Національний фармацевтичний університет Проблеми клініки, діагностики та терапії гепатитів Збірник праць науково практичної конференції Харків 2005
| Вид материала | Диплом |
- Матер І а л и науково-практичної конференції з міжнародною участю 1-2 березня 2007, 7242.75kb.
- Наукова програма передбачає науково-практичні доповіді та постерну сесію з обговоренням, 40.36kb.
- Міропольська М. А., Капченко Л. М., Алєксєєва А. В., Савченко, 7248.82kb.
- Хx міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1555.53kb.
- Хix міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1754.6kb.
- Хvii міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1402.07kb.
- Хviii міжнародної Науково-практичної конференції Інформаційні технології: Наука, техніка,, 1642.96kb.
- Запорізька облдержадміністрація запорізька обласна рада запорізький національний університет, 6793.22kb.
- Всеукраїнська федерація «спас» запорізька облдержадміністрація запорізька обласна рада, 3474.89kb.
- Міністерство аграрної політики України Львівський національний аграрний університет, 48.27kb.
Одержання нових моноклональних антитіл до поверхневого антигену вірусу гепатиту В
Ніколаєнко І.В., Галкін О.Ю., Раєвська Г.Є, Донська Є.С.
АТЗТ НВК «ДіаПрофМед», НТЦ Імунобіотехнології НТК «Інститут монокристалів» НАН України
Ррозвиток методів серодіагностики обумовлює постійне підвищення вимог до чутливості та специфічності тест-систем, а отже і до якості їх компонентів, зокрема моноклональних антитіл (МКАТ). Питання вдосконалення діагностичних наборів на вірусний гепатит В (ВГВ) залишається особливо актуальним. Збільшення показника чутливості тесту до 0,1 – 0,5 нг HBs-антигену на мл не має призводити до зниження специфічності аналізу. Вирішення даного завдання можливе за рахунок: одержання нових МКАТ для «сендвіч»-варіанту ТІФА; підбору більш вдалих пар МКАТ; удосконалення імуноферментних кон’югатів; оптимізації умов проведення аналізу. Реалізація першого напрямку пов’язана з: 1) одержанням HBs-антигену високого ступеню чистоти; 2) відпрацюванням схем імунізації, що забезпечують високий вихід позитивних клонів гібридом; 3) оптимізацією методів тестування та відбору гібридом, які продукують високоактивні та специфічні МКАТ.
Джерелом нативного HBs-антигену є сироватка крові людей інфікованих ВГВ. Більшість методик одержання HBs-антигену, що базуються на його фізико-хімічних властивостях, досить складні та багато етапні, а також потребують значних об’ємів сироватки. Наші дослідження довели низьку ефективність зазначених методів. Проведені експерименти спонукали до використання імуноафінної хроматографії, як високоефективного методу виділення вірусних антигенів.
Окрім HBs-антигену, одержаного за оригінальною схемою, для імунізації використовували HBs-антиген виробництва «Chemicon» (США) та «ИмБио» (Росія). Імунізацію мишей лінії Balb/c проводили за двома принципово різними схемами – довгостроковій та короткостроковій. З використанням даних схем було проведено 14 гібридизацій та одержано більше 200 позитивних клонів гібридом.
Підвищення ефективності одержання та відбору практично значущих клонів можливе за рахунок вдосконалення та оптимізації методик імунізації мишей і тестування гібридом. А це вимагало адаптації схеми ТІФА для відбору МКАТ, придатних для використання у якості кон’югату або імуносорбенту, а також модифікації схем імунізації мишей з метою підвищення ролі необхідних епітопів HBs-антигену при імунній відповіді. Найбільш простим способом визначення епітопної спрямованості одержаних МКАТ є їх порівняння із комерційними аналогами. Для цього зручно використовувати конкурентний варіант ТІФА. Так був відібраний клон 95Е1, який за специфічністю переважав комерційний аналог NF5. Даний підхід добре зарекомендував себе при підборі МКАТ для імуноферментного кон’югату. Проте така схема не виправдала себе при відборі МКАТ для імуносорбенту, тому для вирішення даної задачі одержані МКАТ тестували у модифікованому «сендвіч»-варіанті ТІФА. Роботи по відбору МКАТ для імуносорбенту ще не завершені. Використання модифікованого «сендвіч»-варіанту ТІФА дозволяє значно прискорити відбір гібридом, минаючи тривалий етап клонування та одержання асцитичної рідини – аналізуються лише ті клони, МКАТ яких виявляють активність у даній схемі ТІФА. Підвищення ефективності одержання придатних для серодіагностики клонів проводили не тільки шляхом оптимізації їх відбору, а й модифікацією схем імунізації тварин. З цією метою імунізацію мишей проводили комплексом «антиген-антитіло». Роботи по аналізу одержаних таким чином клонів гібридом тривають.
