Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание Разработка метода прижизненной визуализации опухолей с использованием специфического контрастирования биоинженерными комплексами Изучение биохимического полиморфизма са В.О. Попов, С.С. Шишкин, Л.И. Ковалев, М.А. Ковалева Н.Ю. Синицына, И.Ю. Торопыгин, В.Е. Охриц, О.Б. Лоран

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 4952.24kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

РАЗРАБОТКА МЕТОДА ПРИЖИЗНЕННОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ОПУХОЛЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СПЕЦИФИЧЕСКОГО КОНТРАСТИРОВАНИЯ БИОИНЖЕНЕРНЫМИ КОМПЛЕКСАМИ

НА ОСНОВЕ ПОЛУПРОВОДНИКОВЫХ НАНОКРИСТАЛЛОВ

А.Г. Орлова¹⁾, И.В. Балалаева^1,2), А.А. Брилкина^1,2), Т.А. Здобнова^1,3),

М.В. Ширманова^2,4), И.М. Крутова²⁾, О.А. Стремовский³⁾, Е.Н.Лебеденко³⁾, И.В.Турчин ¹⁾, С.М. Деев³⁾

¹⁾Институт прикладной физики РАН, Нижний Новгород

²⁾Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобаческого, Нижний Новгород

³⁾ Институт биоорганической химии РАН им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова, Москва

4) Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород


Одним из перспективных направлений в современной биомедицине является поиск новых путей неинвазивного получения изображений внутренней структуры биологических объектов, в том числе опухолей. Однако сильное поглощение и рассеяние света биологическими тканями делает необходимым применение дополнительных контрастирующих веществ. В последние годы появился принципиально новый класс контрастирующих агентов – флуоресцентные нанокристаллы (квантовые точки, QDs) с определяемой квантово-размерными эффектами люминесценцией, высоким квантовым выходом и молярной экстинкцией, широким спектром поглощения, а также исключительной стабильностью к фото- и химической деградации.

Нами был разработан метод прижизненной оптической визуализации опухолей с использованием специфичных биоинженерных комплексов на основе флуоресцентных нанокристаллов.

Для создания биоинженерных комплексов были использованы коммерческие полупроводниковые нанокристаллы с максимумом флуоресценции при 705 нм (Invitrogen, США). Для направленной доставки применяли мини-антитела (scFv) 4D5, взаимодействующие с онкомаркером HER2/neu, конъюгированные с нанокристаллами с помощью белкового модуля барназа-барстар. Функциональные свойства полученных комплексов (устойчивость, специфичность) были оценены в условиях in vitro на клетках карциномы молочной железы человека SKBR-3 и карциномы яичника SKOV-3. На иммунодефицитных животных – носителях опухоли человека (SKBR-3), были проведены прижизненные эксперименты по маркированию опухолей методами пассивной и адресной доставки. Прижизненная визуализация опухолей проводилась на установке для диффузионной флуоресцентной томографии (ИПФ РАН, Россия). Оценка распределения нанокристаллов в организме животного post mortem проводилась методами спектроскопии и конфокальной микроскопии.

В результате выполнения работы созданы биосовместимые контрастирующие агенты на основе биоинженерных комплексов полупроводниковых нанокристаллов и белков адресной доставки. Получены прижизненные флуоресцентные изображения животных-опухоленосителей, позволяющие продемонстрировать возможности визуализации опухолей при разных подходах к их маркированию: адресной доставки нанокристаллов и пассивного мечения. Показано органное распределение нанокристаллов через разное время после их введения.

Разработанный метод прижизненной визуализации опухолей с использованием полупроводниковых нанокристаллов является инновационным в отношении практики экспериментальной онкологии, предоставляя возможности для прижизненной диагностики, наблюдения роста и развития злокачественных новообразований, контроля их лечения и оценки эффективности новых терапевтических методов.

ИЗУЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА СА⁺²-СВЯЗЫВАЮЩИХ И НЕКОТОРЫХ ДРУГИХ АКТИН-СОДЕРЖАЩИХ БЕЛКОВ ПРИ РАКЕ ПРОСТАТЫ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ НОВЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ

В.О. Попов¹⁾, С.С. Шишкин¹⁾, Л.И. Ковалев¹⁾, М.А. Ковалева¹⁾,

А.А. Макаров¹⁾, И.Н. Крахмалева¹⁾, К.В. Лисицкая¹⁾, О.С. Соколова²⁾,

Н.Ю. Синицына²⁾, И.Ю. Торопыгин³⁾, В.Е. Охриц⁴⁾, О.Б. Лоран⁴⁾

¹⁾Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва;

²⁾Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова;

³⁾НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, Москва;

⁴⁾Российская медицинская академия постдипломного образования, Москва


В соответствии с целями проекта, направленного на изучение биохимического полиморфизма Са⁺²-связывающих и некоторых других актин-содержащих белков (АСБ) для разработки методов эффективной диагностики рака простаты (РП), был проведен сравнительный анализ белков из клеточных культур LNCap, Du145, PC3, моделирующих РП, и из культуры PZ-HPV-7 (модель нормального эпителия простаты), а также белков, экстрагированных из биопсийных и/или операционных материалов при раке и гиперплазии простаты. В работе использовали комплекс протеомных методов, включавший несколько модификаций двумерного электрофореза по О’Фарреллу (с применением амфолиновых и иммобилиновых градиентов рН при изоэлектрофокусировании в разных режимах), а также MALDI-TOF MS и MS/MS технологии для идентификации белков. На типичных электрофореграммах, полученных с применением амфолиновых градиентов, регистрировалось около 400-600 белков, характеризовавшихся Мм от 8,5 до 450 кДа и pI от 4,5 до 11,0, а при использовании иммобилиновых градиентов удавалось детектировать около 800 белков, характеризовавшихся Мм от 7,5 до 250 кДа и pI от 4,0 до 8,5. Среди 110 идентифицированных белков из тканей простаты оказалось 27 изоформ различных АСБ, включая ряд Са⁺²-связывающих белков (S100A6, S100A9, изоформы аннексинов, тропомиозинов, трансгелинов, кальпонин 1 и др.). Среди 67 идентифицированных белков культивируемых клеток также были выявлены изоформы АСБ, относящиеся к Са⁺²-связывающим белкам, в частности S100A11. Результаты сравнительного анализа указывают на перспективность отдельных изоформ семейства S100 для разработки методов диагностики РП.

Параллельно с помощью специальной модификации ПЦР в реальном времени (Taqman-анализ для дискриминации аллелей) проводился анализ ряда однонуклеотидных замен (SNP’s) в генах, кодирующих отдельные АСБ, а также белки, участвующие в реализации функций некоторых ростовых факторов. Суммарно, SNP’s в гене TAGLN1 (rs36112166 и rs 12284316) были проанализированы в небольшой группе славян (по 46 мужчин), но при этом не было выявлено ни гомозигот по редкому аллелю, ни гетерозигот. Вместе с тем проведенный анализ в бóльших по размерам славянских выборках двух близко расположенных SNP’s в гене FMN1 (T/C rs11072170 и A/G rs2306277, при n = 155 и 224, соответственно) показал следующее распределение генотипов: TT – 12,4%, TC – 53,2%, CC – 34,4 % и AA – 19,6 %, AG – 57,1 % GG – 23,3 %, соответственно. Полученные данные несколько отличались западноевропейских выборок и совершенно не походили на показатели азиатских групп (по материалам NCBI). При этом удалось обнаружить тенденцию к уменьшению TT генотипов по SNP rs11072170 (до 7,3 %) и накоплению GG генотипов по SNP rs2306277 у больных РП. В отличие от данных, полученных для FMN1, результаты генотипирования нашей выборки (n = 134) по SNP C/G rs2854746 в гене IGFBP-3 оказались близкими к данным для азиатской группы и не выявили отличий у больных РП.


Работа поддержана Программой Президиума РАН «ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ НАУКИ – МЕДИЦИНЕ» и Государственным контрактом № 8/3-373н-08.