Система комплексной интраоперационной профилактики спаечной болезни брюшины (клинико-экспериментальное исследование) 14. 01. 17 хирургия

Вид материала

Исследование

Содержание Молекулярно-генетические методы исследования полиморфизма генов цитокиновой сети у больных спаечной болезнью брюшины. Выделение ДНК Результаты исследований и их обсуждение Изменение уровня гликозаминогликанов в крови больных в различные сроки после планового оперативного лечения (M±, n=32) ГК, мкмоль/л ХС, мкмоль/л ГС, мкмоль/л

Подобный материал:

• Обоснование применения пармелии в комплексной терапии экземы (клинико-экспериментальное, 349.46kb.
• Обоснование способов хирургической коррекции нарушений углеводного обмена (клинико-экспериментальное, 502.51kb.
• Функционально адекватные анастомозы при гастрэктомии и резекции желудка (клинико-экспериментальное, 547.42kb.
• Методы оценки и клиническое значение биомеханических свойств роговицы (клинико-экспериментальное, 429.56kb.
• Экспериментальное обоснование применения нейропептидов в комплексной терапии острого, 259.86kb.
• Клинико-нейрофизиологическая оценка эффективности комплексной терапии у больных с посттравматическими, 585.38kb.
• Бандин Артем Александрович Владимир Васильевич Макарчук Содержание курсовой работы:, 28.4kb.
• Способ формирования арефлюксного пищеводно-желудочного соустья при рефлюкс-эзофагитах, 209.78kb.
• Программа научно-практической конференции, 105.1kb.
• Лазерная фотодинамическая терапия ожоговых ран (экспериментальное исследование) 14., 295.89kb.

В сыворотке крови после протеолиза методом колоночной ионообменной хроматографии выделяли фракции гликозаминогликанов: гиалуроновую кислоту (ГК), хондроитинсульфаты (ХС), гепарансульфаты (ГС). Затем методом спектроскопии определялось общее содержание ГАГ и их фракций.

^ Молекулярно-генетические методы исследования полиморфизма генов цитокиновой сети у больных спаечной болезнью брюшины.

Объектом исследования служили 300 пациентов, находившихся на стационарном лечении в ГКБ №8 г. Уфы в период с 2005 по 2008 г. Из них 104 пациента с клиническими проявлениями спаечной болезни составили основную группу. В контрольную группу вошло 196 пациента, без признаков спаечного процесса в брюшной полости.

Диагноз спаечная болезнь брюшины ставился на основании учета анамнеза, клинико-лабораторных и инструментальных (пневмоперитонеография, абдоминальная сонография) методов обследования, а также интраоперационно при повторных оперативных вмешательствах.

Распределение больных по полу было следующим: 39 мужчин (37,5%) и 65 женщин (62,5%).

В группу сравнения случайным образом было отобрано 196 пациентов у которых не выявлено признаков спаечной болезни брюшины, проходившие лечение в ГКБ № 8 г. Уфы в 2005-2008 гг. Мужчин в этой группе оказалось 74 (37,8%), женщин 122 (62,2%).

^ Выделение ДНК

Молекулярно – генетические исследования проводились на кафедре биологии БГМУ (зав. кафедрой д.м.н., профессор Викторова Т.В.). Материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из лимфоцитов периферической венозной крови.

Анализ полиморфных локусов генов TNF-α, IL1-B, IL-6 проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на термоциклере «Терцик» фирмы «ДНК-Технология» в автоматическом режиме.

