Физиологическая роль миелопероксидазы в норме и при патологии
Курсовой проект - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие курсовые по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
µния пероксидазной активности с нижним пределом концентрации клеток в пробе, равным 100х103/мл.
Высокие показатели активности MPO, выраженные в единицах оптической плотности, напрямую коррелируют с концентрацией клеток в пробе. Определение активности MPO таким методом позволяет оценить спонтанную секрецию фермента, определяющего уровень биоцидности Нф, интактными клетками, без разрушения целостности клеток, без использования методов иммобилизации клеток на твердых носителях (увеличивая тем самым эффективную концентрацию полиморфноядерных гранулоцитов на этапе взаимодействия MPO c субстратом). Субстратная хромогенная смесь вносится в пробирки для микроанализа сразу после внесения туда экспериментальной пробы, значительно снижая также время постановки теста. Таким образом, эксперимент проводится в растворе и включает только одну стадию центрифугирования проб перед спектрофотометрической оценкой результатов.
Для сравнительной оценки методов определения спонтанной активности MPO нейтрофилов были использованы непараметрические методы статистической обработки данных: критерий Краскела-Уоллиса, Манна-Уитни, Колмогорова-Смирнова, Вальда-Вольфовица.
Анализ полученных результатов показал, что существуют достоверно значимые различия между уровнем пероксидазной активности Нф, выраженной в единицах оптической плотности, с применением модифицированного метода и в тесте с использованием клеток, иммобилизованных на гидрофобной поверхности (относительно концентрации клеток в пробе 300х103/мл и 400х103/мл) а также между уровнем активности фермента на основе модифицированного метода и в тесте с применением лизированных полиморфноядерных гранулоцитов (относительно концентрации клеток в пробе 100х103/мл и 400х103/мл (см. Приложение А, Б).
Уровень ферментативной активности Нф в растворе (модифицированный метод) значительно превышает таковую в отношении клеток, иммобилизованных на гидрофобной поверхности, и в меньшей степени в отношении клеток в тест-системе, использующей лизированные Нф. Разница между показателями активности MPO (относительно среднего значения ферментативной активности в каждой экспериментальной точке для всех доноров в исследуемой выборке) между методом определения данной активности в растворе на основе модифицированного метода и при помощи твердофазного носителя в экспериментальных пробах, содержащих 300х103 кл/мл - 24%, содержащих 400х103 кл/мл - 23 %.
Таким образом, модицированная нами лабораторная тест-система позволяет спектрофотометрически определять активность MPO, спонтанно либерируемой из азурофильных гранул в среду инкубации без нарушения целостности клетки; полностью исключает вероятность удаления части клеток до стадии активного взаимодействия MPO c субстратной хромогенной смесью, значительно увеличивая тем самым концентрацию секритируемой из азурофильных гранул MPO, характеризующая состветветственный повышенный уровень активности фермента, выраженной в единицах оптической плотности, на этапе детекции результатов.
Активность MPO, выявленная с помощью твердофазного метода, включает стадию иммобилизации на планшете и напрямую зивисит от адгезивных свойств Нф (тест-система предусматривает удаление несвязавшихся с твердофазным носителем клеток). И, в отдельных случаях, недостаточное содержание клеток на стадии теста-анализа, характеризующее взаимодействия полиморфноядерных гранулоцитов с субстратом, может значительно снизить показатели ферментативной активности.
Пероксидазная активность Нф, выявленная с помощью лизированных клеток, индуцированных дистилированной водой, также понижена по сравнению с мофицированным методом. Разница ферментативной активности между методами (относительно среднего значения активности фермента в каждой экспериментальной точке для всех доноров в исследуемой выборке) в отношении концентрации клеток, равной 100х103/мл, 400х103/мл, составляет 34% и 18% соответственно.
На этом основании можно предположить, что такая процентная разница, может быть связана с неполной реализацией данной тест-системы (лизису поддверглись не все клетки, находящиеся в дистилированной воде).
3.4 Сравнительная оценка модифицированной лабораторной тест-системы определения активности MPO Нф в растворе с Референтным методом
Определение диагностической чувствительности, диагностичекой специфичности, прогностической ценности положительного результата, прогностической ценности отрицательного результата (таблица 3.4)
Таблица 3.4 - Сравнительная оценка модифицированной лабораторной тест-системы определения активности миелопероксидазы в растворе с Референтным методом
Где a - число истинноположительных результатов тестов
b - число ложноположительных результатов тестов
с - число ложноотрицательных результатов тестов
d - число истинноотрицательных результатов тестов
Используя полученные данные, производим расчет операционных характеристик диагностического теста:
Диагностическая чувствительность (ДЧ) - количественный показатель способности теста распознавать диагностически значимые отклонения от нормы; доля лиц истинно положительных в отношении какого-либо заболевания.
Диагностическая специфичность (ДС) - количественный показатель способности теста распознавать результаты, находящихся в пределах нормы; доля лиц истинно отрицательных в отношении какого-либо заболевания.
Прогностическая ценность положительного ре?/p>