
Органотропность	Клетки из CD-4 рецепторами: макрофаги, моноциты, дендритные клетки лимфатических узлов, астроциты, олигодендроциты головного мозга, клетки Лангерганса, Т-хелперы.
Иммунитет	Развитие иммунодепрессии.
Методы лабораторной диагностики	1) ИФА 2) РИА 3) иммуноблотинг 4) ПЦР
Профилактика	Раннее выявление источника инфекции. Разрыв механизмов и путей передачи инфекции.
Терапия	нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ингибиторы протеазы ингибитор интегразы 5) блокираторы вирусных рецепторов

0. Перечень теоретических вопросов.
   

1. Общая характеристика семейства Ретровирусов. Классификация, роль в патогенезе человека.
   
2. Ультраструктура, антигенное строение, резистентность ВИЧ.
   
3. Патогенез ВИЧ-инфекции.
   
4. Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.
   
5. Профилактика СПИДа.
   

0. Источника учебной информации.
   

Литература основная.

А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.-Петербург, 2002. - С. 319-327.

И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 375-387.


Литература дополнительная.

Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/Под ред. Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.

Сборник задач для подготовки к тестового экзамену по естественно-научным дисциплинам «Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. - К.:Медицина, 2004. - С.328-331.

5. Ориентировочная основа действия.
   

Граф логической структуры микробиологического исследования ВИЧ-инфекции

Материал для исследования: кровь, сыворотка.

Серологическая диагностика.

1 этап - выявление антител с помощью ИФА (трехкратный повтор).

2 этап - выявление антител к определенным вирусным белкам с помощью иммуноблотинга.

Молекулярно-генетический метод.

Выявление провируса в лимфоцитах, вирусных нуклеиновых кислот в патологическом материале с помощью ПЦР.

Вирусологическая диагностика.

1 этап - заражение культур клеток Т-лимфоцитов.

2 этап - идентификация вирусов с помощью ИФА, РИА.

6. ^ Система целевых обучающих задач.
   

Примеры тестов.

Репродукция каких вирусов включает обязательную интеграцию их нуклеиновой кислоты в геном клетки-хозяина.

А. Ретровирусов

В. Ортомиксовирусов

С. Пикорнавирусов

Д. Рабдовирусов

Е. Ротавирусов

Ответ: А. Ретровирусов

7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
   
   0. Методика проведения занятия.
      

1. Ознакомиться с принципом постановки иммуноферментного метода с целью выявления специфических антиВИЧ-антител в сыворотке крови больного.

Для воспроизведения принципа ИФА на занятии в качестве твердофазного носителя используются планшетки с адсорбированными на дне лунок антигенами. Студенты в лунки вносят по одной капле исследуемых сывороток и ставят планшетки в термостат на 30 минут (37 ⁰С). Потом промывают буферным раствором и вносят меченные ферментом (пероксидазой) антивидовые (антииммуноглобулиновые) сыворотки. Планшеты ставят в термостат на 30-40 минут при температуре 37 ⁰С. Промывают лунки буферным раствором, вносят по капле Н₂О₂ и ортофенилдиамина (ОФД). Ставят в термостат до появления желтой окраски в лунке с контрольной положительной сывороткой. Интенсивность окраски коррелирует с количеством присоединенного к твердой фазе энзима и отвечает количеству вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке. Схему реакции зарисовать.

8. ^ Организационная структура проведения лабораторного занятия.
   

№ этапа	Этап работы	Время (мин)	Средства обучения	Оборудование	Место прове-дення
1.	Организационная часть	2			Учебная лаборатория
2.	Проверка первичного уровня знаний	15	Тестовые задачи
3.	Инструктаж преподавателя. Преподаватель подчеркивает актуальность темы. Объясняет этапы постановки ИФА для выявления антител в сыворотке пациента. 3) Знакомит с принципом постановки иммуноблота.	10	Таблицы: Ультраструктура ВИЧ. Схема постановки ИФА. Схема постановки иммуноблота.
4.	Самостоятельная работа студентов.	40		Планшеты (1:2). Исследуемая сыворотка (1:2). АнтиIg сыворотки с ферментом (1:2). ОФД, Н2О2 (1:2). Буферный раствор (1:2). Пипетки (5:2).
5.	Написание контролирующих тестов.	10	Тестовые задачи
6.	Подведение итогов, оценка деятельности каждого студента	5-10
7.	Задание для самостоятельной работы при изучении следующей темы	3

^ Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановская


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №32

для студентов медицинского факультета


^ Тема: Вирусы бешенства и энцефалитов. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний.

9. Актуальность темы. Бешенство - острая инфекция ЦНС, которая сопровождается дегенерацией нейронов головного и спинного мозга; летальность для человека составляет 100%. С точки зрения передачи инфекции наиболее опасными являются собаки (до 90 % всех случаев), коты, дикие животные (скунсы, волки, лисицы).
   

Вирус клещевого энцефалита встречается в западных областях Украины. Инфицирование человека возможно алиментарным путем (некипяченое коровье и козье молоко) и при укусе иксодовых клещей. Сезонность - весенне-летняя.

