Geum.ru

Методическая разработка по подготовке лабораторного занятия №41 для студентов медицинского факультета Тема: Патогенные энтеробактерии.

Вид материалаМетодическая разработка

Содержание


Автор: доцент, к.б.н. Е.Ф.Макац
Тема: Патогенные ентеробактерии. Сальмонеллы - возбудители острых гастроэнтеритов. Морфология и биологические свойства. Микробио
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1.4.3.Источники учебной информации.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.
Тема: Условно-патогенные энтеробактерии - клебсиеллы, протеи. Псевдомонады. Морфология и биологические свойства. Микробиологичес
Цели изучения темы.
Цель конкретная.
3.2. Тесты исходного уровня знаний-умений.
4.Содержание обучения.
Условно-патогенные энтеробактерии- Протеи.
О- колонии
Синегнойная палочка
4.3. Источники учебной информации.
Организационная структура проведения лабораторного занятия.
Учебная лаборатория
Автор: ассистент Жорняк Е. И.
Тема: Патогенные вибрионы. Морфология и биологические свойства холерного вибриона. Микробиологическая диагностика холеры.
1.Таксономия патогенных для человека вибрионов
Культуральные свойства
...
Полное содержание
Подобный материал:
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12

Методическая разработка

по подготовке лабораторного занятия №41

для студентов медицинского факультета


Тема: Патогенные энтеробактерии. Сальмонеллы. Возбудители брюшного тифа, паратифа А и В. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.


1.1. Актуальность темы. Инфекционные заболевания обусловленые возбудителями тифо-парати-фозной группы, достаточно распространенны среди людей. Наиболее опасный среди них брюшной тиф. Развитие заболевания и микробиологическая диагностика тесно связаны с особенностями патогенеза. Студенты должны хорошо овладеть последовательностью течения болезни, чтобы на разных этапах верно подобрать методы диагностики брюшного тифа.

1.2.Цель изучение темы.

Общая: Усвоить микробиологическую диагностику тифо-паратифозных болезней в зависимости от стадии заболевания.

Конкретная: Уметь выбрать адекватные методы диагностики брюшного тифа на 1,2,3, и 4 неделе заболевания. Идентифицировать сальмонеллы по биохимическим и антигенным свойствам. Верно интерпретировать результаты реакции Видаля.

1.3.Обеспечение исходного уровня знаний-умений.

1.3.1. Тести на исходный уровень знаний-умений.

Определите, какой токсин образует возбудитель брюшного тифа.

А. Екзотоксин

В. Ендотоксин

С. Ентеротоксин

D. Нейротоксин

Е. Некротоксин

Ответ:В

1.4. Содержание обучения.

1.4.1.Графологические структуры содержания.

1) Графологическая структура выделения чистой гемокультуры при брюшном тифе и паратифах.

1. Материал для исследования: кровь

2. Посев на среду Рапоппорта. Мазок по Граму.

3. Посев на дифференциальную среду. Пересев на Расселя.

4. РА с поливалентными и монорецепторными сальмонельозными сыворотками

5. Пересев на "пестрый ряд". Фаготипирование.

Ответ.

2) Графологическая структура постановки реакции Видаля.

1. Материал для исследования: сыворотка больного.

2. Разведение сыворотки физраствором в соотношении от 1:100 до 1:1600 в четырех рядах пробирок.

3. Внесение в первый ряд пробирок О-диагностикума возбудителя брюшного тифа.

4. Во второй ряд - Н-диагностикума возбудителя брюшного тифа.

5. В третий ряд - О-диагностикума сальмонеллы паратифа А.

6. В четвертый - О-диагностикума сальмонеллы паратифа В.

7. Сопровождение реакции контролями сыворотки и диагностикумов.

8. Термостатирование - 2 часа.

9. Выдержка при комнатной температуре.

10. Учет. Ответ.

1.4.2. Перечень теоретических вопросов.

1.Морфологические, культуральные и биохимические свойства сальмонелл брюшного тифа, паратифа А та В.

2.Антигенная структура тифо-паратифозных сальмонелл.

3.Принцип классификации сальмонелл по Кауфману-Уайту.

4.Этиопатогенез брюшного тифа и паратифа.

5.Методы микробиологической диагностики в зависимости от периода заболевания.

6.Ранняя диагностика брюшного тифа методом гемокультуры.

7.Обоснование серодиагностики при брюшном тифе. Накопление О-, Н-, Vі-антител в разные периоды заболевания, их значение для серодиагностики.

8.Реакция Видаля, техника ее постановки.

1.4.3.Источники учебной информации:

Основные

1.К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология К. 1982 (укр) 201-208

2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология М. 1980 (русс) 259-267

3. В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (русс) 279-285

4.А.И. Коротяєв С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология Санкт-Петерб. 2002 (русс) 377-381

5. И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С. Шевелева, М.Ю.Стегний, Микробиология Харк. 1999 (русс) 227-230

6. Микробиология . Руководство к лабораторным занятиям. Харк 2002

7. О.И. Климнюк,И.О, Ситник, М.С. Творчко, В.П. Широбоков, Практическая микробиология, Терн, 2004 199-206

8. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии Г. 1984 (русс) 181-188

9. М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1973 (русс) 182-194

10. Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1986 (русс) 99-104

Дополнительные

1.Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Заг.

