Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №31 для студентов медицинского факультета Тема: Вирус иммунодефицита человека. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики спида

Вид материала

Содержание

Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова
1.Актуальность темы.
Автор: асистент, к.м.н. В.Н.Бойко
Тема: Патогенные кокки. Стафилококки. Стрептококки. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболева
Микроскопическое исследование
Ответ. Графологическая структура микробиологического исследования стрептококковой инфекции. Материал для исследования
Микроскопическое исследование
1.4.3.Источники учебной информации.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.

Подобный материал:

1 2 3 4

Тема: Рота- и коронавирусы. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний

Актуальность темы обусловлена широтой распространения и высокой инфекционностью рота- и коронавирусов.
Цель изучения темы.

1.2.2 Цель общая: уметь использовать биологические особенности рота- и коронавирусов для их идентификации.

1.2.3 Цель конкретная: усвоить главные методы диагностики рота- и коронавирусной инфекции с помощью експрес-метода вирусологического и серологического исследования

1.3 Обеспечение исходного уровня знаний:

1. методы культивирования вирусов.

2. строение вибриона.

3. главные свойства вирусов.

1.3. Тесты исходного уровня знаний. Задача.

Пример:

Защита клеток от вирусов обусловлена образованием:

A) адаптивных ферментов.

B) внутриклеточных включений.

C) продукцией интерферона.

D) продукцией лейкоцидина.

E) продукцией бета-лизинов.

Ответ: C.

1.4 Содержание обучения.

1.4.1 Граф логической структуры содержания.

У заболеваний, обусловленных коронавирусами, нет специфических признаков. Существуют респираторные или кишечные проявления инфекции. Вирусологические исследования не проводят – вирус долго адаптируется к культуре тканей. Главными методами диагностики являются серологические методы. Вирусоспецифические антитела определяют в РН, РЗГА. Ранние случаи заболевания определяют в РЗК, ранние и старые случаи заболевания определяют в РЗГА.

Лабораторная диагностика рота вирусных инфекций включает: вирусологическое и серологическое исследования.

Материалом для вирусологического исследования является кишечное содержимое (первая неделя заболевания), сыворотка.

Кишечное содержимое

Идентификация вируса в РН

Посев на культуру клеток

1.4.2. Перечень практических вопросов

1. Структура и химический состав ротавирусов.

2. Антигенное строение ротавирусов.

3. Культивирование и репродукция вирионов.

4. Патогенез заболевания у человека (особенности протекания у детей).

5. Лабораторная диагностика рота вирусной инфекции.

6. Особенности строения и химического состава коронавирусов.

7. Антигенное строение и культивирование коронавирусов.

8. Патогенез заболевания коронавирусной инфекцией у человека.

9. Лабораторная диагностика коронавирусных инфекций.

10.Особенности эпидемиологии рота- и коронавирусных инфекций.

1.4.3. Литература

Основная:

К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеін Мікробіологія. К. 1982, с. 381-382
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология. М. 1982
В.Д. Тимаков Микробилогия. М. 1983, с. 381, 382
А.И. Коротеев, С.А. Бабич Медицинская микробиология и вирусология. Санкт-Петерб. 2002
И.Л. Дикий, И.Ю. Холуняк, Н.С. Шевелёва, М.Ю. Стегний Микробиология. Харьк. 1999
Микробиология. Руководство к практическим занятиям. Харьк. 2002
О.І. Климнюк, І.О. Ситник, М.С. Творчо, Практична мікробіологія, Терн. 2004, с. 352-354, 358-360.
Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М.1984, с. 230-248.
М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.1973, с. 230-232
Ю.С. Кривошеин, Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М.1986

Дополнительная:

Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред., проф., Г.К. Палій, К. 2004
Гайдаш І.С, Флейготові В.В. Медична вірусологія. Луганськ 2002 с215-217, 309,310

1.5 Ориентировочная основа действия.

