Иммунный статус поросят при пневмонии, вызванной вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Вид материала

Содержание

Бутенков Александр Иванович
Слободяник Валентина Сергеевна
Общая характеристика работы
Цели и задачи исследования
Для решения данной цели были поставлены следующие задачи
Научная новизна работы.
Теоретическая и практическая значимость.
Апробация работы.
Структура и объем работы.
Основные положения, выносимые на защиту
2. Собственные исследования
2.2. Структура инфекционной патологии свиней в Ростовской области
2.3. Манифестация инфекции, вызванной вирусом РРСС
2.4. Морфофункциональные изменения при пневмонии, вызванной вирусом РРСС
2.5. Результаты изучения иммунологического статуса у поросят с пневмонией, вызванной вирусом РРСС
2.6. Сравнительный анализ схем лечения свиней, больных пневмонией, вызванной вирусом РРСС
4. Практические предложения
Список опубликованных работ

Подобный материал:

На правах рукописи

Владыкин Максим Сергеевич

ИММУННЫЙ СТАТУС ПОРОСЯТ ПРИ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗВАННОЙ ВИРУСОМ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

г. Новочеркасск

2011

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель:	доктор ветеринарных наук Бутенков Александр Иванович
Официальные оппоненты:	доктор ветеринарных наук, доцент Хабузов Иван Павлович (Донской госагроуниверситет) доктор биологических наук, доцент Слободяник Валентина Сергеевна (Воронежский гостехуниверситет)
Ведущая организация:	ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Защита состоится 11 октября 2011 года в 12⁰⁰ часов на заседании диссертационного совета Д 006.106.01 при Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук.

346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии - 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0.

Автореферат разослан « » сентября 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, профессор А.М. Ермаков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Основной проблемой для свиноводства остаются респираторные заболевания поросят, несмотря на разработанные современные методы лечения и превентивные меры. Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) - контагиозное заболевание, характеризующееся нарушением функции воспроизводства у свиноматок, абортами, рождением мёртвых или слабых поросят с высокой смертностью. У молодых поросят и животных на откорме вирус вызывает поражение респираторного тракта с преимущественным развитием пневмоний.

По данным многочисленных авторов, изучающих РРСС, на сегодняшний день заболевание приобретает характер панзоотии. Болезнь регистрируется в большинстве стран мира с развитым промышленным свиноводством, наносит значительный экономический ущерб, состоящий как из прямых потерь - недополучения продуктов животноводства, связанных с прохолостами свиноматок, рождением мертвых, так и косвенных - затрат на проведение ветеринарно-санитарных и охранных мероприятий.

Болезнь была впервые зарегистрирована в Америке в 1987 г., в Европе в 1990 г, в настоящее время заболевание распространилось практически во всех странах мира. В России РРСС зарегистрировано официально в 1993 г., затем и в других странах СНГ. Серопозитивных к вирусу РРСС свиней выявляют в более чем 80% хозяйств, заболевание характеризуется широким варьированием клинических проявлений. По данным официальных отчетов ветеринарной службы Российской Федерации за период с 2000 по 2009 гг., на территории России в 73 % обследованных хозяйств у животных были обнаружены специфические к вирусу антитела, а в 25 % выделен вирус РРСС.

При заносе в свиноводческое хозяйство вирус РРСС вызывает у животных генерализованную инфекцию с виремией и распространением по всему организму. Болезнь протекает в острой, хронической и инаппарантной форме, с высокой степенью контагиозности, с потерей животных до 80-100%. На поздних сроках супоросности наблюдают аборты, преждевременные опоросы, рождение мертвых или живых поросят, погибающих в неонатальный период. Респираторные нарушения проявляется у животных на доращивании и в возрасте 14-20 недель, у новорожденных - респираторный синдром характеризуется одышкой, лихорадкой, потерей аппетита, снижением эффективности усвояемости кормов и замедлением роста.

В отдельных хозяйствах сохраняется длительное неблагополучие по данной инфекции, что связано с эпизоотологическими особенностями болезни, обусловленной ВРРСС - наличием длительной персистенции вируса, инаппарантной формы течения болезни.

На сегодняшний день в доступной нам литературе отсутствуют сведения о распространении и клиническом течении заболевания, вызванного ВРРСС, на территории Ростовской области. Нет сведений по клинико-морфологическому и иммунологическому статусу поросят при пневмонии, вызванной ВРРСС, что и послужило основанием для нашего исследования.

Цели и задачи исследования. Провести мониторинг распространения РРСС, выяснить региональные особенности динамики инфекционного процесса РРСС на основе изучения морфофункциональных изменений и иммунного статуса у поросят, больных пневмонией, вызванной ВРРСС.

Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:

Изучить распространение инфекции, вызванной вирусом РРСС, в Ростовской области.
Изучить морфофункциональные изменения у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
Изучить состояние гуморального иммунитета у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
Изучить состояние клеточного иммунитета у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
Подобрать эффективную схему лечения иммунного статуса при разной тяжести пневмонии у поросят, вызванной вирусом РРСС.