ред, проф., Г.К. Палий, К, 2004 7-146

1.5. Ориентировочная основа действия.

1.Приготовление мазка с культур возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В.

2.Изучение культуральных свойств возбудителей тифо-паратифозных групп на дифференциально-диагностических средах.

3. Изучение биохимических свойств в тест-системе СИБ.

4.Учет серологической реакции агглютинации Видаля.

5.Оформлення протокола.

1.6.Система учебных заданий.

Назовите среду накопления для выделения возбудителей тифо-паратифозной инфекции.

А. МПБ.

В. Сахарный МПБ.

С. Среда Китт-Тароцци.

D. Среда Рапопорта.

Е. Среда Эндо.

Ответ:D

1.7. Краткие методические указания по работе студентов на лабораторном занятии.

1.7.1. Методика проведения занятия.

1.Приготовить мазки культур возбудителей брюшного тифа, паратифа А та В, окрасить их по Граму, зарисовать.

2.Изучить культуральные свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов на диф-диагности-ческих средах Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агаре и описать характер роста.

3.Изучить ферментативные свойства возбудителей тифо-паратифозной группы в тест-системе СИБ.

4.Провеси учет развернутой реакции агглютинации Видаля с целью серодиагностики брюшного тифа.

5.Ознакомиться с биологическими препаратами, которые используют для диагностики и профилактики брюшного тифа и паратифа.

1.7.2.Организационная структура проведения лабораторного занятия


N этапа
Этапы работы
Время (мин)
Средства обучения
Оборудование
Место

1.


2.


3.


4.


5.


6.
Организационные вопросы

Проверка начального уровня знаний студентов Обсуждение вопросов, подлежащих изучению.

Выполнение практической работыю. Решения тестов и ситуационных задач Короткие итоги работы каждого студента, Оформление протокола
3


16


20


28


16


7


Решение тестов Устный разбор материала. Изготовление и окрашивание мазков, микроскопия. Учет демонстрационных опытов. Решение тестов



Тесты. Вопросы, приведенные в методической разработке. Культура бактерий, набор для окрашивания, стекла, чашки с посевами бактерий. СИБ, штативы с РА Видаля. Тесты. Таблицы
Учебная комната


Автор: доцент, к.б.н. Е.Ф.Макац


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №42

для студентов медицинского факультета


Тема: Патогенные ентеробактерии. Сальмонеллы - возбудители острых гастроэнтеритов. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.


1.1.Актуальность темы. Заболеваемость на сальмонеллезные острые гастроэнтериты ежегодно увеличивается во всех странах. Проблема борьбы с сальмонеллезами является актуальной проблемой медицинской науки и практики. Под действием различных факторов, главным образом социально-экономических и биологических, происходят постоянные изменения территориального распространения, сезонности, возрастной структуры больных острым гастроэнтеритом. Поэтому врачу необходимо знать этиологические, эпидемиологические, клинические и микробиологические особенности этих заболеваний.

1.2. Цель изучения темы.

Общая. Овладеть микробиологической диагностикой сальмонеллезной токсикоинфекции.

Конкретная. Выучить морфологию, культуральные, биохимические свойства возбудителей пищевых инфекций. Знать способы неспецифической профилактики пищевых гастроэнтеритов. Уметь провести бактериологическое исследование пищевых продуктов на наличие сальмонелл.

1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.

Представители рода сальмонелл за Кауфманом-Уайтом классифицируются на

А 25 групп.

В. 35 групп.

С. 45 групп.

Д. 55 групп.

Е. 65 групп .

Ответ: Е

Микробиологическая лаборатория инфекционной больницы выделяет чистые культуры возбудителей и осуществляет их серологическую идентификацию. Какие диагностические препараты для этого необходимы?

А . Диагностические сыворотки.

В. Антигены-диагностикумы.

С. Дифференциально-диагностические среды.

Д. Эритроцитарные диагностикумы.

Е. Латексные диагностикумы.

Ответ: А

1.4. Содержание обучения.

1.4.1.Графологічні структуры содержания.

Графологические структуры микробиологического исследования острых гастроэнтеритов.

Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды, испражнения, моча, остатки пищи.

- посев на среду Эндо, Плоскирева, конденсационную воду скошенного МПА.

- изучение культуральных особенностей на питательних средах

- мазок, окрашивание по Граммом

- пересев на скошенный МПА (чистая культура)

- реакция агглютинации на стекле со специфическими сыворотками

- пересев на пестрый ряд Гисса.

Ответ.

1.4.2.Перечень теоретических вопросов.

1. Морфология, биохимические свойства и антигенное строение сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций.

2. Классификация сальмонелл - возбудителей острых гастроэнтеритов.

3. Этиопатогенез острых сальмонеллезных гастроэнтеритов.

4. Бактериологическая дифференциация пищевых токсикоинфекций, которые вызываются сальмонеллами, ешерихиями, стафилококками, протеями.

5. Профилактика острых гастроэнтеритов.


1.4.3.Источники учебной информации.

Основные:

1. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - К., 1992 (укр..) - с. 208-210.

2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - Г. 1980 (рус.). - с. 267-270.

3. В.Д. Тимаков, В.С. Левашов. - Микробиология. - Г. 1983 (рус.). - с.284-286.

4. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев - Медицинская микробиология и вирусология. - Санкт-Петербург, 2002 (рус.). - с. 381-388.

5. И. Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Микробиология. - Харьков, 1999 (рус.). - с. 230-232.

6. В.И. Покровский. - Медицинская микробиология._М., 1998 (рус.). - с. 183-206.

7. О.И.Климнюк, И.О. Ситник. - Практическая микробиология. - Терн. 2004 (укр..). - с. 206-209.

8. Л.П. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - М. 1984 (рус.). - с. 181-188.

9. М.Н Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - М. 1973 (рус.). с. 208-211.

10. Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - К. 1986 (рус.). - с. 104-106.

Дополнительные:

Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Заг. ред. проф.. Г.К. Палий, К. 2004. с. 7-146.

1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).

1. Изготовление и окрашивание препаратов сальмонелл - возбудителей острых гастроэнтеритов.

2. Изучение культуральных свойств сальмонелл на дифференциально-диагностических средах.

3. Изучение биохимических свойств на сахаролитических средах.

4. Проведение бактериологического исследования пищевого продукта.

5. Оформление протокола.

1.6.Система обучающих заданий.

1) Назовите токсин, который производят сальмонелы - возбудители пищевой токсикоинфекции.

А. Нейротоксин.

В. Эндотоксин.

С. Экзотоксин.

Д. Некротоксин.

Е. Гемолизин.

Ответ:В

1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1. Методика проведения занятия.

1. Изготовить, окрасить по Граму и просмотреть препараты с культуры сальмонелл - возбудителей острых гастроэнтеритов.

2. Изучить культуральные и биохимические свойства сальмонелл - возбудителей острых гастроэнтеритов на средах Эндо, Плоскирева, Левина, СИБ.

3. Провести бактериологическое исследование пищевого продукта: высеять его на среду Эндо- и в конденсационную воду на МПА.

1.7.2. Организационная структура проведения лабораторного занятия.


№ этапа
Этап работы
Время (мин)
Способы обучения
Оборудование

Место

1
Организационная часть
3






Учебная комната

2
Теоретический опрос (начальный уровень знаний)
16
тесты



3
Основные теоретические вопросы, которые подлежать изучению на практическом занятии.
18
вопросы



4
Самостоятельная работа студентов.
26
Изготовление, окраска и микроскопирование препаратов демонстрационные исследования. Проведение бактериологического исследования пищевых продуктов.
Культура бактерий на МПА, дифференциально-диагностические среды с посевами бактерий. СИБ. Пищевой продукт, стерильный физраствор, пинцет, стерильная ступка. Чашка з МПА. Таблицы, схемы.

5
Система обучающих

заданий – тесты для

контроля студентов
16
тесты






6
Оформление протокола
5









7
Подведение итогов, оценка деятельности каждого студента
6







Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.


Методическая разроботка

по подготовке и роботе на лабораторном занятии №43

для студентов медицинского факультета


Тема: Условно-патогенные энтеробактерии - клебсиеллы, протеи. Псевдомонады. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.


Актуальность темы. Актуальность темы связана с тем, что энтеробактерии и псевдомонады вызывают заболевания, как правило, в условиях снижения защитных механизмов макроорганизма. Возбудители могут попадать из внешней среды разными путями, но чаще вызывают аутоинфекции, для которых характерно хроническое течение в виде разнообразных клинических форм, в том числе и госпитальных инфекций, лечение которых осложняется всвязи с их антибиотикорезистентностью.
  1. Цели изучения темы.
    1. Цель общая. Познакомиться с характеристикой возбудителей, патогенезом, принципами лабораторной диагностики заболеваний, вызваных клебсиеллами, протеями, псевдомонадами.
    2. Цель конкретная. Усвоить дифференциальные признаки псевдомонад, клебсиелл, протеев. Познакомиться с методами диагностики соответствующих заболеваний, знать роль данных микроорганизмов в возникновении госпитальных инфекций.
  2. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.

3.1. Лекции „Специфическая профилактика и терапия инфекционных заболеваний”, „Современные методы диагностики инфекционных заболеваний”.

3.2. Тесты исходного уровня знаний-умений.

Пример теста.

Для диагностики заболевания, вызванного бактериальной инфекцией, необходимо использовать все методы кроме:

А. Аллергического

В. Вирусологического

C. Бактериологического

D. Бактериоскопического

E. Биологического

Правильный ответ: В – вирусологического


4.Содержание обучения.

    1. Графологические структуры содержания.


Условно-патогенные энтеробактерии- Клебсиеллы.

Семейство
Enterobacteriaceae-Род Klebsiella

Klebsiella pneumoniae

Klebsiella ozaenae

Klebsiella rhinoscleromatis

Морфология
форма
Гр- элипсовидные палички

расположение
Одиночно, попарно или короткими цепочками

спора
Нет

подвижность
Неподвижна

капсула
Есть

Методы культивирования
Факультативный анаэроб 36º С рН - 7,0- 7,4

Питательные среды- МПА, МПБ



Резистентность
Чувствительны к действию дезинфектантов.

Стойкие к низким и высоким температурам (25º С –недели, месяцы)

Ферментативная активность
Сахаролитические свойства снижаются от Klebsiella pneumoniae,

Klebsiella ozaenae до Klebsiella rhinoscleromatis .

