Физиологическая роль миелопероксидазы в норме и при патологии
Курсовой проект - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие курсовые по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
Введение
Миелопероксидаза (MPO) является одной из самых изученных эндогенных пероксидаз млекопитающих. Основной функцией МРО в организме является защита от внешней инфекции, однако при ряде условий она может вызывать повреждение собственных тканей организма в очагах воспаления [6].
Молекула МРО (М 150 кД) состоит из двух идентичных, соединенных между собой дисульфидной связью, димеров, каждый из которых содержит гликозилированную тяжелую ?-субъединицу (57 кД) с ковалентно связанным гемом (протопорфирин IX с ионом железа в центре) и негликозилированную легкую ?-субъединицу (12 кД) [6, 11].
Данный фермент содержится в азурофильных гранулах нейтрофилов (до 5% сухого веса клетки), а также в моноцитах и некоторых типах тканевых макрофагов [35].
Биосинтез МРО осуществляется во время дифференциации миелоцитов в костном мозге и заканчивается ко времени выхода зрелых гранулоцитов и моноцитов в кровеносное русло. После активации Фк происходит дегрануляция, и МРО секретируется либо внутрь фагосомы, либо во внеклеточное пространство (межклеточная жидкость, кровь). При наличии воспаления уровень свободной МРО в крови повышается. Будучи катионным белком, МРО может связываться с отрицательно-заряженной клеточной мембраной, в частности эндотелиальной, и при наличии субстрата может вызывать окислительные повреждения тканей организма в очагах воспаления.
В клинической практике активность МРО нейтрофилов служит маркером интенсивности воспалительных процессов, а также является перспективным диагностическим и прогностическим показателем при ряде заболеваний и патологических состояний [45].
Повышенный системный уровень МРО (содержание МРО в нейтрофилах и в кровотоке) ассоциируется с наличием коронарных артериальных заболеваний и может увеличивать риск развития неблагоприятных кардиологических событий (инфаркт миокарда, внезапная смерть и др.) у больных с грудной болью и острым коронарным синдромом. Кроме того, повышенный уровень МPО может способствовать развитию атеросклероза, системных васкулитов различной этиологии, многих воспалительных процессов хронического течения [41].
С другой стороны, снижение и исчезновение активности МPО сопровождается падением резистентности организма к инфекции, что является одним из ведущих факторов генерации патологического процесса.
Целью данной работы является модификация лабораторного метода для спектрофотометрического определения спонтанной активности MPO полиморфноядерных гранулоцитов периферической крови человека и его сравнительная оценка c различными лабораторными методами определения активности MPO нейтрофилов.
Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:
1.Модифицировать лабораторный метод определения спонтанной активности MPO нейтрофилов периферической крови человека с целью проведения всех стадий анализа в растворе для спектофотометрической оценки результатов
2.Сравнить результаты, полученные с использованием модифицированного лабораторного метода с результатами, полученными с применением других методов оценки активности MPO
.Оценить модифицированный лабораторный метод с точки зрения основных требований, предъявляемых к лабораторным методам определения активности ферментов в клинических условиях
1. Обзор литературы
.1 Гранулярный состав и продукты секреции полиморфноядерных гранулоцитов
Нейтрофилы (Нф) - клетки крови миелоидного ряда, имеющие дольчатое ядро и нейтральную зернистость. Обладают высокой мобильностью, фагоцитарной активностью и бактерицидным потенциалом. Это основные эффекторные клетки на ранних этапах инфекционной агрессии. Для Нф характерны многодольчатое (сегментированное) ядро и диаметр 10-20 мкм [13].
Рисунок 1.1 - Структурная организация полиморфноядерного гранулоцита
Характерной чертой Нф является наличие цитоплазматических гранул (рисунок 1.1). Они были открыты P. Ehrich (1900 г.) после разработки техники фиксации и окраски клеток, позволившей по характеру ядра и гранул разделить лейкоциты на Нф, эозинофилы и базофилы. В Нф были выделены два типа гранул: азурофильные (или первичные) и специфические (или вторичные). Эти два типа гранул являются доминирующими. Кроме того в них имеются желатинозные (или третичные) гранулы и секреторные везикулы [28].
После выхода из кровотока Нф, находясь под воздействием стимулов, выделяют различные секреторные продукты, способные взаимодействовать как с микроорганизмами, так и с клетками тканей. Факторы секреции нейтрофилов преимущественно накапливаются в лизосомальных гранулах. Эти гранулы, согласно их морфологии и содержанию, делятся на азурофильные (первичные) и специфические (первичные и вторичные). Оба типа гранул (азурофильные и специфические) содержат протеолитические ферменты, активные по отношению компонентов интерстициальной ткани.
Азурофильные гранулы в отличие от специфических имеют сильный аффинитет к основному красителю азуру А. Они содержат матрикс, состоящий из отрицатель заряженных протеогликанов гепарина и хондроитина сульфата. В гранулах создается кислый pH. Матрикс прочно связывает катионные белки и пептиды, в силу чего последние находятся в неактивном состоянии. Существенной особенностью азурофильных гранул является наличие МPО. Характерная черта азурофильных гранул - отсутствие в них компонентов NADPH-оксидазной системы и интегрина CD11b/CD18 (CR3), которые имеются в специфических, желатинозных и с?/p>