Імуно-біохімічні показники у пацієнтів інфікованих вірусами гепатитів В, С і ВІЛ
Оніщенко Т.Є.№, Колтунік О.Л.І, Тютюнщиков Б.Г.№, Гарамась В.В.І, Савєльєв В.Г. №
Запорізький державний медичний університет №, Запорізький обласний центр профілактики та боротьби зі СНІД І
Парентеральні вірусні гепатити, разом із ВІЛ – інфекцією, стали маркерами споживання наркотиків. Рівень інфікування парентеральними гепатитами осіб, які вживають наркотики, у структурі вірусних гепатитів, неухильно зростає і складає 60 –80 %. Медична та соціальна значимість вірусів гепатитів В та С є надзвичайно вагомою, бо обумовлюється їх значною поширеністю, високим рівнем захворюваності, хронізацією процесу і розвитком гепатокарциноми (Соринсон С.Н.). Інфікованність вірусами гепатитів В та С у осіб з ВІЛ набуває значимість у зв’язку з особливостями перебігу на тлі прогресуючої імунологічної недостатності.
Метою дослідження стало дослідження імуно-біохімічних показників у пацієнтів інфікованих вірусами гепатиту В, С на тлі ВІЛ - інфекції. Контрольна група представлена 25 ВІЛ-позитивними пацієнтами не інфікованими вірусами парентеральних гепатитів.
Інфікованність вірусами парентеральних гепатитів серед пацієнтів диспансерної групи Запорізького обласного центру профілактики та боротьби зі СНІДом склала - 71.3%, з них частка ГС склала 81.6%, ГВ - 1.63% , ГВ + ГС -13.9%, ГВ + ГС + ГD - 2.9%.
У групі обстежених пацієнтів, інфікованих вірусами гепатитів В+С, переважали чоловіки – 61.8% (21 особа), частка жінок склала - 38.2 % (13 осіб). Середній вік обстежених склав 30.1 ± 5.7 років. За стадіями ВІЛ-інфекціїї досліджувана група розподілилась наступним чином: категорія А (безсімптомне носійство, генералізована лімфаденопатія) – 70.6 %, категорія В (маніфестна форма) - 29.4 %.
Усі пацієнти були виявлені при профілактичному обстеженні. Сурогати опію внутрішньовенно вживали 82.4 % ВІЛ-інфікованих, а у 17.6 % інфікування відбулося статевим шляхом. Майже у всіх пацієнтів (85.3%) час інфікуавання встановити не вдалося.
Інфікування гепатитами В і С діагностували на підставі клініко-епідеміологічних, серологічних, біохімічних показників функціонального стану печінки та її ультразвукового дослідження.
Етіологічний діагноз підтверджено виявленням у сироватці крові пацієнтів маркерів до вірусів гепатитів В і С в ІФА. У обстежених пацієнтів були виявлені наступні комбінації маркерів: б HCV, б HCVcoreIgM, HBSAg у 35.3%; б HCV, HBcor IgM / IgG у 38.2%; б HCV, HBSAg, HBeAg, HBcor IgM у 14.7%; б HCV, HBcor IgM –11.8%
Серед клінічних ознак у обстежених пацієнтів переважали астенічний, диспепсичний та абстинентний синдроми. Підвищення загального білірубіну у 2 - 2.5 рази спостерігали майже у четвертої частини пацієнтів (23.5 %). В усіх пацієнтів зареєстрована гепатомегалія, рідше спленомегалія (61.8%).
Зміни у біохімічних та імунологічних показниках ВІЛ - інфікованих представлені у таблиці. У пацієнтів обох груп відзначалось підвищення активності АЛТ у 1.7-1.5 рази, тимолової проби у 1.3-1.5 рази, зниження вмісту CD4 та ІРІ, у порівнянні з контролем. Залучення гуморальної ланки характеризувалось підвищенням рівнів основних класів імуноглобулінів. Значніше підвищувалися тимолова проба, IgG, IgA у ВІЛ – інфікованих пацієнтів категорії В, у порівнянні з категорією А і контролем.
Імуно-біохімічні показники у пацієнтів інфікованих вірусами гепатитів В, С і ВІЛ
Показники | Контроль,n=25 | Категорія А, n=24 | Категорія В, n=10 |
АЛТммоль/ (л∙год) | | | |
Тимолова проба, од. | | | |
CD4, % | | | |
CD8,% | | | |
ІРІ | | | |
IgG, г/л | | | |
IgA, г/л | | | |
IgM, г/л | | | |
*
*
*
*/**
*
*
*
*
*
*
*
*/**
*
*/**
*
*Примітка: * - (p < 0.05) – достовірність порівняння показників між контролем та пацієнтами інфікованими вірусами гепатитів В і С
** - (p < 0.05) – достовірність порівняння показників між ВІЛ-інфікованими пацієнтами категорій В і А
Таким чином, у пацієнтів інфікованих вірусами гепатитів В і С на тлі прогресуючого перебігу ВІЛ-інфекції відзначався помірно виражений цитолітичний синдром, підвищення тимолової проби. Імунологічні показники характеризувались зниженням СД4, ІРІ, підвищенням рівня основних класів імуноглобулінів, яке було значнішим у пацієнтів категорії В.