Получение и использование моноклональных антител в диагностике гриппа птиц 16. 00. 03 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
| Вид материала | Автореферат |
- Иммунный статус поросят при пневмонии, вызванной вирусом репродуктивно-респираторного, 398.05kb.
- Функциональная и рецепторная характеристика белков суперсемейства иммуноглобулинов, 1127.13kb.
- Эпизоотологический мониторинг и иммунопрофилактика классической чумы свиней и болезни, 755.76kb.
- Совершенствование системы ветеринарно-профилактических мероприятий и её влияние, 471.82kb.
- Темы рефератов для поступления в аспирантуру по научной специальности 06. 02. 02 ветеринарная, 14.27kb.
- Кудряшова жанна Алексеевна Теоретические и практические аспекты новых подходов профилактики, 392.23kb.
- Оптимизация системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого, 1086.61kb.
- Программа вступительного экзамена в аспирантуру по специальной дисциплине 06. 02., 270.79kb.
- Терапевтическая эффективность гинодиксина при эндометритах и маститах у коров, вызванных, 301.79kb.
- Резервуары лиссавирусов на территориях, стационарно неблагополучных по бешенству 16., 223.09kb.
УДК 616.98:578.832.1 На правах рукописи
АКАНОВА ЖАННАРА ЖУЛЬДАСОВНА
ПОЛУЧЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ В ДИАГНОСТИКЕ ГРИППА ПТИЦ
16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Республика Казахстан
Астана, 2010
Работа выполнена в Научно-исследовательском институте биотехнологии и на кафедре морфологии, микробиологии и биотехнологии, Казахского агротехнического университета им. С.Сейфуллина.
| Научные руководители: | доктор ветеринарных наук Булашев А.К. кандидат биологических наук Боровиков С.Н. |
| Официальные оппоненты: | доктор ветеринарных наук, Никитин Е.Б. |
| | кандидат ветеринарных наук, Блейм Т.Н. |
| Ведущая организация | Казахский национальный аграрный университет |
Защита состоится 14 декабря 2010 г. в 1400 часов на заседании диссертационного совета ОД 18.08.03 при Казахском агротехническом университете им. С.Сейфуллина по адресу: 010011, г. Астана, ул. А. Молдагуловой 29а, малый конференц-зал тел.: 8 (7172) 31-75-64, факс: 8 (7172) 31-75-68, www.agun.kz
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казахского агротехнического университета им. С.Сейфуллина.
Автореферат разослан «12» ноября 2010 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор ветеринарных наук Абдрахманов Т.Ж.
Введение
Актуальность проблемы. Грипп птиц - высококонтагиозное остропротекающее заболевание с поражением респираторного и желудочно-кишечного трактов, протекающее в виде сезонных энзоотий и эпизоотий домашних, синантропных и диких птиц, как правило, с высоким уровнем летальности, являющейся причиной эпидемий и пандемий людей. Эта болезнь по своей опасности относится к списку А (Бакулин В.А., 2006). Уникальным возбудителем гриппа животных является вирус гриппа рода А, который обладает способностью изменять свою антигенную структуру и патогенность в отношении разных биологических видов.
Эпизоотическую и эпидемиологическую обстановку по птичьему гриппу в мире можно оценить как неблагоприятную. Заболевание распространено повсеместно. В последнее время оно зарегистрировано более чем в 50 странах мира (Турции, Китае, Вьетнаме, Индонезии, Камбодже, Румынии, Украине, России, Казахстане и др.) (Смиян Ю.П., 1987, Беляев А.Л., Слепушкин А.Н., 2004).
Данное заболевание было зарегистрировано и в нашей республике, где с 22 июля по 17 августа 2005 года были зафиксированы 7 очагов вспышки гриппа среди домашних птиц в четырех областях (Павлодарской, Акмолинской, Карагандинской и Северо-Казахстанской), вызванные высокопатогенным штаммом вируса Н5N1. По всем неблагополучным пунктам было изъято и уничтожено 12 860 голов домашней птицы (Матвеева В.М., Белоусов В.Ю., 2008).