Научная новизна работы. Представлены новые данные по распространению РРСС в свиноводческих хозяйствах Ростовской области. Изучены клинико-эпизоотологические особенности проявления инфекции, вызванной вирусом РРСС. Впервые определено влияние РРСС на морфологические и биохимические показатели крови, гистологические структуры в легких в зависимости от тяжести течения при спонтанной инфекции. Автором впервые получены данные по иммунному статусу поросят при РРСС разной степени тяжести. Апробирована и предложена практике новая схема коррекции иммунного статуса у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС. Разработаны и апробированы схемы лечения животных для различных клинических форм заболевания.

Теоретическая и практическая значимость. Представленные результаты по распространению РРСС в свиноводческих хозяйствах могут быть использованы при разработке планов противоэпизоотических мероприятий. Полученные данные по иммунологическому статусу поросят при инфекции, вызванной ВРРСС, могут использоваться в учебном процессе по специальностям «Биология», «Ветеринария» и «Зоотехния», написании учебных пособий и практических рекомендаций. Рекомендована эффективная схема лечения животных при РРСС.

Диссертационное исследование проведено в соответствии с темой научных исследований Государственного научного учреждения Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии “Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных”, государственная регистрация №15070.3666026906.06.8.001.2.

Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии и патанатомиии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», в работе Ростовской областной ветеринарной лаборатории, в трех хозяйствах Ростовской области.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» в 2008-2010 гг.; на VII Международной конференции молодых ученых, посвященной 75-летию профессора А.В. Газданова, «Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки», г. Владикавказ, 2011 г.; на III Международной научно–практической конференции «Инновационные процессы в АПК», посвященной 50-летию образования аграрного факультета РУДН, Москва, 2011 г.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 10 научных работ, из них 4 – в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа изложена на 133 страницах компьютерного текста, содержит 23 таблицы, иллюстрирована 38 рисунками. Библиографический список включает 203 источника, в том числе 144 зарубежных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Динамика показателей морфологических и биохимических исследований крови, отражающая развитие пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, носит диагностический характер при определении тяжести течения заболевания.

2. Динамика иммунного статуса у свиней, инфицированных вирусом РРСС, отражает тяжесть течения инфекционного процесса, а изменения в легких носят типичный характер и могут развиться до развития клинических форм. Коррекция иммунного статуса улучшает курабельность РРСС.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы, методы и объемы исследований

Работу выполняли с 2008 по 2010 гг. в лаборатории функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, в Ростовской областной ветеринарной лаборатории, а также в хозяйствах Ростовской области.

При изучении распространения инфекционных и инвазионных заболеваний использовались отчетные данные ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория».

За период с 2008 по 2010 гг. в хозяйствах Ростовской области осмотру подвергнуто 6481 свиней. Из них у 22% выявлена инфекционная патология. За подопытными животными было установлено постоянное клиническое наблюдение, при этом учитывали процент заболеваемости, выздоровления и падежа. Ежедневно клинически обследовали поросят, а лабораторные исследования проводили при первичном и повторном осмотрах и при выздоровлении.

Для изучения эпизоотической ситуации по пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, было проведено обследование поголовья свиней в 10 хозяйствах Ростовской области: ООО "Урсдон" Усть-Донецкого района, ОАО «Боковский» Боковского района, ОНО ОПХ "Красноармейское" Орловского района, ООО "Донская Нива" Октябрьского района, ИП Васильченко Семикаракорского района, ЗАО «Русская свинина» Каменского и Миллеровского районов, ЗАО «Батайское» Азовского района, СПК «к-з Краснокутский» Боковского района, СПК «Русь» Сальского района, СПК «Родина» Матвеево-Курганского района.

Опыты по изучению морфологических, биохимических и иммунологических показателей у свиней, больных РРСС, были проведены на базе следующих хозяйств: ООО "Бусел" г. Новочеркасска, ООО "Донская Нива" Октябрьского района, ИП Васильченко Семикаракорского района Ростовской области (табл. 1).

Таблица 1

Объем проведенных исследований, голов

№ п./п.	Вид проведенного исследования		Всего проведено исследований
1	Исследовано животных клинически, голов		4674
2	Выявлено больных животных, голов:	Вирусные заболевания	644
3		В том числе РРСС	334
4		Бактериальные заболевания	472
5	Вскрыто павших поросят, голов		43
6	Проведено лабораторных исследований:	Гематологических	460
7		Иммунологических	360
8		Биохимических	460
9		ПЦР	1514

Диагностику пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, проводили в ГУРО «Областная ветеринарная лаборатория» с помощью тест-системы для выявления ДНК возбудителя в патологическом материале методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле, а также определяли наличие специфических антител к возбудителю пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, в сыворотке крови методом ИФА.

В целях определения тяжести и особенностей течения пневмонии, вызванной ВРРСС, для животных проводили морфологические и биохимические исследования крови в ГУРО «Областная ветеринарная лаборатория» и в лаборатории функциональной диагностики болезней с.-х. животных ГНУ СКЗНИВИ РАСХН.