Протеолитические свойства: индол, Н² S не продуцируют.

Антигены
О- АГ : 5 серогрупп

К- АГ : 72 серовара

Культуральные свойства
МПБ- диффузное помутнение

МПА-образование S- формы колоний, крупные, слизистые, випуклые.

Среды Эндо, Левина, Плоскирева – колонии Klebsiella pneumoniae

И Klebsiella ozaenae окрашиваются в цвет индикатора.

Расположение клебсиелл в юных колониях :

Klebsiella pneumoniae- петлеподобно

Klebsiella ozaenae- спиралевидно

Klebsiella rhinoscleromatis- концетрично


Методы лабораторной диагностики
Микроскопический (определение капсулы методом Бурри - Гинса, Романовського - Гимза)

Бактериологический

Серологический ( РЗК )

Биологический

Аллергический ( аллерген - склерозан)

Специфическая профилактика
Не разработана

Специфическая терапия
Аутовакцины при хронических формах


Условно-патогенные энтеробактерии- Протеи.


Семейство
Enterobacteriaceae- Род Proteus.

Proteus vulgaris

Proteus mirabilis

Proteus rettgeri

Proteus inconstans

Морфология
форма
Гр- полиморфные палочки

расположение
Попарно или цепочками

спора
Нет

подвижность
+ перитрих

капсула
Нет

Методы культивирования
Факультативный анаэроб

25-37º С рН - 7,2- 7,4

Питательные среды- МПА, МПБ



Резистентность

Стойкие к физическим факторам и противомикробным препаратам.

Ферментативная активность
Оксидаза –

Каталаза+

Ферментативная активность снижается от Proteus vulgaris

до Proteus inconstans.

Антигены
О- АГ : 49 сероваров

Н- АГ : 19 сероваров

Культуральные свойства
МПБ- диффузное помутнение с осадком.

МПА- О- колонии (отдельные S- формы с ровными краями),

Н- колонии ( вид “ роения ” с дочерними отростками)

Методы лабораторной диагностики
Бактериологический ( посев по методу Шукевича в конденсационную воду скошеного агара, среда Эндо, МПА ).

Факторы вирулентности
Эндотоксин Фимбрии Жгутики

Протеаза Уреаза Гемолизин


Синегнойная палочка


Семейство
Pseudomonadaceae- Род Pseudomonas

Pseudomonas aeruginosa

Морфология
форма
Гр- палочки

расположение
Поодинчно или короткими цепочками

спора
Нет

подвижность
+ монотрих, амфитрих

капсула
Нет

Методы культивирования
Облигатный аэроб.

4-42º С

Питательные среды- МПА, МПБ

Резистентность

Стойкие к физическим факторам и противомикробным препаратам.

Ферментативная активность
Сахаролитические свойства: ферментация глюкозы до кислоты.

Протеолитические свойства: индол, сероводород продуцирует слабо.

Антигены
О- АГ : 20 серогрупп

Н- АГ : 15 серотипов

Культуральные свойства
МПБ- диффузное помутнение с осадком.

МПА- колонии S- формы, плоские, слизистые.

Виделяют пигмент при рН< 7красного цвета, при рН> 7 – сине- зеленого цвета. Виделяют специфический запах.

Методы лабораторной диагностики
Бактериологический

Факторы вирулентности
Экзотоксин А

Цитотоксин

Екоензим S

Гемолизин

Нейраминидаза

Энтеротоксин

Эндотоксин

Протеаза || ( еластаза )

Протеаза ||| (щелочная протеаза )



    1. Список теоретических вопросов.

1.Источники и пути распространения госпитальной инфекции.

2. Условия и факторы, благоприятствующие проявлению вирулентности условно-патогенных бактерий и возникновению госпитальных инфекций.

3 .Морфология, культуральные и биохимические свойства клебсиелл.

4. Факторы патогенности клебсиелл.

5. Микробиологическая диагностика склеромы.

6. Морфология, культуральные и биохимическик свойства протей и псевдомонад.

7. Методы лабораторной диагностики инфекций, вызваных протеями и синегнойной палочкой.

8.Профилактика госпитальных инфекций.


4.3. Источники учебной информации.

К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, К., 1992. – С. 216 -221, 309-314

К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. – С. 250-255, 274 -279.

В.Д.Тимаков. Микробиология, М., 1983. – С. 288-291, 303-304.

А.І. Коротяєв, Г. А. Бабічев Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, 2002.

С 348- 354.

Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1986. – С. 135-138, 142-143.

М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973. – С. 208-211, 266-267.

Література додаткова.

Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Словник/ За ред Г.К.Палія, В.І.Палія. – Київ: Здоров'я, 2004.

Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену з природничо-наукових дисциплін «Крок-1. Загальна лікарська підготовка» /Кол.авторів; За ред. В.Ф.Москаленка та співавт. – К.:Медицина, 2004.
  1. Ориентировочная основа действия.

Графологические структуры лабораторного исследования клебсиеллезов .

Материал для исследования: мокрота, слизь носовой полости, гранулематозная ткань, сыворотка крови .