1.5.2 Схема лабораторного исследования коронавирусной инфекции

Материалы для исследования: фекалии, мазки-отпечатки слизевой оболочки носа (при респираторной инфекции), сыворотка крови

1. Вирусологическое 2. Серологическое

исследование

РЗК (наростание титра антител в парных сыворотках)

Заражение культуры тканей (сложно адаптировать клетки)

3. Выявление антигена в клетках эпителия слизевой оболочки носа с помощью флуоресцирующих антител (РИФ).

1.6 Система обучающих знаний.

Пример. В какое время года чаще возникает коронавирусная инфекция?

A) зимне-весеннее

D) весной

C) летом

D) весенне-летнее

E) летне-осеннее

Ответ: A.

1.7 Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1 Методика проведения занятия.

Ротавирусы имеют специфическую морфологию: мелкие колесики с толстой втулкой. Различают 4 серотипа ротавирусов. Вирус размножается в эпителии слизистой оболочки кишечника – острый гастроэнтерит (детский понос). Быстрая диагностика проводится определением вирусных антигенов в фекалиях (молекулярная гибридизация). Серологическая диагностика (РН, РЗК, РЗГА) проводится на второй неделе заболевания.

К семье Coronaviridae относятся возбудители острых респираторных и кишечных инфекций у человека, животных и птиц. К этой семье принадлежит и вирус куриного инфекционного бронхита.

Респираторные вирусы передаются воздушно-капельным путем. Возникает воспаление верхних дыхательных путей с профузным ринитом, ритофарингитом.

Главные методы диагностики заключаются в выявлении антигена в эпителиальных клетках (методом флуорисциюющих антител), вирусологического метода и нарастания титра антител в сыворотке (РЗК,РЗГА)

1.7.2 Организационная структура проведения лабораторного занятия

№ Этапа	Название этапа	Время в мин.	Средства обучения	Оборудование	Место проведения
1)	Организационная часть	2			Учебная комната
2)	Теоретический опрос	16	Тесты
3)	Главные теоретические вопросы, что подлежат изучению на практическом занятии	15	Вопрос из методических разработок
4)	Система обучающих заданий – тесты для контроля студентов	16	Тесты
5)	Самостоятельная работа студентов	30	Быстрая диагностика ротавирусной инфекции. Материалом для исследования являются фекалии больного, к которым добавляют 10-20% раствора Хенкса, центрифугируют, сверхосадочная жидкость используется для исследования.	1) кишечное содержание в стерильных пробирках 2) раствор Хенкса 3) центрифуга 4) планшеты для постановки ИФА 5) стерильные пипетки 6) реактивы для ИФА
Провести учет РЗК и РЗГА, которые поставлены с парными сыворотками больных коронавирусной инфекцией.	1) пробирки с учетом РЗК 2) планшеты с учетом РЗГА
6)	Оформление протоколов	5
7)	Подведение итогов	6

^ Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова

Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №37

для студентов медицинского факультета

Тема: Патогенные риккетсии. Биологические свойства. Методы лабораторной діагностики риккетсиозов. Серологическая діагностика эпидемического сыпного тифа и Ку-лихорадки

.

^ 1.Актуальность темы. Риккетсии – обширная группа мелких полиморфных грамотрицательных бактерий, являющихся паразитами членистоногих, различных животних и человека; риккетсиозы заболевания, вызываемые ими.

2.Цель изучения темы.

Цель общая. Ознакомиться с серологическими реакциями в диагностике риккетсиозных инфекций.
Цель конкретная. Знать дифференциальные признаки серологических реакций, которые используют для типирования риккетсий в исследуемом материале.

3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:

1.Иммунитет. Факторы специфической иммунной защиты.

2.Полноценные и неполноценные антигены.

3.Принципы взаимодействия антигенов и антител.

4.Иммунодианостические реакции.