Вирус японского энцефалита вызывает заболевание в основном у детей до 14 лет. Смертность достигает 20-80 %. Человек - тупиковый хозяин вируса. Сезонность - июнь-сентябрь. Переносчики вируса - комары рода Culex. Ареал вируса - Япония, Китай, Индия, Корея, Филиппины, Тайвань, юг Приморья.

10. ^ Цели изучения темы.
    
    0. Цель общая. Познакомиться с биологическими свойствами вирусов бешенства, японского и клещевого энцефалитов, методами лабораторной диагностики бешенства, японского и клещевого энцефалитов.
       
    1. ^ Цель конкретная. Усвоить: 1) методы прижизненного и постмортального выявления вируса бешенства в организме человека; 2) дифференциальные признаки уличного и фиксированного вирусов бешенства; 3) препараты для специфической профилактики бешенства. Уметь: 1) осуществлять постановку РТГА с целью идентификации вирусов японского и клещевого энцефалитов; 2) проводить учет результатов РСК, РТГА, РН с целью установления титра антител к возбудителям японского и клещевого энцефалитов.
       
11. ^ Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
    

Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Современные методы диагностики инфекционных болезней”, „Иммунитет. Особенности противовирусного иммунитета”.

^ 3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.

Пример теста.

Для профилактики инфекционного заболевания пациенту ввели вакцину. Какой вид иммунитета формирует такой препарат?

А. Активный искусственный

В. Активный приобретенный

С. Пассивный искусственный

Д. Пассивный приобретенный

Е. Врожденный.

Ответ: А. Активный искусственный.

^ 4. Содержание обучения.

4.1. Граф логической структуры содержания.

Вирус бешенства

Семейство	Rabdoviridae
Морфология	Тип НК	РНК
	Форма	Пулевидная
	Сложность строения	Сложный
Антигенное строение	Различают „дикий” штамм и фикс-вирус.
Методы культивирования	1) Перевиваемые культуры HeLa 2) Куриный эмбрион 3) Белые мыши
Резистентность	Чувствителен к детергентам, эфиру, спирту, УФЛ Стойкий к низким температурам
Источник заражения	Больные животные (кошки, собаки)
Механизм и пути передачи заболевания	Укусы и ослюнение ран. Инкубационный период - 12 дней - 1 год
Органотропность	Клетки ЦНС
Иммунитет	Вируснейтрализующие АТ, интерферон.
Методы лабораторной диагностики	Экспресс-диагностика: РИФ, ИФА, РИА. Молекулярно-генетический: ПЦР. Серологический: РСК, РТГА. Биологический. Цитоскопический: выявление телец Бабеша-Негри в гистологических срезах головного мозга.
Профилактика	Живая аттенуированная вакцина Культуральная инактивованная вакцина Иммуноглобулин

^ Вирусы клещевого и японского энцефалитов

Семейство	Flaviviridae
Морфология	Тип НК	РНК
	Форма	Сферическая
	Сложность строения	Сложные
Антигенное строение	Вирус клещевого энцефалита - 3 серотипа Вирус японского энцефалита - 2 серотипа
Методы культивирования	Чувствительные к УФЛ эфиру, высокой температуре. Стойкие к низким температурам, высушиванию.
Резистентность	Клеточные культуры HeLa Оболочки куриного эмбриона Белые мыши
Источник заражения	Животных и птицы
Механизм и пути передачи заболевания	Трансмиссивный: иксодовые клещи, комары рода Culex. Алиментарный: молоко.
Органотропность	Клетки ЦНС
Иммунитет	Стойкий
Методы лабораторной диагностики	Вирусологический Серологический Биологический Молекулярно-генетический
Профилактика	Инактивированные вакцины
Терапия	Гетерологические и гомологические иммуноглобулины Интерферон

^ 4.2. Перечень теоретических вопросов.

4.1.1. Таксономическое положение, морфология и резистентность вируса бешенства.

4.1.2. Патогенез бешенства.

4.1.3. Лабораторная диагностика бешенства: прижизненная и постмортальная.

4.1.4. Профилактика бешенства: неспецифичная и специфическая.

4.1.5. Таксономическое положение, морфология и резистентность вирусов клещевого и японского энцефалитов.

4.1.6. Методы культивирования и резистентность флавивирусов.

4.1.7. Патогенез клещевого и японского энцефалитов.

4.1.8. Методы лабораторной диагностики клещевого и японского энцефалитов.

4.1.9. Профилактика клещевого и японского энцефалитов: специфическая и неспецифичная.


^ 4.3. Источники учебной информации.

Литература основная.

К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 415-418, 425-427, 429-430.

В. Д. Тимаков. Микробиология, М., 1983. - С. 394-397.

А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.-Петербург, 2002. - С. 302-306, 312-315.

И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 369-375.

Л. Б. Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. - С. 239-240, 244-246.

Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1986. - С. 232-238, 248-249.

М. Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973. - С. 239-241, 261.

Литература дополнительная.

Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2004. - С. 67, 102, 139, 146.