Бактериоскопическое исследование
  • Мазок, окрашеный по Граму, по Бурри- Гинсу, по Романовскому- Гимза. Бактериологическое исследование
  • – посев на МПА;
  • - агар-микроскопия “юных” колоний;
  • - мазок, окрашеный по Бурри- Гинсу, по Граму;
  • - пересев на скошенный агар;
  • - характеристика колоний;
  • - посев на углеводный ряд Гисса, на желточный МПА;
  • - РА на стекле с антикапсульными сыворотками;
  • - развернутая РА с прокипяченой культурой и диагностическими О-сыворотками;

Серологическое исследование
  • РСК с сыворотками больных и капсульным антигеном;
  • РА с сыворотками больных и бескапсульными клебсиеллами;
  • РПГА с сыворотками больных и эритроцитарным диагностикумом.


Граф логические структуры лабораторного исследования протейных и псевдомонадных заболеваний .

Материал для исследования: гной, эксудат, кровь, рвотные массы, испрожнения, вода, пищевые продукты ( при протейных пищевых токсикоинфекциях ).

Бактериологическое исследование

Посев на МПА, МПБ, среду Плоскирева, свежескошенный агар по Шукевичу.
  • Характеристика колоний;
  • Мазок, окрашеный по Граму;
  • Препарат “раздавленная капля” ;
  • Пересев на скошенный агар;
  • Посев на углеводный ряд Гисса, на желатин, на МПБ с мочевиной ( пробы на индол, сероводород, уреазу, каталазу ).
  1. Система целевых обучающих заданий.

Примеры тестов.

Род Klebsiella принадлежит к семейству:

А. Enterobacteriacea

B. Bacillaceae

C. Pasteurellaceae

D. Vibrionaceae

E. Pseudomonadaceae

Правильный ответ: А- Enterobacteriacea

  1. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
    1. Методика проведения занятия.
  1. Студенты готовят мазки из культур клебсиелл, окрашивают по Бурри- Гинсу и микроскопируют, отмечают наличие капсулы.
  2. Визуально под стереомикроскопом изучают культуральные свойства клебсиелл.

3. Проводят агар- микроскопию юных колоний клебсиелл с целью ускоренной идентификации.

4. Учитывают результаты реакции агглютинации с парными сыворотками больного склеромой для определения наростания титра антител.

5. С целью постановки диагноза токсикоинфекции протейной этиологии студенты учитывают результаты посева пищевых продуктов на скошеном агаре по Шукевичу. Обращают внимание на “ползучий” рост протея. Готовят мазки, окрашивают по методу Грама для изучения морфологии, тинкториальных свойств протея.

6. Учитывают чувствительность псевдомонад и протея к антибиотикам в демонстрационном опыте.


  1. Организационная структура проведения лабораторного занятия.

№ етапа
Этап работы
Время (мин)
Средства обучения
Оборудование
Место прове-дения

1.
Органзационная часть
2






Учебная лаборатория

2.
Проверка исходного уровня знаний
15
Тестовые задания



.
Инструктаж преподавателя.

1)Объясняет по демонстрационным таблицам метод идентификации клебсиелл по агар-микроскопии юных колоний

.2) Объясняет методику окрашивания по Бурри- Гинсу мазков из культур клебсиелл.

3) Объясняет задания для проведения учета результатов РА с парными сыворотками больного склеромой для виявления наростания титра АТ.

4) Объясняет методику учета чувствительности псевдомонад и протея к антибиотикам в демонстрационом опыте.

10
Таблицы: Схема строения клебсиелл, протей, синегнойной палочки. Схемы лабораторной диагностики заболеваний, вызванных ими.

Таблица “ Капсульные бактерии”

Таблица ” Жгутики бактерий“
Готовые посевы протея, клебсиелл, синегнойной палочки на МПА.


Штативы с пробирками для учета результатов РА та РСК.


Чашки с посевами культур для учета чувствительности к антибиотикам методом стандартных дисков.

4.

Самостоятельная работа студентов.
40



Предметные стекла, набор красое для окраски по методу Грама и Бурри- Гинса.

5.
Написание контрольных тестов.
10
Тестовые задания



6.
Подведение результатов, оценка деятельности каждого студента
5-10







7.
Задание для самостоятельной работы при изучении следующей темы.
3







Автор: ассистент Жорняк Е. И.


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №44

для студентов медицинского факультета


Тема: Патогенные вибрионы. Морфология и биологические свойства холерного вибриона. Микробиологическая диагностика холеры.
    1. Актуальность темы.

Седьмая пандемия холеры, начавшись в 1961 г., длится по сегодняшний день. Знание биологических характеристик возбудителя необходимо для подтверждения клинического диагноза «холера» и дифференциации холеры от холероподобных энтеритов, которые не являются особенно-опасными инфекциями с быстрым эпидемиологическим распространением. Учитывая быстрое распространение инфекции и тяжелое течение заболевания будущим врачам любой специализации необходимо знать основные противоэпидемические профилактические и лечебные мероприятия, которые выполняются в очаге холеры.
    1. Цель изучения темы.
      1. Цель общая: ознакомиться с особенностями возбудителя холеры, имеющие значение в лабораторной диагностике и профилактике заболевания.
      2. Цель конкретная:
  1. Знать ключевые признаки рода Vibrio, дифференциальные культуральные и биохимические свойства патогенных для человека вибрионов.
  2. Знать, как правильно забрать материал от больного и провести предварительную лабораторную диагностику холеры.
  3. Усвоить этапы микробиологической диагностики холеры и холероподобных энтеритов.
  4. Знать основные противоэпидемические и профилактические мероприятия по предупреждению распространения заболевания в очаге.
    1. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
  1. Морфологические особенности вибрионов, методы микроскопического исследования.
  2. Методы изучения монотрихиальной подвижности бактерий.
  3. Методы определения соматических антигенов бактерий.
  4. Этапы бактериологического метода диагностики.
  5. Сравнительная характеристика экзотоксинов и эндотоксинов бактерий.
    1. Содержание обучения.
      1. Граф логической структуры содержания:

