Geum.ru

Тезисы докладов

Вид материалаТезисы
А.И.Мирошников , О.Г.Кулакова , И.Д.Константинова
Материалы и методы.
Исследование комплексного воздействия ионизирующей и ультрафиолетовой радиации на хрусталик глаза мыши. морфологические изменени
Подобный материал:
1   ...   44   45   46   47   48   49   50   51   ...   78

СОЗДАНИЕ НОВЫХ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ – СТРУКТУРНЫХ АНАЛОГОВ КЛАДРИБИНА. ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНОСТИ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ТЕРАПИИ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА КАК АУТОИММУННОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ




А.И.Мирошников 2), О.Г.Кулакова 1), И.Д.Константинова 2),

И.С.Музыка 2), Е.Ю.Царева 1), С.Г.Щур 1), В.А.Силуянова 1),

А.Н.Бойко 1), О.О.Фаворова 1)



1)ГОУ ВПО "Российский государственный медицинский университет Росздрава", Москва

2)Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН), Москва


Введение. Аналог пуринового нуклеозида – Кладрибин (2-хлор-2’-дезоксиаденозин, CdA) – относится к иммунодепрессантам второго поколения и обладает более селективным подавляющим действием на лимфоциты, чем многие другие иммунодепрессанты. Успешное применение Кладрибина при лечении миелолейкозов позволило сделать предположение о возможности применения его при аутоиммунных заболеваниях, в том числе при рассеянном склерозе (РС), при котором показана патологическая роль активированных лимфоцитов и развитии и течении заболевания. Фирмами Serono и IVAX проводятся клинические испытания фазы III эффективности таблетированной формы Кладрибина для лечения ремиттирующей формы РС.

Целью данного проекта является создание новых структурных аналогов препарата Кладрибина и оценка их терапевтического потенциала, наряду с Кладрибином, в культурах мононуклеарных клеток (МК) крови больных различными формами РС.

Материалы и методы. Фармацевтическая субстанция Кладрибина и четыре его принципиально новых структурных аналога (2-хлор- (Cl-Ara-A), 2-гидрокси- (OH-Ara-A), 2-фтор- (F-Ara-A) арабинофуранозные производные аденина и 2-Фтор-арабинофуранози­ладенин 5’-фосфат (FMP)) получены в ИБХ РАН с помощью оригинальной высокоэффективной биотехнологии. Проведено сравнительное исследование влияния препарата Кладрибин и ряда его структурных аналогов на пролиферующие и покоящиеся МК, выделенные из крови здоровых доноров и больных РС. В исследование включены больные разными формами РС (первично-прогрессирующий РС (ППРС), ремиттирующий РС (РРС), вторично-прогрессирующий РС (ВПРС)). МК выделяли методом центрифугирования на градиенте фиколл/гипак. При изучении влияния тестируемых соединений на пролиферацию МК (в основном Т-лимфоцитов) анализировали уровень включения [3H]тимидина активированными фитогемагглютинином (10 мкг/мл) клетками при их культивировании в среде с различными концентрациями Кладрибина (0,001-1 мкг/мл). Цитотоксическое действие Кладрибина и его аналогов изучали с помощью модифицированного для суспензионных клеток МТТ-теста.

Результаты. Выявлено выраженное цитотоксическое действие Кладрибина на делящиеся и покоящиеся лимфоциты больных РС. Показано, что средняя концентрация Кладрибина, вызывающая 50 % снижение включения [3H]тимидина в активированные МК больных ВПРС, достоверно меньше, чем для больных ППРС (р = 0,02) и для больных РРС (р = 0,03). Средняя концентрация Кладрибина, вызывающая 50 %-ную гибель покоящихся МК больных ВПРС, достоверно меньше, чем для больных ППРС (р = 0,028). Выявлено цитотоксическое действие аналогов Кладрибина на делящиеся и покоящиеся лимфоциты больных РС и здоровых доноров. Сравнение аналогов Кладрибина по мере убывания средних концентраций, вызывающих 50 %-ную гибель покоящихся МК больных РС, позволило выстроить их в следующий ряд: CdA < F-Ara-A ≤ FMP < OH-Ara-A ≤ Cl-Ara-A.