3.1. Задачи на исходный уровень знаний-умений:

От больного с острой кишечной инфекцией выделен вирус, который отнесен к роду энтеровирусов. Для определения серотипа вируса применяют диагностические сыворотки. Какие антитела должны содержать эти сыворотки?

А. К белкам суперкапсидной оболочки.

В. К белкам капсида *

С. К неструктурным белкам вируса.

Д. К вирусным ферментам

Е. К вирусным гемаглютининам

3.2.Знать систематическое положение риккетсий среди представителей микромира.

3.3.Знать принципы микроскопии, что позволяет выучить морфологию риккетсий.

3.4.Знать отличия в ультраструктуре риккетсий, вирусов и бактерий.

4.Содержание обучения.

4.1.Графлогической структуры содержания.

Выявление антител – РНГА, ИФА, РИА, РА Вейгля --- выявление генетического материала риккетсий– ПЛР.

4.2.Перечень теоретических вопросов:

Источники учебной информации.

К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, К., 1980.- С.406

А.А.Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., 2004.- С. 261.

А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, имунология и вирусология. С.Петербург, 2002.- С.239

Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология.М., 2001 С.68.

И.Л.Дикий и соавт. Микробиология, Харьков,2004.- С.93

Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиямм по микробиологии, М. 1986.- С.126.

Литература дополнительная:

Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь / За ред. Г.К.Палий, В.Г.Палий. Киев: Здоровье, 2004. С.83,88.

Сборник задач для подготовки к тестовому экзамену по естественно научным дисциплинам „Крок -1. Общая врачебная подготовка” /Кол. авторов; За ред. В.Ф.Москаленка и пел.- К.: Медицина,2004.

5.Ориентировочная основа действия.

Выявление антител – РНГА, ИФА, РИА, РА Вейгля.

Выявление генетического материала риккетсий – ПЦР.

6.Система целевых обучающих задач.

В лабораторию доставлена кровь больного сыпным тифом. Какую из перечислених серологических реакций следует применить?

А. РеакциюАсколи

В. Преципитации

С. Агглютинации Вейгля●

Д. Связывания комплемента

Е. Реакцию Васермана

7.Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

7.1.Методика проведения занятия:

- Усвоить макроскопическую реакцию агглютинации Вейгля. Во время проведения реакции используют корпускулярный риккетсиозный антиген (500 млн клеток/мл). Сыворотку больного разводят от 1:40 до 1:1280 в объеме 0,25 мл и в каждую пробирку добавляют по 0,25 мл антигена. При этом необходимо учесть, что после внесения антигена разведения сыворотки удваивается. Учет результатов проводим, через 2 часа после того, как пробирки проинкубировали в термостате. Диагностический титр равняется 1:40 – 1:80 и больше почти в 100% больных сыпным тифом уже на 4-5 день болезни.

- Ознакомиться с принципом постановки ИФА с целью выявления специфических антигенов в сыворотке кровь и больного. На занятии в качестве твердофазного носителя используют планшетки с адсорбируемыми на дне ячеек антителами. В лунки вносят по 1 капле исследуемой сыворотки и вмещают в термостат при темп. С37. Промывают луночки буферным раствором и вносят меченые ферментом (пероксидазою хрена) антитела против этого антигена (прямой вариант). Планшетки вмещают в термостат при темп. 37С. Промывают луночки буферным раствором, вносят по одной капле перекиси водорода и ортофенилдиамина (ОФД). Планшетки вмещают термостат к появлению желтой расцветки в контроле. Количество присоединенного к фазе энзима отвечает количеству антигенов. При наличии в исследуемой сыворотке антигенов вируса в лунках изменяется цвет жидкости на желтый или желтовато – коричневый (результат положительный). В лунках с сывороткой, которая не содержит антигенов вирусов, цвет жидкости не изменяется (результат отрицательный).

Зарисовать схему реакции.