1.Таксономия патогенных для человека вибрионов

Семейство Vibrionaceae

Род Vibrio

Виды: V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.vulnificus

  1. Общая характеристика вибрионов, патогенных для человека


Морфология:

Грамм-отрицательные, слегка изогнутые палочки в виде запятой

0,5 - 1,5-3 мкм, спор и капсул не образуют, подвижные (монотрихи)
Культуральные свойства:

Факультативные анаэробы или аэробы;

Адаптированные к щелочной среде (оптимальное рн 7,6-8,2);

Оптимальная температура 18-370С;

Не требовательны к питательным средам и условиям культивирования;

Для быстрого роста культивируют на специальных или селективных средах;

Некоторые виды адаптированы к повышенным концентрациям NaCl (галофильные)

Методы изучения морфологии:
  1. Нативные препараты «висящая» или «раздавленная» капля (подвижность);
  2. препараты, окрашенные за Граммом, Пффейфером
Питательные среды для культивирования:
  1. Щелочной агар, щелочная пептонна вода
  2. Дифференциально-диагностические: TCBS-агар, среда Монсура

Характеристика роста:
  1. На пептонной воде образуют голубую пленку через 4-6 ч.
  2. на щелочном агаре образуют дисковидные прозрачные S-колонии
  3. на TCBS-агаре образуют желтые колонии (ферментируют сахарозу)
  4. на среде Монстра образуют колонии с темно-серым центром



  1. Дифференцирующие признаки вибрионов




Антигенная структура
Биохимические свойства
Вирулентность

1.О-Аг (группоспецифи-ческий)

2. Н-Аг (общий)
Ферментация маннозы, сахарозы, арабинозы

(триада Хейберга)
1. Патогенные вибрионы (V.cholerae)

2. Условно-патогенные вибрионы (V.parahaemolyti-

cus, V.vulnificus, V.metsch-

nicovi)

3.Сапрофитные вибрионы

Метод изучения: РА со специфической О-сывороткой
Делятся на 8 хемогрупп

Делятся на 139 О-серогрупп

Возбудитель холеры (V.cholerae) относится к О-1 серогруппе и I хемогруппе по Хейбергу

  1. Внутривидовая классификация V.cholerae




По структуре О-Аг
За биологическими свойствами
  1. О-1 группа:

Серотип Огава (АВ)

Серотип Інаба (АСС)

Серотип Гиікошима (АВС)
  1. НАГ вибрионы
  2. О-139 группа (штамм bengal)
  1. Биовар cholerae
  2. Биовар el-tor
  3. Биовар proteus
  4. Биовар albensis

Классификационные признаки:
  1. Гемолиз куриных эритроцитов
  2. агглютинация еритроцитов барана
  3. чувствительность к полимиксину
  4. фаголизабельность типовыми фагами
  5. реакция Фогеса-Проскауера



  1. Патогенность и факторы вирулентности возбудителя холеры

    Патогенность
    Факторы вирулентности

    Вызывает особо-опасную кишечную инфекцию человека, которая сопровождается водянистой диареей и выраженной дегидратацией и характеризуется быстрым эпидемическим распространением
    1. Жгутик
    2. Пили (адгезины)
    3. Ферменты патогенности: плазмокоагулаза, лецитиназа, фибринолизин, нейраминидаза, протеазы
    4. Эндотоксин
    5. Экзотоксин (холероген) вызывает угнетение аденилатциклазы, что приводит к накоплению цАМФ и выходу в просвет кишечника воды и электролитов
  2. Короткая характеристика заболевания

Механизм и пути передачи заболевания
Источник инфекции
Стадии заболевания
Основные клинические признаки
Иммунитет
Профилактика
Лабораторная диагностика

Фекально-оральный
Больной человек;

Вибрионо-ситель
Инкубационный период -

1-6 суток
-выраженная интоксикация;

-профузный водянистый понос;

-рвота;

-симптомы обезвожива-ния (сухость кожи, уменьшение тургора; падение давления; тромбозы)
Напряжен-ный, стойкий, антибакте-риальный и антитоксич-ный
Неспеци-фичная конвенцион-ная и этиотропная антибактери-альная
Ускоренная:

Микроскопия (нативная, окрашенных препаратов, иммунофлюо-ресцентная)

Водный;

Алиментар-ный;

Бытовой


Факторы передачи:

Вода

Пищевые продукты

Грязные руки
Патогене-тические стадии:

-энтерит;

-гастро-энтерит;

- холерный алгид;

-кома
Специфичес-кая (только в постоянных очагах холеры):

Инактивиро-ванная холерная вакцина;

Холероген-

анатоксин
Основная:

Бактериоло-ггический метод

Вспомога-тельная:

(ретроспективная)

Серологичес-кий метод



  1. Перечень теоретических вопросов.
  1. Общая характеристика вибрионов, патогенных для человека
  2. Морфология и биологические свойства возбудителя холеры.
  3. Дифференциация биоваров холерного вибриона
  4. Микробиологическая диагностика холеры. Этапы бактериологического исследования.
  5. Методы ускоренной диагностики холеры.
  6. Профилактика холеры.
  7. Этиология и особенности микробиологической диагностики холероподобных гастроэнтеритов.