Опыты по иммунологическому состоянию больных животных проводили на трех группах поросят по 40 голов в каждой. Первая группа, контрольная, включала клинически здоровых животных без признаков заболевания. Во второй группе были животные с первой стадией заболевания, у которых отмечался кашель, но был сохранен аппетит. В третья опытной группе включали поросят со второй стадией заболевания, характеризующейся кашлем, тяжелой одышкой, адинамией, анорексией. Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов проводили с помощью реакции Манчини; количества Т – лимфоцитов и их субпопуляций методом розеткообразования — Е-РОК. Тимусзависимые Т-лимфоциты имеют рецепторы для эритроцитов барана, которые выступают, таким образом, специфическим маркером для их распознавания (Е-РОК: Erythrocyte — розеткообразующие клетки). Выявляли 2 субпопуляции: теофиллинчувствительные Т-лимфоциты (Т-супрессоры), утратившие способность к розеткообразованию под влиянием обработки теофиллином, и теофиллинустойчивые Т-клетки (Т-хелперы) лимфоциты, сохранившие такую способность.

Статистическую обработку результатов исследований проводили по Н.А. Плохинскому (1970), Хитоси Кумэ (1990) с использованием компьютерной техники.

2.2. Структура инфекционной патологии свиней в Ростовской области

В хозяйствах региона ежегодно переболевают инфекционными болезнями от 35 до 98% поросят. Из общего количества павших поросят в 2008-2010 гг. гибель их от респираторных болезней составила 52,1%.

Мы провели ретроспективный анализ уровня заболеваемости свиней инфекционными болезнями в Ростовской области за период 2008-2010 годы.

Из заболеваний, причиной которых являются вирусы, следует назвать парвовирусную инфекцию, РРСС, цирковирусную инфекцию, трансмиссивный гастроэнтерит и ротавирусную инфекцию.

Нами изучен удельный вес РРСС в сравнительном аспекте и в динамике. Наиболее часто за исследуемый период регистрировали микоплазмоз – 22,8 %, цирковирусную инфекцию – 15.9%, РРСС и колибактериоз – по 12,5%, ПВИС – 10,1%, пастереллез – 8,5%. На долю остальных заболеваний приходилось в сумме 17,7% (рис. 1).

Пик заболеваемости свиней РРСС приходился на конец зимы – начало весны, что, по-видимому, связано со снижением иммунного статуса свиней на фоне гиповитамонозов, ухудшение качества комбикормов в зимне-весенний период. Такую динамику можно объяснить и резкими изменениями климатических факторов, которые приводят к манифестации инфекции при наличии возбудителя в организме.

Рис. 1. Нозологический профиль инфекционной патологии свиней в Ростовской области в 2008-2010 годах

В 2008 г. смертность от РРСС у подсвинков составила 2,53% при летальности 29,1%. В 2009 г. эти показатели существенно не изменились – смертность составила 2,62%, а летальность – 25,2%.

Таблица 2

Динамика заболеваемости, смертности и летальности при РРСС

Год	Восприимчивых животных, гол	Заболело, гол.	Пало, гол.	Заболева- емость, %	Смертность, %	Летальность, %
2008	1341	117	34	8,7	2,53	29,1%
2009	1256	131	33	10,4	2,62	25,2%
2010	1127	142	29	12,5	2,57	20,4%

Соотношение вирусных и бактериальных заболеваний свиней в Ростовской области с учетом сочетанных проявлений инфекционной патологии составляет приблизительно 1:1. По распространенности инфекций свиней РРСС занимает ведущее место. Кроме того, наиболее часто регистрируют микоплазмоз-22,8%, цирковирусную инфекцию – 15,9%, колибактериоз –12,5%, ПВИС – 10,1%, пастереллез – 8,5%. На долю остальных заболеваний приходится в сумме 17,7%. За период с 2008 по 2010 гг. заболеваемость свиней РРСС составила в среднем 10,5% .

Из 360 поросят, у которых возбудитель был выделен методом ПЦР, 131 голов (40,0%) были 0-8-недельного возраста, 100 голов – в возрасте 9-16 недель (30,5%), 86 голов – в возрасте 17-24 недель (26,3%). Пик заболеваемости приходился на возраст 8-18 недель.

2.3. Манифестация инфекции, вызванной вирусом РРСС

Репродуктивно-респираторный синдром - вирусное заболевание, манифестирующееся абортами, рождением мертвых поросят, преждевременными опоросами или задержанием опороса, поражением органов дыхания и окрашиванием кожи ушей и других органов.

В откормочных хозяйствах болезнь у подсвинков проявляется симптомами поражения органов дыхания, чаще болеет молодняк от 4 до 6 месяцев. У инфицированного поголовья вирус выделяется во внешнюю среду с калом, мочой, мокротой и выдыхаемым воздухом. Молодняк заражается трансплацентарным, алиментарным и аэрогенным путями. Способствуют возникновению болезни повышенная влажность и загазованность воздуха, сквозняки. У подсвинков заболевание протекает в виде бронхопневмоний - развивается катаральная, катарально-гнойная или крупозная пневмония с изменениями в интерстиции. У больных бронхопневмонией поросят отмечают лихорадку, угнетение, анорексию, истощение и глухой кашель. Респираторная форма ассоциированной инфекции характеризуется внезапным повышением температуры тела до 41-42°С, гиперемией слизистой оболочки носа, носоглотки и трахеи, угнетением, сухим болезненным кашлем, обильным серозно-слизистым истечением из носа (ринитом) и пенистым слюноотделением. По мере развития болезни слизь становится густой, в дыхательных путях образуются слизистые пробки и очаги гнойного воспаления, иногда некроза. При тяжелом течении болезни отмечают признаки асфиксии.