Сборник задач для подготовки к тестового экзамену по естественно-научным дисциплинам «Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. - К.:Медицина, 2004. - С.328-331.

5. Ориентировочная основа действия.
   

Граф логической структуры лабораторного исследования бешенства

Материал для исследования: слюна, слюнные железы, мозг, сыворотка крови.

Микроскопическое исследование: окраска по Туревичу и Муромцеву гистологических срезов слюнных желез, мозга для выявления телец Бабеша-Негри.

Биологическое исследование: интрацеребральное заражение белых мышей (развитие паралитической формы бешенства); выявление телец Бабеша-Негри.

Серологическая диагностика: выявление антирабических антител в РСК, РИА, ИФА, РН на мышах.

Экспресс-диагностика: РИФ для выявления вирусных антигенов на мазках-отпечатках роговицы, гистологических срезах слюнных желез или мозга.


Граф логической структуры лабораторного исследования клещевого и японского энцефалитов.

Материал для исследования: спинномозговая жидкость, мозг, сыворотка крови.

Вирусологический метод: культивирование в культуре клеток, оболочках куриного эмбриона, в организме новорожденных мышей.

Индикация: ЦПД, бляшкообразование, гибель мышей и куриных эмбрионов.

Идентификация: РН, РТГА, РСК.

Серологический метод: выявление титра антител в РН, РТГА, РСК с парными сыворотками. Обнаруживают Ig M ( 3-4 день), Ig G (3 неделя).

Биологический: заражение новорожденных мышей.

Экспресс-диагностика: РИФ, РИА, ИФА.

Молекулярно-генетический метод: ПЦР.


^ 6. Система обучающих задач.

Примеры тестов.

Пациенту для профилактики бешенства была введена живая аттенуированная вакцина. Чем обеспечивается иммунитет после прививки против бешенства?

А. Фагоцитозом

В. Антитоксинами

С. Интерференцией

Д. Преципитинами

Е. Гемолизинами

Ответ: С. Интерференцией.


^ 7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

7.1. Методика проведения занятия.

1. Осуществить постановку реакции торможения гемагглютинации (капельний метод) с целью идентификации вирусов японского и клещевого энцефалитов. На предметное стекло к исследуемому материалу вносят диагностические сыворотки, а потом взвесь эритроцитов. Вид вируса определяют по сыворотке, которая тормозит гемагглютинацию эритроцитов.


2. Провести учет результатов реакции нейтрализации, поставленную с целью установления титра антител к вирусу клещевого энцефалита в сыворотке крови пациента. Диагностический титр - 1:10 и выше.

^ Разведение сыворотки
1:10	1:20	1:40	1:80	1:160

3. Провести учет реакции связывания комплемента, поставленной с целью установления титра антител в сыворотке крови больного японским энцефалитом. Диагностический титр - 1:64-1:256.

^ Разведение сыворотки
1:5	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320

12. Провести учет результатов реакции торможения гемагглютинации, поставленную с целью установления титра антител к возбудителям японского и клещевого энцефалитов. В первый ряд луночек планшетки к разведению сыворотки (1:10-1:5120) внесли диагностикум вируса клещевого энцефалита, во второй ряд - диагностикум вируса японского энцефалита. Диагностический титр - 1:1280 и выше.
    

^ Разведение сыворотки	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	1:1280	1:2560
Вирус клещевого энцефалита
Вирус японского энцефалита

^ 8. Организационная структура проведения лабораторного занятия.

№ этапа	Этап работы	Время (мин)	Средства обучения	Оборудование	Место прове-дення
1.	Организационная часть	2			Учебная лаборатория
2.	Проверка первичного уровня знаний	15	Тестовые задачи
3.	Инструктаж преподавателя. 1) Объясняет методику постановки РТГА для идентификации вирусов клещевого и японского энцефалитов. 2) Объясняет задание для проведения учета результатов демонстрационной РН с сывороткой больного клещевым энцефалит. 3) Объясняет задание для проведения учета результатов РСК с сывороткой больного японским энцефалитом. 4) Объясняет проведение учета результатов РТГА для установления титра антител к вирусам клещевого и японского энцефалитов. 5) Демонстрирует профилактические и диагностические препараты, которые применяют при бешенстве и энцефалитах.	10	Таблицы: Тельца Бабеша-Негри на гистологических срезах. Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций. Классификация вирусов человека. Вакцины, диагностические препараты.
4.	Самостоятельная работа студентов.	40		Типовые сыворотки к вирусам клещевого и японского энцефалитов, спинномозговая жидкость, 5 % взвесь эритроцитов, пипетки, предметные стекла, посуда с дезинфицирующим раствором - 1:2 Пробирки с РН - 1:4 Планшеты с РТГА - 1:4 Пробирки с РСК - 1:4
5.	Написание контролирующих тестов.	10	Тестовые задачи
6.	Подведение итогов, оценка деятельности каждого студента	5-10
7.	Задание для самостоятельной работы при изучении следующей темы	3

^ Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановская


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №33

для студентов медицинского факультета.