Статистическая обработка результатов исследования

Анализ данных проводился с использованием методов математической статистики в пакетах SPSS 11.5 и Statistica 6.0. (Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных, 2002). Для всех количественных показателей вычислялись среднее, стандартное отклонение, минимум, максимум, стандартная ошибка среднего, а также выполнялась проверка на нормальность распределения сравниваемых показателей с использованием теста Колмогорова-Смирнова. Для сравнения двух независимых групп применялся t-критерий Стьюдента. В остальных случаях применялся непараметрический критерий Манна-Уитни. Для сравнения более чем двух независимых групп при подтверждении гипотезы о нормальности распределения в группах применялся однофакторный дисперсионный анализ, и если отвергалась гипотеза об отсутствии межгрупповых различий, проводились последующие сравнения групп с использованием поправки Бонферрони. Для сравнения двух зависимых выборок применялся t-критерий для зависимых выборок, если гипотеза о нормальности распределения в группах не отвергалась или непараметрический критерий Уилкоксона, если гипотеза о нормальности отвергалась. Для сравнения более чем двух зависимых выборок применялся непараметрический критерий Фридмена, и если гипотеза об отсутствии различий отвергалась, дополнительно использовался тест Уилконсона для парного сравнения групп с применением поправки Бонферрони. Кроме того, в ряде случаев для изучения связи между количественными показателями использовался коэффициент корреляции Пирсона. Для сравнения относительных частот в двух несвязанных группах применялся точный критерий Фишера. В работе под M± понимается Среднее±среднеквадратическое отклонение.

Определение частот генотипов (Р_i) и аллелей (p_i), проводили по стандартной формуле (Животовский Л., 1991): P_i=N_i/N, где N_i – число i–х генотипов (аллелей), N – объем выборки (число проанализированных хромосом). Частоты генотипов и аллелей, а также стандартную ошибку и доверительный интервал выражали в процентах (%). Разницу в распределении частот аллелей и генотипов между группами рассчитывали с использованием критерия ² с поправкой Йетса на непрерывность.

^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Определение гликозаминогликанов сыворотки крови как способ прогнозирования спаечной болезни брюшины

Пациентам, имевшим ранее операции на органах брюшной полости (резекции желудка по поводу язв желудка и 12 перстной кишки, холецистэктомии по поводу желчнокаменной болезни, аппендэктомии), поступившим на плановое оперативное лечение (послеоперационная вентральная грыжа) производилось изучение уровня гликозаминогликанов сыворотки крови до операции и в раннем послеоперационном периоде. Проанализированы результаты изменений уровня гликозаминогликанов сыворотки крови в раннем послеоперационном периоде у 35 пациентов с наличием спаечного процесса в брюшной полости и у 32 пациентов без признаков спаечного процесса в брюшной полости.

Проведено статистическое сравнение групп пациентов со спаечным процессом в брюшной полости и без спаек. Средний возраст пациентов 44,09±10,37 года. Интервал между первой и второй лапаротомией составил 59,2±11,4 месяцев. Выявлена однородность сравниваемых групп по полу (критерий Пирсона) χ2=0,295, p=0,587 и по возрасту (по t – критерию Стьюдента) t=0,343, р=0,733.

Для пациентов без признаков спаечного процесса в брюшной полости характерно нарастание содержания ГАГ и их фракций в крови на 5 –е сутки и последующее снижение на 7-е сутки после операции (таблица №.5).

Выявлено колебание ГАГ в крови от 26,06 мкмоль\л до 57,09 мкмоль\л в различные сроки от момента операции (отмечено статистически достоверное увеличение ГАГ - р<0,0001). Отмечено преимущественное содержание в крови больных 1 фракции ГАГ, т.е. гиалуроновой кислоты – около 60 - 80% состава.

В послеоперационном периоде у больных в ходе комплексного клинического обследования спаечный процесс в брюшной полости не выявлен.

Таблица 5

^ Изменение уровня гликозаминогликанов в крови больных в различные сроки после планового оперативного лечения (M±, n=32) *

Показатели	Сроки исследования сыворотки крови после операции, сут
До операции	3	5	7
ГАГ, мкмоль\л	26,064,8	64,77,97 (р<0,0001)	84,595,76 (р<0,0001)	57,093,8 (р<0,0001)
^ ГК, мкмоль/л	15,032,7	42,025,18 (р<0,0001)	55,783,79 (р<0,0001)	34,192,3 (р<0,0001)
^ ХС, мкмоль/л	4,011,05	8,91,1 (р<0,0001)	10,970,74 (р<0,0001)	10,230,7 (р<0,0001)
^ ГС, мкмоль/л	7,021,6	13,671,69 (р<0,0001)	17,841,22 (р<0,0001)	12,660,81 (р<0,0001)