По степени тяжести пневмония, вызванная вирусом РРСС, у подопытных поросят протекала легко, средне, тяжело и крайне тяжело. Тяжесть течения заболевания мы определяли по совокупности шести неспецифических симптомов и степени их проявления, которые можно оценить визуально и по результатам специальных лабораторных исследований.

2.4. Морфофункциональные изменения при пневмонии, вызванной вирусом РРСС

Для изучения клинико-морфологической картины пневмонии, вызванной вирусом РРСС, рассмотрены 134 секционных наблюдений поросят 2-6 месяцев. Грипп, энзоотическая пневмония, цирковироз, пастереллез, гемофилез, микоплазмоз, бардотелиоз исключались методом ПЦР в областной ветеринарной лаборатории. На анализ отправляли кусочки легких. Исследования в период с 2008 по 2010 гг., базировались на сопоставлении клинической картины, морфологических, биохимических показателей крови и патологоанатомических вскрытий. У животных с субклиническим течением и отдельными участками поражения легких на гистологическом уровне не отмечали резко выраженных границ поражения легочной ткани. Участки поражения носили локальный аспект и характеризовались перибронхиальными и периваскулярными пролифератами альвеолярных клеток и макрофагов, которые располагались хорошо выраженными островками и были хорошо заметны при обзорной микроскопии.

При поражении отдельных долек легкого граница между пораженным и непораженным участком легкого была хорошо заметна, на пораженном участке отмечалась повышенная клеточность легочной ткани и заполнение альвеол экссудатом. При отсутствии экссудата в альвеолах отмечался отек межальвеолярных перегородок и стенки бронхиол, в острой стадии заболевания − ярко выраженная экссудация в просвет альвеол. В экссудате обнаруживалось большое количество эритроцитов и лейкоцитов, при окраске гематоксилин – эозином он имел красный цвет, при окраске трихром по Масону в нем выделялись синие нити фибрина. Такую картину мы интерпретировали как фибринозное воспаление, которое проходило все стадии. В просвете альвеол увеличивалось количество лейкоцитов, они постепенно замещали эритроциты, затем клеточность альвеол снижалась и в итоге рассасывался фибринозный экссудат и восстанавливалась воздушность легочной ткани. При массивном распространении процесса обнаруживались по всем полям легких участки на разной стадии фибринозного воспаления, при этом величина участков зависела от тяжести течения заболевания и локальности процесса. Так, при легком течении отмечались поражения только в краниальных долях легких, а участки воспаления ограничивались диаметром от 0,3 до 1 см.

Была выражена мозаичность поражения, при более тяжелом течении заболевания целые доли одновременно имели темно-красный цвет легкого, при гистологическом исследовании в альвеолах обнаруживалось много эритроцитов. Если поражалась большая часть легкого, животные, как правило, погибали, а стадия разрешения так и не наступала.

Таким образом, при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, у свиней в легких можно выделить несколько гистологических паттернов: при субклиническом течении возможна локальная пролиферация альвеолярного и бронхиального эпителия с формированием периваскулярных островков; при лобулярных поражениях пневмония носит интерстициальный характер с развитием участков фибринозного воспаления которые находятся на разных стадиях разрешения; при лобарных поражениях всегда развивается фибринозная пневмония, можно выделить практически все ее стадии.

У поросят с субклинической формой пневмонии, вызванной вирусом РРСС, были следующие показателей крови: к четырехмесячному возрасту - эритропения до 50,9×10¹²/л и лейкопения до 13,73,9×10⁹/л, до 5,80,1 ммоль/л; снижение уровня ионизированного калия. Уровень общего белка снизился и составил 57,62,1г/л; повысились СОЭ (9,14,1 мм/ч), количество альбуминов (24,81,9 г/л), уровень мочевины (8,61,3 ммоль/л), глюкозы (5,50,1 ммоль/л) и активность аланинаминотрансферазы (113,612,2Е/л), щелочной фосфатазы (103,914,1 Е/л), лактатдегидрогеназы (209,13,6 Е/л). У поросят с острым течением заболевания к четырехмесячному возрасту снизились: количество эритроцитов до 3,90,7 ×10¹²/л и лейкопении до 10,62 ×10⁹г/л, до 3,90,1 ммоль/л, и уровень ионизированного калия. Уровень общего белка снизился и составил 51,52,2 г/л; повысились СОЭ (14,53,8 мм/ч), количество альбуминов (19,32,2 г/л), уровень мочевины (11,51,8 ммоль/л), глюкозы (9,30,1 ммоль/л) и активность аланинаминотрансферазы (136,612,7 Е/л), щелочной фосфатазы (185,112,9 Е/л), лактатдегидрогеназы (214,93,8 Е/л).

2.5. Результаты изучения иммунологического статуса у поросят с пневмонией, вызванной вирусом РРСС

Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов у подопытных поросят в возрасте двух месяцев представлены в табл. 3.