В связи с тем, что последние эпизоотии гриппа птиц привели к заболеванию людей с высоким процентом летальности, проблема своевременной лабораторной диагностики стала особенно актуальной для ветеринарных и противоэпидемических служб всего мира (Макаров В.В. и соавторы, 2005).
Одним из наиболее важных мероприятий, проводимых против эпизоотии гриппа, является своевременная и точная диагностика. Для диагностики применяется достаточное количество тестов, из которых выделяется иммуноферментный анализ (ИФА), обладающий рядом достоинств, позволяющих ему находить практическое применение. Однако недостатком метода является использование поликлональных антител, что снижает специфичность и является препятствием при внедрении в практику. Хорошей возможностью решения этой проблемы может служить использование одного из направлений биотехнологии – гибридомной техники получения моноклональных антител (МКА). Преимуществом МКА является строгая направленность к одной антигенной детерминанте, постоянный аффинитет и физико-химические характеристики, возможность наработки препарата в неограниченном количестве. Опыт использования этих чувствительных и высокоспецифичных тестов в диагностике вирусных и бактериальных инфекций показал, что их внедрение в практику значительно повышает эффективность работы.
Для разработки диагностической тест-системы с требуемыми показателями необходимо предварительное получение её компонентов – специфического антигена и моноклональных антител. Значимым этапом при разработке компонентов с высокой эффективностью и чувствительностью для тест-систем является отработка оптимальной схемы постановки реакции и изучение её параметров. Проведение указанных выше исследований и решение поставленных задач позволит отработать технологию получения компонентов тест-системы для диагностики высокопатогенного гриппа птиц (ВГП).
Цель и задачи исследований
Целью настоящей работы является получение моноклональных антител к антигенам вируса гриппа птиц типа А штамма H5N1 с целью разработки варианта иммуноферментного анализа для выявления специфических антител в сыворотке крови птиц.
В соответствие с целью были поставлены следующие задачи:
Отработать схему получения и очистки антигена вируса гриппа птиц.
- Получить и наработать in vitro и in vivo моноклональные антитела к диагностически ценным антигенам вируса гриппа птиц.
- Изучить основные иммунохимические свойства полученных моноклональных антител.
- Оптимизировать условия применения моноклональных антител в различных вариантах ИФА для выявления специфических антител в сыворотке крови птиц.
- Апробировать диагностическую ценность ИФА на основе моноклональных антител для серологической диагностики гриппа птиц.
Научная новизна
Впервые получен штамм гибридных культивированных клеток Mus. Мusculus L. – продуцент моноклональных антител к белковому антигену гриппа птиц типа А штамма H5N1 с молекулярной массой 36 кД.
Определены научные основы технологии изготовления иммуноферментной тест-системы на основе моноклональных антител для серологической диагностики ВГП.
Практическая значимость работы
Штамм гибридных культивируемых клеток – продуцент моноклональных антител к белковому антигену ВГП штамма H5N1 с авторским названием Mab/INF-1А9 (регистрационный номер C-RKM-0279) депонирован в ДГП «Республиканская коллекция микроорганизмов» (г. Астана) и предлагается для использования в разработке методов диагностики гриппа.
Для серологической диагностики высокопатогенного гриппа птиц предложены методические рекомендации по применению тест-системы ИФА на основе моноклональных антител.
Основные положения, выносимые на защиту:
Характеристика штаммов гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела к антигену ВГП типа А штамма H5N1.
- Иммунохимические свойства моноклональных антител, специфичных к детерминанте белкового антигена ВГП с молекулярной массой 36 кД.
- Иммуноферментная тест-система на основе моноклональных антител для серологической диагностики высокопатогенного гриппа птиц.
Апробация. Основные результаты работы доложены на Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию основания АО «Казахский агротехнический университет имени С. Сейфуллина» (г. Астана, 2007); на республиканской научно-теоретической конференции «Сейфуллинские чтения» (г. Астана, 2007, 2008, 2009).
Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в 4 научных работах и методической рекомендации «Тест-система ИФА на основе моноклональных антител для серологической диагностики высокопатогенного гриппа птиц».
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Список использованных источников включает 225 наименований, в т.ч. иностранных – 70. Материалы иллюстрированы 9 таблицами и 16 рисунками.