- Познакомиться с принципом постановки реакции гибридизации нуклеиновых кислот. Целью метода является выявление в исследуемом материале участков ДНК, характерных для данного возбудителя. Для этого используют их гибридизацию с диагностическими ДНК – зондами. ДНК – зонды – это однониточные фрагменты ДНК (комплементарные к специфическим участкам ДНК возбудителя), меченые радионуклидами, ферментами или флюорохромами.

Схемы реакции зарисовать.

- Провести учет результатов реакции связывания комплемента, результаты зарисовать.

Разведение сыворотки
1:5	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160

- Провести учет результатов реакции пассивной гемагглютинации, результаты зарисовать.

Разведение сыворотки:
1:5	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160

Начало заболевания:

Через 10 дней:

7.2.Организационная структура проведения лабораторного занятия:

№ этап.	Этапы работи	Час мин	Средства обучения	Оборудов.	Место пров.
1. 2. 3. 4. 5. 6.	Организационная часть Проверка первичного уровня знаний Инструктаж преподавателя Самостоятельная работа студентов Написание контролирующих тестов Подведение итогов Домашнее задание	5 15 10 40 15 5	Тестов. задачи Таблицы Планш. ИФА, РИФ Тесты задачи	Штативы	Учеб. комн.

^ Автор: асистент, к.м.н. В.Н.Бойко

Методическая разработка

по подготовке к лабораторному занятию №38

для студентов медицинского факультета

^ Тема: Патогенные кокки. Стафилококки. Стрептококки. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.

1.1.Актуальность темы. Гнойно-воспалительные заболевания относятся к наиболее распространенным. Ежегодно ими болеют десятки миллионов людей. Больше всего гнойных процессов предопределяют патогенные кокки.

1.2. Цель изучения темы.

Общая. Выучить основные свойства патогенных кокков и основы патогенеза гнойно-воспалительных заболеваний, обусловленных патогенными кокками, методы микробиологической диагностики стафилококковых и стрептококковых инфекций.

Конкретная.

1. Выучить факторы патогенности стафилококков.

2. Овладеть методами лабораторной диагностики стафилококковых инфекций.

3. Овладеть методами лабораторной диагностики стрептококковых инфекций.

1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.

1. Ультраструктура бактериальной клетки.

2. Морфология шаровидных бактерий.

3. Строение клеточной стенки грамположительных бактерий.

1.3.1.Тести на исходный уровень знаний - умений.

Классификация кокков по морфологии основана на:

А. Размерах кокков.

В. Количеству и расположению жгутиков.

С. Спорообразованию.

Д. Делению в разных плоскостях.

Е. Отношению к окрашиванию по Граму.

Ответ: Д.

1.4. Содержание обучения.

1.4.1.Графологическая структура содержания.

Графологическая структура микробиологического исследования стафилококковой инфекции.

Материал для исследования: гной, экссудат, мокрота, слизистые выделения из зева, носа и др.

^ Микроскопическое исследование

- мазок, окрашенный по Граму

Ответ.

Бактериологическое исследование

- посев на ЖСА, кровяной агар,

- характер роста,

- наличие гемолиза,

- лецитиназная активность на ЖСА,

- посев на скошенный агар,

- посев на развернутый ряд Гисса,

- фаготипирование,

- определение плазмокоагулазы,

- определение чувствительности к антибиотикам.

^ Ответ.

Графологическая структура микробиологического исследования стрептококковой инфекции.

Материал для исследования: гной, экссудат, мокрота, слизистые выделения из зева, носа и др.

^ Микроскопическое исследование:

- мазок, окрашенный по Граму.

Ответ.

Бактериологическое исследование:

- посев на кровяной или сахарный агар,

- характер роста колоний,

- наличие гемолиза,

- мазок, окрашенный по Граму,

- посев на кровяной или сахарный агар,

- определение серогруппы,

- определение чувствительности к антибиотикам.

Серологическое исследование

- определение О-стрептолизина в сыворотке крови

Ответ.