Таблица 3

Показатели клеточного иммунитета периферической крови у подопытных поросят в 2-месячном возрасте

Группа, (n = 20)	Т - лимфоциты
	Т-лимфоциты		Т-хелперы,		Т-супрессоры,		Тх/Тс
	%	×10⁹/л	%	×10⁹/л	%	×10⁹/л	Тх/Тс
Контрольная	59,1 ± 0,6	3,5±0,1	30,1 ± 1	1,0± 0,1	19,4 ± 1,3	0,6±0,02	1,7
I опытная	49,2 ± 1,5*	1,2±0,02***	26,9 ± 2,1*	0,3±0,02***	16,8± 1,8	0,2±0,02***	1,7
II опытная	34,4± 1,5**	0,4±0,04***	25,1 ± 1,2**	0,08±0,01***	12,3 ± 1*	0,02±0,02***	2,2
III опытная	15,7 ± 2,1**	0,3±0,09***	21,3 ± 1,5**	0,04±0,06***	8,9 ± 1,2*	0,01±0,02***	2,6

* p<0,05,** p <0,01,*** p <0,001 - в сравнении с животными контрольной группы.

Результаты определения относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов у подопытных поросят представлены в табл. 4.

Таблица 4

Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят
в 2-месячном возрасте

Группа, (n = 20)	В-лимфоциты		Иммуноглобулины
Группа, (n = 20)	%	×10⁹/л	А, мг/мл	G, мг/мл	М, мг/мл
Контрольная	50,9 ± 2,3	24,1±0,1	4,7±0,1	16,9±0,2	1,7±0,03
I опытная	60,8 ± 0,4	15,7±0,07	3,5±0,05	16,1±0,2	1,6 ± 0,1
II опытная	75,6 ± 2,3**	13,3±0,1**	2,7±0,1 **	14,1±0,2	1,5± 0,04
III опытная	77,9 ± 2,7**	11,1±0,1**	2,6±0,2 **	12,5±0,3	1,5± 0,06

*p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы

Установлено, что у поросят контрольной группы число лейкоцитов периферической крови было 13,9×10⁹г/л, процентное количество Т-лимфоцитов составило 59,1, а абсолютное 3,5×10⁹/л; Т-хелперов и Т- супрессоров соответственно 1×10⁹/л и 0,6×10⁹/л.

У поросят первой опытной группы отмечалась лейкопения до 10,8×10⁹/л., сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 49,2, а абсолютного до 1,2×10⁹/л, что на 2,3×10⁹/л меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значение Т-хелперов и Т-супрессоров составило 26,9 и 0,3×10⁹/л, 16,8% и 0,2×10⁹/л соответственно, что на 0,7×10⁹/л и 0,5×10⁹/л меньше, чем в контрольной группе.

Во второй опытной группе лейкопения была до 7,1×10⁹/л и лимфопения до 19,4×10⁹/л. Лимфопения сопровождалась снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 34,4, а абсолютного - до 0,4×10⁹/л, что на 3,1×10⁹/л меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 25,1 и 0,1×10⁹/л; 12,3 и 0,03×10⁹/л соответственно, что на 0,9×10⁹/л и 0,6×10⁹/л меньше, чем в контрольной группе.

В третьей опытной группе лейкопения доходила до 6,5×10⁹/л и лимфопения до 15,6×10⁹/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 15,7, а абсолютного - до 0,3×10⁹/л, что на 3,1×10⁹/л меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 21,3 и 0,04×10⁹/л; 8,9 и 0,01×10⁹/л соответственно - на 0,9×10⁹/л и 0,6×10⁹/л меньше, чем в контрольной группе.

Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета у поросят в возрасте двух месяцев (табл. 4), выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у поросят контрольной группы составил 50,9%, а в абсолютном значении 24,1±0,1×10⁹/л, средний уровень иммуноглобулина А, G и М - соответственно 4,7; 16,9; 1,7.

У поросят первой опытной группы процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 60,8, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов снизилось до 15,7±0,1×10⁹/л, что на 35% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 3,5; 16,1; 1,6 мг/мл, то есть на 27,1; 5,1 и 3,6 % ниже, чем в контрольной группе.

Во второй опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 75,6, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 13,3±0,1×10⁹/л, что на 49,4% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,7; 14,1; 1,5 мг/мл, что на 45,8, 17,9 и 7,9 % ниже, чем в контрольной группе.

В третьей опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 77,9, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 11,1±0,1×10⁹/л, - на 59,6% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,6; 12,5; 1,5 мг/мл, что на 49, 28,8 и 9,4 % ниже, чем в контрольной группе.

Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов у подопытных поросят в возрасте трех месяцев представлены в табл. 5.

Установлено, что у поросят контрольной группы число лейкоцитов периферической крови было 15,1×10⁹/л, процентное количество Т-лимфоцитов - 60,7, абсолютное 4,5±0,1×10⁹/л, Т-хелперов и Т- супрессоров соответственно 33,2%, абсолютное 1,2±0,01×10⁹/л; 14%, абсолютное 0,5±0,02×10⁹/л.