Заключение. Проведенная первичная оценка терапевтического потенциала отечественного Кладрибина на культурах МК крови больных различными формами РС свидетельствует о перспективности применения этого препарата при РС (особенно при вторично-прогрессирующей форме). Выявлена меньшая цитотоксичность (по сравнению с Кладрибином) четырех его структурных аналогов.


ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ИОНИЗИРУЮЩЕЙ И УЛЬТРАФИОЛЕТОВОЙ РАДИАЦИИ НА ХРУСТАЛИК ГЛАЗА МЫШИ. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ




К.О.Муранов1), Н.Б.Полянский1), А.А.Федоров 2), К.И.Банник 3),

М.А.Островский 1)



1)Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН

2)ГУ НИИ глазных болезней,

3) Международный университет «Дубна»


Ранее мы показали, что комбинированное действие ионизирующей и ультрафиолетовой радиации на глаз мыши вызывает существенно большее повреждающее действие на прозрачность хрусталика, чем каждый фактор в отдельности (Муранов К.О. и др., 2007). Целью настоящего исследования было изучить морфологические изменения в хрусталике на уровне тканевом, клеточном и субклеточном уровне. Мышей-самцов (гибрид F1 C57bl и CBA) облучали однократно гамма-лучами в дозе 2 и 4 Gy, затем часть мышей получала ежедневную дозу ультрафиолета (250-350 нм) в специальной клетке. Мощность ультрафиолетового излучения на уровне пола составляла 5.5+0.8 Вт/м2, время облучения – 15 мин. На 7-м месяце после начала облучения животных забивали. Для изготовления полутонких срезов, глаза фиксировали в глютаровом альдегиде и монтировали в эпон. Сагиттальные срезы окрашивали полихромным красителем и заключали в синтетическую смолу Mount Quick. Для изготовления распластанного препарата эпителиальных клеток, глаза фиксировали в жидкости Карнуа, а затем переводили в 70 % спирт. Капсулу с эпителиальными клетками снимали с хрусталика, инкубируя его в 4 % уксусной кислоте, затем капсулу под стереомикроскопом распластывали на предметном стекле. Препараты окрашивали гематоксилин эозином по стандартной методике и заключали в синтетическую смолу Biomon. При исследовании препаратов во всех экспериментальных группах обнаружены неспецифические изменения, связанные со старением животных. Это, прежде всего, набухание клеток кортикальных слоев, появление в их цитоплазме микровакуолей, ослабление связей между клетками, которые проявляются в образовании разрывов между поверхностными и более глубоколежащими слоями. В эпителии обнаруживается появление мелких вакуолей, как в цитоплазме, так и в клеточном ядре. В группе животных получавших ультрафиолетовое облучение обнаружено истончение передней капсулы, отложение на ней гранул меланина, свидетельствующее о повреждении радужной оболочки. В группе облученных гамма-лучами мышей наблюдали уплощение клеток эпителия и дефрагментацию их ядер. Плотность клеточного монослоя была снижена при дозе 2 Gy и существенно снижена при действии дозы в 4 Gy. На поверхности эпителиального слоя наблюдали отдельные десквамированные клетки. При действии двух повреждающих факторов – гамма- и ультрафиолетового излучения – наблюдали комбинацию отмеченных повреждений, но при этом были отмечены участки перерождения кубического эпителия в плоский с образованием двух слоев клеток, участки отслойки капсулы от клеточной массы хрусталика. В случае комбинации дозы радиации 4 Gy и ультрафиолета были выявлено существенное снижение плотности эпителиальных клеток, сопровождаемое появлением клеток с очень крупными ядрами, а также участки перерождения клеток эпителия в фибробласто-подобные клетки, которые образовывали многослойные структуры. Обнаружена положительная корреляция между макроизменениями хрусталика, обнаруживаемыми при исследовании хрусталика при жизни с данными микроскопического исследования. Таким образом, на микроскопическом уровне подтвержден обнаруженный нами ранее на макроуровне факт того, что комбинация действия двух повреждающих факторов – радиации и ультрафиолета – вызывает более существенное повреждение хрусталика, чем каждый фактор в отдельности.