Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №31 для студентов медицинского факультета Тема: Вирус иммунодефицита человека. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики спида

Вид материала

Методическая разработка

Содержание Содержание занятия. Ориентировочная основа действий (ООД) Сыворотка крови Методы исследования Выделение вируса в культурах тканей (почки кроликов, эмбрионы человека) Индикация поЦПД (образование синцития) Идентификация вируса по РН, МФА Автор: доцент, кандидат биологических наук А.А.Чеснокова Тема: Аденовирусы. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний. 1.3 Обеспечение исходного уровня 1.4 Содержание обучения 1.4.3. Источники учебной информации 1.5 Ориентировочная основа действия. Рзк; ргга; ифа; риа 1.7 Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии. Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова

Подобный материал:

• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №11 для студентов, 777.95kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №21 для студентов, 595.87kb.
• Методическая разработка по подготовке лабораторного занятия №41 для студентов медицинского, 1130.19kb.
• План лабораторных занятий по микробиологии для студентов 3 курса лечебного факультета,, 392.08kb.
• Информационный материал, 270.01kb.
• Правила радиационной безопасности при рентгенодиагностическом исследовании больных., 206.33kb.
• Методическая разработка по хирургии для студентов IV курса медицинского факультета, 49.72kb.
• Методическая разработка для студентов тема №1 Тема: «Острые и хронические бронхиты», 1824.04kb.
• Календарныйпла нлекций по микробиологии, вирусологии для студентов 2 курса агротехнического, 14.9kb.
• Методическая разработка по хирургии для студентов IV курса медицинского факультета, 42.2kb.

Тема: Герпесвирусы. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний.

1. 
   Актуальность темы.
   

Множество путей и легкость передачи герпесвирусов, большое разнообразие клинических форм и распространенность заболеваний, возможная онтогенная активность возбудителя обусловливает актуальность герпесной инфекции.


1.2. Цели изучения темы.


1.2.1. Цель общая.

Освоить биологические свойства вирусов альфа-, бета- и гамма-герпесвирусов, их роль в патологии человека.


1.2.2. Цель конкретная.

1. Овладеть методами идентификации вирусов герпеса.

2. Освоить методы диагностики герпетической инфекции.

3. Освоить специфическую профилактику и лечение герпетической инфекции.


1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:

1. Морфология и ультраструктура вирусов.

2. Взаимодействие вируса с клеткой хозяина.

3. Культивирование вирусов.

4. Индикация вирусов.


1.3. Тесты на исходный уровень знаний-умений:


1.3.1. Вирусы, являющиеся абсолютными внутриклеточными паразитами, культивируют:

A – в культурах тканей

B – в среде 199

C – в среде Хэнкса

D – в куриных эмбрионах

E – в организме чувствительных животных

Правильный ответ: A, D, E


1.4. ^ Содержание занятия.

Вирусы роду Herpesviridae являются возбудителями широко распространенных – простого герпеса, ветряной оспы и опаясывающего герпеса. Среди взрослых часто выявляется вирусоносительство.

Для диагностики этих заболеваний используют вирусологические и серологические исследования.

Виросологическое исследование проводят путем заражения исследуемым материалом культур ткани (почки кролика, эмбрионы человека).

Серологическая диагностика основана на выявлении с помощью РСК, РН, РИФ, ИФА – нарастание в 4 раза титра специфических антител в крови больного в динамике заболевания.

Используют экпресс-диагностику – в мазках-отпечатках из спинно-мозговой жидкости выявляют с помощью противогерпесной флюоресцирующей сыворотки.


1.4.1. Граф логической структуры микробиологической диагностики герпесвирусной инфекции.

1. Вирусологический метод.

Материал для исследования: содержимое пузырьков, соскобы в области высыпаний.

Поставить и учесть ИФА.

2. Граф логической структуры вирусологической диагностики ветряной оспы.

Серологический метод.

Материал для исследования: сыворотка крови больного.