Таблица 5

Показатели клеточного иммунитета периферической крови у подопытных поросят в возрасте трех месяцев

Группа, (n = 20)	Т - лимфоциты
	Т-лимфоциты		Т-хелперы,		Т-супрессоры,		Тх/Тс
	%	×10⁹/л	%	×10⁹/л	%	×10⁹/л	Тх/Тс
Контрольная	60,7 ± 0,6	4,2±0,04	33,2 ± 1	1,2±0,02	14 ± 0,7	0,5±0,03	2,6±0,01
I опытная	54,5 ± 1,6*	2,2±0,02	30,4 ± 1,9*	0,6±0,04	13,6± 2	0,3±0,03	2,5±0,01
II опытная	40± 1,7**	0,8±0,04	26,5 ± 1,3**	0,2±0,03	12,6± 0,8**	0,09±0,01	2,3±0,01
III опытная	33,3± 1,4**	0,3±0,04	21,3 ± 1,5**	0,07±0,06	10,6± 0,9**	0,03±0,01	2,2±0,01

* p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы.

У поросят первой опытной группы отмечали лейкопению до 12,7×10⁹/л и лимфопению до 38,6×10⁹/л, что сопровождалось снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 54,6, а абсолютного до 2,2±0,1×10⁹/л, то есть на 51,8% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супресоров составили 30,4%, абсолютное 0,6×10⁹/л и 13,6%, абсолютное 0,3×10⁹/л соответственно, что на 56,9% и 55% меньше, чем в контрольной группе.

Во второй опытной группе отмечалась лейкопения до 8,4×10⁹/л и лимфопения до 27,9×10⁹/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 40%, а абсолютного до 0,8±0,04×10⁹/л, что на 89,6% меньше в сравнении с контрольной группой. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 26,5%, 0,2±0,03×10⁹/л и 12,6%, 0,09±0,01×10⁹/л соответственно - на 94,6% и 91,7% меньше, чем в контрольной группе.

В третьей опытной группе лейкопения была до 5,8×10⁹/л и лимфопения до 21,8×10⁹/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 33,3%, а абсолютного до 0,3±0,04×10⁹/л - на 100,9% меньше в сравнении с контрольной группой. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 21,3%, 0,07±0,05×10⁹/л и 10,6%, 0,03±0,01×10⁹/л соответственно, что на 104,2 и 103,1% меньше, чем в контрольной группе.

Все эти изменения: снижение общего числа Т-лимфоцитов и отдельных популяций РОК и их соотношений (р-РОК и в-РОК) - по всей видимости, отражают нарушение лимфопоэза, перераспределение клеток и изменение регуляторного потенциала лимфоидных тканей при постоянном потреблении микотоксинов с кормами.

Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета в возрасте трех месяцев (табл. 6), выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у поросят контрольной группы составило 49,3%, а в абсолютном значении 24,6±0,1×10⁹/л, средний уровень иммуноглобулинов А, G и М соответственно 3,9; 16,4; 2,9 мг/мл.

Таблица 6

Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят в возрасте трех месяцев

Группа, (n = 20)	В-лимфоциты			Иммуноглобулины
Группа, (n = 20)	%	×10⁹/л	А, мг/мл		G, мг/мл	М, мг/мл
Контрольная	49,3± 2,2	24,6±0,05	3,9±0,6		16,4±0,3	2,9±0,1
I опытная	55,4±2	19,4±0,1	3,2±0,8		15,7±0,5	1,9 ± 0,1
II опытная	69,9±2,7**	17,7±0,1**	2,5±1,6**		14,9±0,8	1,4± 0,5**
III опытная	76,7±2,6**	15,2±0,1**	2,4±1,4**		14,8±0,6	1,3± 0,4**

* p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы.

У поросят первой опытной группы процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 55,4, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов снизилось до 19,4±0,1×10⁹/л, что на 23,2% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 3,2; 15,7; 1,9 мг/мл, что на 32,5; 5,2 и 33,5 % ниже показателей контрольной группы.

Во второй опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 69,9, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 17,7±0,1×10⁹/л, что на 31% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М был соответственно 2,5; 14,9; 1,4 мг/мл - на 38,1, 9,6 и 56,8 % ниже показателей контрольной группы.

В третьей опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 76,7, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 15,2±0,1×10⁹/л, что на 42,2% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,4; 14,8; 1,3 мг/мл, что на 30,6; 11,1 и 59,7 % ниже, чем в контрольной группе.

Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов у поросят с пневмонией, вызванной вирусом РРСС , в возрасте четырех месяцев представлены в табл. 7.

Установлено, что у поросят контрольной группы среднее число лейкоцитов в периферической крови было 17,7×10⁹/л, процентное количество Т-лимфоцитов составило 53,4, а абсолютное среднее 4,5×10⁹/л, Т-хелперов и Т- супрессоров соответственно 31,6%, 1,3×10⁹/л и 15,2%, 0,6×10⁹/л.

У поросят первой опытной группы отмечалась лейкопения до 13,7×10⁹/л и лимфопения до 38,2×10⁹/л, что сопровождалось снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 49,9, а среднего абсолютного - до 2,2×10⁹/л, то есть на 57,3% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров - 24,7; 0,5×10⁹/л и 13,5; 0,3×10⁹/л соответственно, что на 68,9 и 62,9% меньше, чем в контрольной группе.