1.4.3. Источники учебной информации.

Литература (основная):
  1. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 284-291.
  2. В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 298-302.
  3. А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петерб.,2002. Стр. 394-401.
  4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999. Стр.242-247.
  5. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков, 1999. Стр.280-286.
  6. Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 188-193.
  7. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр. 409-412.
  8. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр. 200-208.

Литература (дополнительная):
  1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием. Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
  2. Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 38-44.
  3. Лекционный материал.
    1. Ориентировочная основа действия (ОДД)

Схема микробиологической диагностики холеры и холероподобных энтеритов

Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, секционный материал (сегменты тонкого кишечника), вода, пищевые продукты

Ускоренная диагностика:
  • РИФ;
  • Реакция иммобилизации вибрионов О-1 сывороткой

Бактериологический метод:

Первый этап:
  • микроскопия нативних мазков для определения подвижности;
  • микроскопия окрашенных по Грамму мазков испражнений;
  • посев исследуемого материала в щелочную ПВ, на щелочной агар, среду ТЦБС;

Второй этап (через 4-6 часов):
  • микроскопическое исследование пленки со щелочной ПВ (нативная микроскопия);
  • мазок, окраска по Грамму;
  • постановка ориентировочной РА с О-1 сывороткой;
  • при необходимости (отсутствие видимых признаков роста) пересев в другую ПВ и на плотные среды;

Третий этап (через 14-16 часов):
  • изучение колоний, которые образовались на плотных средах: мазок по Грамму, ориентировочная РА с О-1 сывороткой;
  • пересев подозрительных колоний на щелочную ПВ.

Четвертый этап (через 20-24 часа):
  • идентификация чистых культур:
    • определение сахаролитических свойств (триада Хейберга);
    • определение серотипа в ориентировочной и развернутой РА;
    • постановка биологических тестов для определения биовара;

Пятый этап (через 24-36 часов):
  • учет результатов;
  • выдача окончательного микробиологического диагноза.

Серологический метод (вспомогательный, ретроспективная диагностика, выявление носителей, оценка напряженности иммунитета):
  • определение вибриоцидов в сыворотке больных в реакции лизиса (с 3-го дня); диагностический титр 1:1000
  • определение агглютининов в развернутой РА; диагностический титр 1:80;
  • определение антитоксинов с помощью РНГА; диагностический титр 1:160.



    1. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
      1. Методика проведения занятия.
  1. Промикроскопировать демонстрационные препараты из культуры холерного вибриона, окрашенные по Грамму. Изучите характерную морфологию возбудителя. Микроскопическую картину зарисуйте в протокол.
  2. Изучить характер роста холерного вибриона на 1% пептонной воде. Данные внесите в протокол.
  3. Ознакомиться с демонстрационными питательными средами, которые используют для выделения холерного вибриона и условно-патогенных вибрионов из патологического материала (щелочной агар, кровяно-солевой агар, ТЦБС). Культуральные признаки патогенных для человека вибрионов внести в протокол.
  4. Поставить ориентировочную РА на стекле с культурой вибриона и группоспецифической О-сывороткой. Учесть результат, сделать вывод.
  5. Учесть результаты демонстрационной РА культуры вибриона с группоспецифической О-сывороткой, разбавленной до половины титра.
  6. Изучить диагностические и лечебно-профилактические препараты, которые используют для лабораторной диагностики, профилактики и лечения холеры (диагностические О-сыворотки группо- и типоспецифические, бактериофаги el-tor, C IV Мукерджи, инактивированная холерная вакцина, холероген-анатоксин, тетрациклин, доксициклин). Данные записать в протокол.
  7. Оформить протокол, сделать выводы.



      1. Организационная структура проведения лабораторного занятия.




№ этапа
Этапы работы
Время (мин..)
Средства обучения
Оборудование
Место проведения

1.
Организационная часть
2
-
-
Учебная комната

2.

Проверка исходного уровня знаний:

Устно по предварительным вопросам

Письменно - по тестам

10

5
Источники обучающей информации

Тесты на исходный уровень знаний-умений
-

3.

