Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание Определение иммунофенотипа флуоресцирующих клеток mel kor-turbo-rfp О.С.Бурова , А.Ю. Барышников Лазер-индуцированная аутофлуоресценция в диагностике предрака и раннего рака шейки матки

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 4952.24kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИММУНОФЕНОТИПА ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ КЛЕТОК MEL KOR-TURBO-RFP

А.П. Савицкий¹⁾, И.Г. Меерович¹⁾, Л.Р. Арсланбаева ¹, Д.В. Соколова ²⁾,

О.С. Бурова ²⁾, А.Ю. Барышников²⁾

¹ Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН

² НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН


Флуоресцирующая клеточная линия mel Kor-Turbo-RFP обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками, по скорости роста in vitro и in vivo и ряду других свойств адекватно отражает свойства исходной клеточной линии меланомы человека mel Kor (полученной в ЭдиТО РОНЦ РАМН).

Исходная клеточная линия характеризуется экспрессией меланомных (дифференцировочных), опухолеассоциированных маркеров и отсутствием антигенов гистосовместимости первого и второго класса.

Представляется важным подтвердить, что новое по сравнению с исходной клеточной линией свойство клеток клеточной линии mel Kor-Turbo-RFP экспрессировать красный флуоресцирующий белок не повлияло на иммунофенотип клеток. Кроме того, информация об антигенах, презентированных на поверхности клеток mel Kor-Turbo-RFP, необходима для случаев, когда на флуоресцирующей модели опухоли животных предполагается исследовать противоопухолевое действие препаратов, основанных на антителах к этим антигенам, либо когда другие препараты планируется доставлять к опухоли при помощи антитело-опосредованного направленного транспорта (конъюгаты препаратов с антителами, иммунолипосомы и т.д.).

Иммунофенотип клеток клеточной линии mel Kor-Turbo-RFP определяли при помощи проточной цитофлуориметрии, при проведении анализа использовали реакции прямой и непрямой иммуно-флуоресценции, затем клетки фиксировали формалином. В работе использовались моноклональные антитела (коньюгированные с FITC, если не указано иное) к следующим антигенам: CD3 и CD20 – качестве отрицательных контролей (маркеры характерны для T- и B-лимфоцитов, соответственно), CD63 (дифференцировочный маркер, характерный для меланомы), к антигенам гистосовместимости HLA-ABC, НLA-DR (для исходной клеточной линии mel Kor характерно отсутствие этих антигенов, что является редко встречающейся особенностью меланомных клеток), а также CD54 (маркер характерен для лейкоцитов и эндотелиальных клеток) и CD34. Клеточную суспензию исследовали при помощи проточного цитофлуориметра FACSCalibur (BD, США) с использованием программного обеспечения CellQuest. В качестве контролей использовались также немеченые, но фиксированные формалином клетки и клетки после инкубации с F(ab)2-FITC.


Таблица 1

Уровень экспрессии антигенов на клетках линии mel Kor-Turbo-RFP

Антитела против антигена/метка	Антивидовые антитела/метка	Уровень экспрессии антигенов на клетках линии mel Kor- Turbo-RFP, %
CD3 / FITC		1.3
CD20 / FITC		1.2
CD63 / FITC		96.0
CD54	F(ab)2/ FITC	13.4
CD34/RPE		37.0
Anti HLA-DR/APC		4.8
Anti HLA-DR/ FITC		1.1
Anti HLA-ABC	F(ab)2/ FITC	1.5

Полученные результаты (табл. 1) показывают, что клетки mel Kor-Turbo-RFP характеризуются экспрессией меланомного клеточного маркера CD63, подчеркивающего специфичность данной клеточной линии, и отсутствием антигенов гистосовместимости первого и второго класса.

Таким образом, клеточная линия mel Kor-Turbo-RFP по исследованным маркерам сохранила иммунофенотип по сравнению с исходной меланомой mel Kor.

ЛАЗЕР-ИНДУЦИРОВАННАЯ АУТОФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ

В ДИАГНОСТИКЕ ПРЕДРАКА И РАННЕГО РАКА ШЕЙКИ МАТКИ

В.В. Смирнов¹, Н.Н.Булгакова¹⁾, К.А. Верещагин¹⁾, Е.Г. Новикова²⁾, О.И. Трушина²⁾, О.С. Балахонцева²⁾, И.А.Аполихина³⁾

¹⁾ИОФ им. А.М. Прохорова РАН,

²⁾ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росмедтехнологий»,

³⁾ Кафедра акушерства, гинекологии и перинатологии

ФППО ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова


На протяжении последних лет наблюдается тревожная тенденция роста заболеваемость раком шейки матки среди молодых женщин моложе 29 лет, т.е. в репродуктивно значимой части населения. В этой связи актуальной проблемой является разработка новых неинвазивных методов ранней диагностики предрака и рака шейки матки, поскольку ранняя диагностика дает возможность проводить органосохраняющее лечение. К числу таких методов относятся флуоресцентные методы, которые позволяют выявлять злокачественные поражения по индуцированной световым излучением характерной флуоресценции эндогенных или экзогенных флуорофоров биологических тканей.

Основной целью нашего исследования была разработка методики аутофлуоресцентной диагностики (АФД) предопухолевой патологии шейки матки. Основу АФД составляют различия в спектрах аутофлуоресценции между патологическими и здоровыми тканями, которые обусловлены излучением эндогенных флуорофоров при возбуждении в УФ и видимой области спектра.

В качестве метода исследования применяли метод локальной флуоресцентной спектроскопии при возбуждении в трех спектральных областях (405 нм, 532 нм и 638 нм). Измерения спектров нормального и дисплазированного эпителия проводили in vivo на спектрально-флуоресцентной диагностической установке «Спектр-Кластер» в диапазоне 420-800 нм с помощью специально разработанного волоконно-оптического зонда. В ходе выполнения проекта проведены измерения спектров аутофлуоресценции нормального и патологического эпителия в статистически достоверных группах пациенток с морфологически подтвержденной патологией шейки матки (дисплазии различной степени, рак шейки матки). Показано, что при возбуждении в красной области спектра (638 нм) аутофлуоресценция многослойного плоского и цилиндрического эпителия практически не регистрируется. Напротив, при возбуждении в синей (405 нм) и зеленой (532 нм) областях регистрируются воспроизводимые спектры аутофлуоресценции указанных тканей, причем статистически достоверные различия в спектрах аутофлуоресценции нормального и дисплазированного эпителия (ЦИН2-3, включая CIS) регистрируются in vivo только при возбуждении в 408 нм. Проведено исследование и оценка различных алгоритмов расчетов спектральных признаков, которые могут иметь прогностическое значение в оценке процесса развития предопухолевой трансформации многослойного плоского эпителия шейки матки.