Таблица 7

Показатели клеточного иммунитета периферической крови у подопытных поросят в возрасте четырех месяцев

Группа, (n = 20)	Т - лимфоциты
	Т-лимфоциты		Т-хелперы,		Т-супрессоры,		Тх/Тс
	%	×10⁹/л	%	×10⁹/л	%	×10⁹/л	Тх/Тс
Контрольная	53,4 ± 0,4	4,5±0,01	31,6 ± 0,9	1,3±0,02	15,2 ± 0,6	0,6±0,02	2,3±0,02
I опытная	49,9 ± 1,3	2,2±0,1	24,7 ± 1,9*	0,5±0,15	13,5± 1,6	0,3±0,03	2±0,01
II опытная	37,1 ± 1,4**	0,9±0,01	20,1 ± 1,5**	0,1±0,02	11,1 ± 0,8**	0,09±0,01	1,9±0,01
III опытная	34,7 ± 1,8**	0,5±0,02	18,2 ± 1,3**	0,07±0,01	10,5 ± 1**	0,04±0,02	1,9±0,02

* p<0,06,** p <0,02 - в сравнении с животными контрольной группы.

У поросят второй опытной группы - лейкопения до 10,6×10⁹/л и лимфопения до 28,3×10⁹/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 37,1, а абсолютного - до 0,9×10⁹/л, что на 88,6% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров - 20,1; 0,1×10⁹/л и 11,1; 0,09×10⁹/л соответственно, что на 96,9 и 94,3% меньше, чем в контрольной группе.

Таблица 8

Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят в возрасте четырех месяцев

Группа, (n = 20)	В-лимфоциты		Иммуноглобулины
Группа, (n = 20)	%	×10⁹/л	А, мг/мл	G, мг/мл	М, мг/мл
Контрольная	56,6 ± 2,5	29,7±0,2	4,1±0,9	12,6±0,2	2,1 ± 0,2
I опытная	16,1 ± 2,8	20,9±0,2	2,8±1,4	11,8±0,4	1,3 ± 0,4
II опытная	72,9 ± 3,2	18,7±0,03 **	2,4±1,6 **	11,5±0,5	1,6 ± 0,8
III опытная	75,4 ± 2,9	14,7±0,1 **	2,2±1,3 **	11,1±0,4	1,5 ± 0,3

p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы

В третьей опытной группе - лейкопения до 8,2×10⁹/л и лимфопения до 21,5×10⁹/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 34,7, а абсолютного - до 0,5×10⁹/л, то есть на 97,9% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров - 18,2; 0,07×10⁹/л и 10,5; 0,04×10⁹/л соответственно, что на 103,5 и 102,1% меньше, чем в контрольной группе.

Снижение общего числа Т-лимфоцитов и отдельных популяций РОК и их соотношения (р-РОК и в-РОК) отражает нарушение лимфопоэза при постоянном потреблении микотоксинов с кормом, перераспределение клеток и изменение регуляторного потенциала лимфоидных тканей.

Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета у поросят в возрасте четырех месяцев (табл. 8), выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у животных контрольной группы составило 56,6%, а среднее абсолютное значение 29,7×10⁹/л, уровень иммуноглобилина А, G и М составил соответственно 4,1; 12,6; 2,1 мг/мл.

У поросят первой опытной группы процентное количество В-лимфоцитов периферической крови снизилось до 16,1, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное число В-лимфоцитов снизилось до 20,9×10⁹/л, что на 32,7% меньше, чем в контрольной группе. Уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,8; 11,8; 1,3 мг/мл, то есть на 32,3; 6,7 и 42,9 % ниже показателей контрольной группы.

Во второй опытной группе процентное количество В-лимфоцитов в периферической крови увеличилось до 72,9, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное среднее значение В-лимфоцитов оказалось 18,7±0,03, что на 40,7% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М - соответственно 2,4; 11,5; 1,6 мг/мл - на 44,7; 10,5 и 28,6 % ниже, чем в контрольной группе.

В третьей опытной группе процентное количество В-лимфоцитов в периферической крови увеличилось до 75,4, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное среднее значение В-лимфоцитов оказалось 14,7±0,1, что на 40,7% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,2; 11,1; 1,5 мг/мл, то есть на 48,6; 13,4 и 33,2 % ниже показателей контрольной группы.

2.6. Сравнительный анализ схем лечения свиней, больных пневмонией, вызванной вирусом РРСС

Для сравнительной оценки эффективности различных схем лечения свиней при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, было создано 3 группы животных по 21 животному в каждой группе.

Первая группа - 21 животное в возрасте 4 мес., с диагнозом пневмония, вызванная вирусом РРСС средней тяжести.

Вторая группа - 21 животное в возрасте 4 мес., с диагнозом пневмония, вызванная вирусом РРСС с тяжелым течением заболевания.

Третья группа - 21 животное в возрасте 4 мес. с диагнозом пневмония, вызванная вирусом РРСС с очень тяжелым течением заболевания.