1.4.2.Перечень теоретических вопросов.

1. Морфология, классификация, антигенное строение стафилококков.

2. Культуральные, биохимические свойства, токсинообразование стафилококков.

3. Экология, резистентность стафилококков.

4. Морфология, классификация, антигенное строение стрептококков.

5. Культуральные, биохимические свойства, токсинобразование стрептококков.

6. Факторы и ферменты патогенности стафилококков и стрептококков.

7. Значение стафилококков в возникновении инфекций и внутрибольничных заболеваний. Стафилококковое носительство.

8. Роль стрептококков в возникновении гнойно-воспалительных процессов, скарлатине и ревматизме.

9. Стрептококки пневмонии, основные свойства. Особенности микробиологической диагностики заболевания.

10. Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.

11. Методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций.

12. Специфическая профилактика и лечение заболеваний, вызванных пиогенными кокками.

^ 1.4.3.Источники учебной информации.

Основные:

К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - К., 1992 (укр..) - с. 243 - 255.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - Г. 1980 (рус.). - с. 227-244.
В.Д. Тимаков, В.С. Левашов. - Микробиология. - Г. 1983 (рус.). - с.253 - 266.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев - Медицинская микробиология и вирусология. - Санкт-Петербург, 2002 (рус.). - с. 330-341.
И. Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Микробиология. - Харьков, 1999 (рус.). - с. 214-220.
В.И. Покровский. - Медицинская микробиология._М., 1998 (рус.). - с. 183-206.
О.И.Климнюк, И.О. Ситник. - Практическая микробиология. - Терн. 2004 (укр..). - с. 172-183.
Л.П. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - М. 1984 (рус.). - с. 131-141, 152-153.
М.Н Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - М. 1973 (рус.). с. 158-176.
Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - К. 1986 (рус.). - с. 86-92.

Дополнительные:

Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Заг. ред. проф.. Г.К. Палий, К. 2004. с. 7-146.

1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).

1. Изготовление и окрашивание препаратов стафилококка.

2. Микроскопия готовых препаратов стрептококков.

3. Изучение культуральных свойств стафилококков и стрептококков.

4. Изучение метода фаготипирования стафилококков.

5. Определение чувствительности стафилококков и стрептококков к антибиотикам.

6. Оформление протокола.

1.6.Система обучающих заданий.

1) Определить признаки патогенности стафилококков:

1) наличие гемолиза; 2) выделение энтеротоксина; 3) выделение лейкоцидина 4) выделение фибринолизина 5) выделение некротоксина; 6) выделение амилазы; 7) выделение липазы.

Ответ:1, 2, 3, 4, 5.

2) В хирургическом отделении возникло подозрение на наличие внутрибольничной стафилококковой инфекции, источником которой является медицинский персонал. На какую среду следует высеять материал с носоглотки работников отделения для выявления носительства патогенных стафилококков?

А. Среда Ресселя.

В. Жосчно-солевой агар.

С. Мясо-пептонный бульон.

Д. Кровяной агар.

Е. Среда Эндо.

Ответ:В.

1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1. Методика проведения занятия.

1. Изготовить, окрасить по Граму и посмотреть под микроскопом препараты культуры стафилококка.

2. Посмотреть под микроскопом и зарисовать готовые препараты культур стрептококков.

3. Провести микроскопическое исследование гнойного выделения.

4. Выучить рост стафилококков и стрептококков на питательных средах (кровяной агар, глюкозный МПБ) и выявить наличие пигмента у стафилококков на молочно-солевом агаре.

5. Провести фаготипирование стафилококков в демонстрационном опыте.

6. Определить чувствительность стрептококков и стафилококков к антибиотикам методом стандартных дисков.

7. Внести в протокол схему бактериологической диагностики стафилококковых и стрепто-кокковых инфекций.

^ Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.

Методическая разработка

для работы на лабораторном занятии №39

для студентов медицинского факультета

Blog

Содержание