Инструктаж преподавателя по выполнению практической работы согласно методическим указаниям
5
Методическая разработка
-

4.
Самостоятельная работа студентов:
  • Микроскопирование мазков-препаратов холерного вибриона, занесение данных в протокол;
  • ознакомление с характером роста вибрионов в пептонной воде;
  • ознакомление с демон-страционными пита-тельными средами, внесение сведений в протокол;
  • постановка ориенти-ровочной РА на стекле с культурой вибриона и О-сывороткой;
  • учет результатов демон-страционной РА культуры вибриона в пептонной воде с групповой О-сывороткой, разбавленной до половины титра
  • ознакомление со схемой лабораторной диагностики холеры, внесение ее в протокол;
  • ознакомление с диагно-стическими и лечебно-профилактическими препаратами, которые используют для лабора-торной диагностики, профилактики и лечения холеры, внесение сведений в протокол
  • оформление выводов к лабораторному занятию

8


3


5


10


5


10


5


4
Таблица «Лабораторная диагностика холеры», алгоритм исследования
Мазки холерного вибриону, окрашенные по Грамму;

Микроскоп;


Жидкая культура вибриона в щелочной ПВ;


Среды: щелочной агар, ТЦБС, кровяно-солевой агар;


Агаровая культура вибриона;

Предметные стекла;

Группоспецифическая О-сыворотка;

Физ.. раствор;

Пипетки;

Бактериологическая петля;

Штатив с демонстра-ционной РА в пробирках


Набор препаратов: диагностические сыворотки, люминесцентная специфическая сыворотка; бактериофаги, антибиотики

5.

Оценка деятельности каждого студента и проверка усвоения темы:
  • письменно – с помощью обучающих задач;
  • устно - согласно теоре-тическим вопросам к занятию.


5


10
Система обучающих задач



6.
Подведение итогов занятия, задание для самостоятельной работы студентов при подготовке к следующей теме
3






Автор: доцент, к.м.н. Грабик И. Н.


Методическая разработка

по подготовке и работе на лабораторном занятии №45

для студентов медицинского факультета


Тема: Возбудители зоонозов – чумы, псевдотуберкулёза, кишечного иерсиниоза и туляремии. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.

    1. Актуальность темы.

Чума и туляремия - особенно-опасные зоонозные инфекции, природные очаги которых существуют почти на всех континентах. На Украине выявлены природные очаги циркуляции возбудителя туляремии среди диких грызунов. Несмотря на низкую вирулентность европейских штаммов возбудителя, заболевание может иметь тяжелое течение у ослабленных лиц, поэтому своевременная лабораторная диагностика туляремии позволяет скорректировать лечение и избегнуть летальных исходов.

Учитывая быстрое развитие туризма, существует вероятность заболевания чумой среди людей, побывавших в устойчивых природных регионах циркуляции возбудителя в тропических странах, где ежегодно регистрируются десятки случаев заболевания этой особо-опасной инфекцией среди людей. Так, последняя вспышка инфекции была зарегистрирована в 1997 г. в Индии, когда заболело более 800 лиц. Быстрое эпидемическое распространение инфекции можно предупредить только строжайшими противоэпидемическими мероприятиями, для внедрения которых необходимо лабораторно подтвердить диагноз. Таким образом, информация о биологических свойствах возбудителя заболевания не теряет своей актуальности и сегодня.

На сегодня кишечные йерсинии занимают 3-4 место в этиологической структуре кишечных инфекций, уступая лишь шигеллам и сальмонеллам. Особенно часто они вызывают патологию у детей и людей преклонного возраста. На Украине ежегодно регистрируют как спорадические случаи, так и вспышки этой пищевой инфекции. Знание биологических свойств возбудителя разрешает врачу-лаборанту поставить правильный диагноз и отдифференцировать заболевание от псевдотуберкулеза, который имеет более тяжелое течение в связи с генерализацией инфекционного процесса.
    1. Цели изучения темы.
      1. Цель общая: изучить биологические свойства возбудителя туляремии и патогенных йерсиний, знать особенности микробиологической диагностики этих заболеваний, основные противоэпидемические мероприятия в очаге возникновения особо-опасных зоонозов
      2. Цель конкретная:
        1. Знать дифференцирующие биологические свойства патогенных йерсиний
        2. Усвоить идентификационные критерии патогенных францисел.
        3. Знать и уметь правильно избрать метод для предварительной и окончательной микробиологической диагностики чумы, туляремии, пищевых йерсиниозов.
        4. Знать основные профилактические мероприятия в очаге чумы и туляремии, показания к их внедрению; знать специфические и неспецифичные профилактические препараты, которые применяют при вспышке инфекции.
        5. Усвоить основные противоэпидемические мероприятия при вспышках особенно-опасных инфекций.
    2. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
  1. Общая характеристика семейства энтеробактерий, морфологические и культуральные свойства.
  2. Дифференциально- диагностические среды для выделения возбудителей кишечных инфекций.
  3. Специальные питательные среды, характеристика факторов роста для требовательных к условиям культивирования микроорганизмов.
  4. Этапы бактериологического метода диагнстики.
  5. Механизмы и пути передачи возбудителей инфекционных заболеваний.
  6. Понятие о микробных аллергенах. Методы определения гиперчувствительности клеточного типа на микробные аллергены, значение аллергического метода в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.
  7. Серологический метод диагностики инфекций, особенности забора материала, основные серологические реакции.
    1. Содержание обучения.
      1. Граф логической структуры содержания:

1.Таксономия патогенных для человека йерсиний и франциселл

Семейство Enterobacteriaceae

Род Yersinia


Виды: Y.pestis,

Y.enterocolitica,

Y.pseudotuberculosis

Семейство Brucellaceae

Род Francisella
Виды: F.tularensis