Учесть результаты РСК, поставленной с парными сыворотками больного.


1.4.2. Перечень теоретических вопросов:

1. Общая характеристика семейства герпесвирусов.

2. Классификация герпесвирусов.

3. Морфология и биологические свойства вируса простого герпеса, характеристика серотипов вируса.

4. Патогенез заболеваний, обусловленных вирусами простого герпеса. Особенности течения герпетической инфекции. Персистенция вируса.

5. Морфология и биологические свойства вируса ветряной оспы и опоясывающего лишая.

6. Морфология и биологические свойства цитомегаловируса.

7. Патогенез заболеваний, которые вызывают вирусы ветряной оспы и цитомегаловирусы.

8. Лабораторная диагностика герпетичной инфекции (цитологический, вирусологический, серологический, биологический методы).

9. Специфическая профилактика и терапия герпетических инфекций. Химиопрепараты, используемые для лечения герпетических инфекций.


1.4.3. Источники учебной информации.

Основная литература:

К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1992, с.340-342

К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.380-403

В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.418-422

А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петергбург, 2002, с.294-299

И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.391-394

О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, Тернопіль, 2004, с.354-356

Л.Б.Борисов. Медицинская микробиологии, вирусология, иммунология, М., 2002, с.256-552

Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,1986, с.225-227

Дополнительная литература:

Гайдаш І.С., Флегонтові В.В. Медична вірусологія, Луганськ, 2002, с.150-156

Посібник з медичної вірусології. Заг. ред. В.М.Гиріна, К., 1995, с.256-261


1.5. ^ Ориентировочная основа действий (ООД)

Диагностика герпесвирусной инфекции

Материал для исследования

^ Сыворотка крови

Клинический – корочки, содержимое везикул, слюна, спинно- мозговая жидкость, сгусток крови, клетки крови в выделениях шейки матки или влагалища, мазки из выделений язвы слизистой оболочки полости рта, половых органов, соскобы пораженной роговицы. Секционный – кусочки ткани головного и спинного мозга, печени, лимфотические узлы, нервные ганглии.

^ Методы исследования

Экспрессные

Вирусологический

Биологический

Серологический

І этап І этап

МФА, РИА, ИФА

^ Выделение вируса в культурах тканей (почки кроликов, эмбрионы человека)

Заражения животных (белые мыши, кролики, куриные эмбрионы)

РСК, РПГА, ИФА, РИА

Конечный Конечный

результат 6-24 час. ІІ этап ІІ этап результат 18-48 час.

^ Индикация поЦПД (образование синцития)		Индикация по клиническим проявлениям (керато-коньюктивит, язвы и рубцы на роговице; энцефалит, летальный исход. На хорионалантоисной оболочке куриных эмбрионов-бляшки)
ІІІ этап
^ Идентификация вируса по РН, МФА

Конечный

результат 3-4 суток ІІІ этап

Идентификация ви руса по РН

Конечный

результат 40 час.-5 суток

1.6. Система обучающиих заданий.


1.6.1. Больная М. 25 лет, страдает рецидивирующим лабиальным герпесом. Какие методы лечения можно рекомендовать больной:

A – лечение химиопрепаратами (зовиракс, герпевир и др.) во время обострения

B – антибиотикотерапия

C – использование герпетической инактивированной вакцины в период реконвалесценции

D – серотерапия

E – рентгенотерапия

Правильный ответ: во время оборстрения используют лечение химиопрепаратами, в период реконвалесценции – герпетическая инактивированная вакцина.


1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.


1.7.1. Методика проведения занятия.

Лабораторная диагностика герпесной инфекции базируется на испльзовании экспресс-методов (вирусологический и серологический) и серологического.

Экспресс-диагностика включает методы выявления вирус-специфического антигена с помощью ИФА и МФА.

Серологический метод основан на выявлении увеличения титра антител с помощью РПГА, ИФА, РСК.

1. С целью экспресс-диагностики герпетической инфекции поставить и учесть ИФА для выявления вирус-специфического антигена в исследуваемом материале (содержимое везикул, соскобы в области высыпаний). Для этого в лунки полистеролового планшета, на дне которых коньюгированы антигерпетические антитела, вносим исследуемый материал, помещаем в термостат, промывами буферным раствором и добавляем антиглобулиновую (антивидовую) сыворотку, меченую ферментом пероксидазой хрона. После термостатирования и промывки буфером вносим Н₂О₂ и ортофенилдиамин (ОФД). Изменение цвета жидкости свидетельствует о наличии герпесвируса в исследуемом материале.

2. Учесть результаты РСК, поставленной с парными сыворотками больного для выявления нарастания (в 4 рази) титра антител с целью диагностики ветряной оспы.


1.7.2. Организационная структура проведения лабораторного занятия.

№ этапа	Этапы работы	Время	Средства обучения	Оборудование	Место проведения
1	Проверка присутствующих	2	Исследуемый материал Анти-глобулиновая сыворотка меченая переоксидазой хрена Перекись водорода Буферный раствор Штативы с учетом РСК Таблицы по теме	Планшеты с твердо-фазным носителем Пипетки	Учебная лаборатория
2	Проверка исходного уровня знаний (тестовый контроль)	15
3	Устный опрос студентов по теме занятия	20
4	Тестовый контроль знаний по теме занятия	15
5	Лабораторная работа	30
6	Подведение итогов, оценка работы каждого студента	6
7	Задание для самостоятельной внеаудиторной работы при изучении следующей темы	2

^ Автор: доцент, кандидат биологических наук А.А.Чеснокова


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №34

для студентов медицинского факультета.


^ Тема: Аденовирусы. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний.

1.1 Актуальность темы обусловленная широтой розпространения и высокой инфекционностю аденовирусов, которые в природе находятся у млекопитающих, птиц, амфибий от которых человек получает инфекцию.

1.2 Цели изучения темы.

1.2.1 Цель общая: Уметь использовать биологические особенности аденовирусов для их идентификации.

1.2.2 Цель конкретная: Освоить методы диагностики аденовирусной инфекции с помощью экспресс-метода ( имунофлюонесцентного ), серологического и вирусологического.

^ 1.3 Обеспечение исходного уровня

1. Строение вириона

2. Репродукция вирусов

3. Методы индикации вирусов

1.3.1. Тесты исходного уровня знаний-навыков. Задача.

Пример. Для вирионов, которые не вызывают заболевания у человека характерна форма, которая названа ниже:

a. Сферическая

b Многогранная

c Куполовидная

d Шаровидная

e Сперматозоидная

Правильный ответ: е. Сперматозоидная форма характерна для бактериофагов.

^ 1.4 Содержание обучения

1.4.1. Граф логической структуры содержания

1.4.1.1 Материалом для исследования являются мазки и смывы, мокрота, соскобы с конюктивы, слюномозковая жидкость, испражнение, секционный материал.

1.4.1.2 Экспресс-диагностика аденовирусной инфекции включает имунофлюрисцентную микроскопию.

1.4.1.3 Выделение аденовирусов проводят при вирусологическом методе в культурах клеток (Heza, HEp-2, KB и др.) с следующей идентификацией по ЦПД, ИФА, РИА и идентификацией в РН, РПГА с эритроцитами белых крыс, или макак резус.

1.4.1.4 Для серологической диагностики применяют РЗК, РН, РГГА, ИФА, РИА (для парных сывороток возрастания титра антитов в 4 раза)

1.4.2. Перечень теоретических вопросов:

1. Структура и химический состав аденовирусов

2. Антигены аденовирусов

3. Культивирование и репродукция вирионов

4. Патогенез заболевания у человека

5. Лабораторная диагностика

6. Профилактика заболеваний.


^ 1.4.3. Источники учебной информации

Литература основная

КД. Пяткін, Ю.С. Кривошеін Мікробіологія К. І982 (укр) 345-347

1.К.Д.Пяткін,Ю.С.Кривошеін Микробиология М.1980(рос) 440,403-405

2.В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (рос) с 417-418

3. А.И. Коротеєв С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вірусологія Санк. - Петерб 2002 (рос)

4. И.Л. Дикий, И.Ю. Холуняк, Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний,
   Микробиология Харк. І999 (рос) с 195-197
   
5. Микробиология. Руководство к лабораторним занятиям.Харк 2002
   6.О.І. Климнюк, І.О, Ситник, М.С. Творчо, В.П. Широбоков, Практична
   мікробіологія, Терн, 2004 357-358
   

7. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рос)
   
8. М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М, 1973 (рос) 231-233
   

9. Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по

медицинской микробиологии М. 1986 (рос)

Дополнительная

1. Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг, ред, проф., Г .К. Палій, К, 2004

2. Гайдаш І.С, Флегонтові, В.В. Медична вірусологія, Луганськ 2002


^ 1.5 Ориентировочная основа действия.


Схема лабораторного исследования аденовирусной инфекции

Матеріал: Мазки и смывы из носоглотки, мокрота, соскобы с конюктивы, кровь, испражнения.

Экспресс метод	Вирусологическое исследование	Серологическая диагностика
Риноцитоскопия эпителиальных клеток носоглотки и конюктивы с помощью реакции имунофлюоресценции	Заражение культури тканей (HeZa, HEp-2, KB и др.)	^ РЗК; РГГА; ИФА; РИА нарастание титра антител в парных сыворотках в 4 раза и больше (вторую сыворотку берут на 18-20 день болезни)
Ориентировочный ответ через 2-3 ч.	Индикация по ЦПД, ИФА, РГГА, РГА (эритроциты обезьян, крыс)	Конечный ответ

Конечный ответ 3-21 день


^ 1.7 Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1 Методика проведения занятия

Семья Adenovіrіdae включает вирусы тропные к железам млекопитающих, птиц, амфибий. Вирус первично локализуется в эпителии верхних путей, коньюктивы, слизистой оболочки, мочеполовых органов, регионарных лимфатических узлов человека. Репродукция вирусов происходит в ядрах клеток. Пораженные клетки разрушаются, что сопровождается воспалением.

В исследуемом материале (мазки и сливы с ротоглотки, соскобы с коньюктивы, испражнения и др.) с помощью люминесцентной микроскопии определяют наличие вирусов.

Вирусологическое исследование проводят на культуре тканей КВ, с следующей идентификацией в ПН, РГГА с эритроцитами белых крыс и обезьян.

Серологическое исследование проводят с парными сыворотками в РЗК, РНГА, ИФА, РИА. (диагностическое значение имеет возрастание количества антител в 4 раза)

1.7.2. Организационная структура проведения лабораторного занятия

№ этапа	Этапы работы	Время в мин	Средства обучение	Оснащение	Место проведения
1	Организационная часть	2			Учебные комнаты
2	Теоретическое опрашивание	16	тесты
3	Главные теоретические вопросы, которые подлежат для изучения на практич. занятии	15	вопрос с метод. разработки
4	Система обучающих заданий-тестов для контроля студентов.	16	тесты
5	Самостоятельная работа студентов	30	Риноцимоскопическое исследование является ориентированным экспресс-методом. С поверхности нижней носовой раковины берут мазки- отпечатки. Препарат фиксируют и окрашивают смесью основой фуксина и метиленового синего. Поставить реакцию гемоаглюцинации между материалом в котором есть аденовирусы и эритроцитами обезьяны (крысы). С помощью гемагглютинации определить серотипы аденовируса. С помощью серологической реакции (РЗК, РНГА) определить нарастание титра.	Мазки-отпечатки со слизистой носа. Красители. Предметные стекла. Микроскопы. Исследуемый материал и эритроциты обезьяны и крысы (3% завись).
6	Оформление протокола	5
7	Подведение итогов	6

^ Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №35

для студентов медицинского факультета