Каждая группа была разбита на три подгруппы: контрольную и две опытные.

Животных контрольных подгрупп всех групп лечили одинаково, по следующей схеме: драксин, в/м в дозе 1 мл (100 мг) на 40 кг массы животного однократно; ронколейкин, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд.

Животных первых опытных подгрупп каждой группы лечили по следующей схеме: драксин, в/м в дозе 1 мл (100 мг) на 40 кг массы животного однократно; ронколейкин, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд; интровит-е-селен, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно.

Животных вторых опытных подгрупп каждой группы лечили по следующей схеме: драксин, в/м в дозе 1 мл (100 мг) на 40 кг массы животного однократно; ронколейкин, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд; интровит-Е-селен, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетат натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.

Динамику заболевания отслеживали по клиническим и лабораторным признакам. При этом морфологические исследования крови проводили один раз в день, а биохимические один раз в 3 дня.

Наиболее эффективной схемой лечения поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, является сочетание драксина, в/м в дозе 1 мл на 40 кг массы животного однократно; ронколейкина, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд; интровита-Е-селена, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетата натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.

3. ВЫВОДЫ

1. Инфекционная патология свиней в Ростовской области представлена в основном бактериальными заболеваниями (48,1% от общей инфекционной патологии). По распространенности инфекций свиней РРСС занимает третье место (12,5%). Кроме того наиболее часто регистрируют микоплазмоз – 22,8%, цирковирусную инфекцию – 15,9%, РРСС и колибактериоз – по 12,5%, ПВИС – 10.1%, пастереллез – 8,5%. На долю остальных заболеваний 21,5%.

2. За период с 2008 по 2010 гг. заболеваемость свиней пневмонией, вызванной вирусом РРСС, составила в среднем 10,4% . За этот период заболеваемость свиней РРСС была относительно стабильна, варьируя от 8,7% в 2008 году до 12,5% в 2010 году.

3. Наряду с РРСС из 94 клинически больных поросят у 26 (30,43%) из них зарегистрирован пастереллез, у 15 – цирковирусная инфекция, 12 случаев (14,05%) приходилось на РРСС и 10 (11,7%) на пастереллез с репродуктивно-респираторным синдромом. У 8 (9,36%) поросят наряду с РРСС выявляли бордетеллиоз. Только в двух случаях (2,34%) РРСС был обнаружен без присутствия других возбудителей. Как выяснилось, наиболее часто респираторному РРСС сопутствуют пастереллез (42,1%), РРСС (35,1%) и ЦВИС (26,9%).

4. Из 370 поросят, у которых возбудитель выделен методом ПЦР, 135 голов (36,5%) были 10-15-недельного возраста, 100 голов – в возрасте 15-20 недель (27%), 88 голов – в возрасте 5-10 недель (26,1%). Пик заболеваемости приходился на возраст 8-18 недель.

5. У поросят тяжелым течением заболевания к трехмесячному возрасту отмечались снижение количества эритроцитов до 4,11,3 ×10¹²/л и лейкопения до 8,41,9×10⁹г/л и до 4,10,1 ммоль/л, а также уровень ионизированного калия. Уровень общего белка снизился и составил 54,54,1 г/л; повысились СОЭ (9,25,6 мм/ч), количество альбуминов (20,52,5 г/л), уровень мочевины (12,51,1 ммоль/л), глюкозы (10,10,1 ммоль/л) и активность аланинаминотрансферазы (140,1 Е/л), щелочной фосфатазы (184,17,1 Е/л), лактатдегидрогеназы (180,96,4 Е/л).

6. У поросят со средним течением заболевания выраженных изменений иммунного статуса не было. У поросят с РРСС тяжелой формы отмечалось снижение Т-хелперов с 33,2до 26,5; Т-супрессоров с14 до 12,6В-лимфоцитов с 49,3 до 69,9содержание иммуноглобулинов А и М снизилось с 3,9=0,6 и 2,9=0,1мг/мл до 2,5=1,6 и 1,4=0,5 мг/мл соответственно. У животных с очень тяжелым течением заболевания при РРСС снижение Т-хелперов до 21,3 Т-супрессоров до 10,6 В- лимфоцитов до 76,7 содержание иммуноглобулинов А и М уменьшилось до 2,4 и 1,3мг/мл соответственно относительно показателей у животных контрольной группы

7. Наиболее эффективной схемой лечения при пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, является сочетание драксина в/м в дозе 1 мл на 40 кг массы животного однократно; интровита-Е-селена, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетата натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.

Данная схема оказалась эффективной при лечении животных с хроническим течением пневмонии, вызванной вирусом РРСС.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для лечения свиней при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, рекомендовать сочетание драксина, в/м в дозе 1 мл на 40 кг массы животного однократно; интровит-Е-селена, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетат натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.
Полученные данные по морфофункциональным изменениям при РРСС лежат в основе классификации заболевания по тяжести течения, что дает основание строить прогноз эффективности проводимой терапии.
Результаты исследований могут быть использованы как справочный материал при составление учебных пособий и руководств по физиологии и патологии домашних животных для студентов по специальности «Ветеринария» и «Зоотехния».

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ: