Терапевтическая эффективность гинодиксина при эндометритах и маститах у коров, вызванных условно-патогенной микрофлорой 06. 02. 02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 06.

Вид материала

Автореферат диссертации

Содержание Распутина Ольга Викторовна Смертина Елена Юрьевна Общая характеристика работы Цель исследований. Для достижения указанной цели были поставлены задачи Staphylococcus, Enterobacter, Citrobacter Теоретическая и практическая значимость работы. Апробация работы. Публикации результатов исследований. Структура и объем диссертации. Внедрение результатов исследований. 2. Собственные исследования 2.2.1. Определение состава микрофлоры и ее свойств при послеродовом гнойно-катаральном Mucor, Aspergillus Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis. 2.2.2. Комплексная оценка гинодиксина 2.2.2.2. Изучение противовоспалительного действия гинодиксина 2.2.2.3. Терапевтическая эффективность гинодиксина при 2.2.2.4. Оценка терапевтической эффективности 2.2.2.5. Экономическая эффективность гинодиксина при послеродовом ... Полное содержание

Подобный материал:

• Иммунный статус поросят при пневмонии, вызванной вирусом репродуктивно-респираторного, 398.05kb.
• Функциональная и рецепторная характеристика белков суперсемейства иммуноглобулинов, 1127.13kb.
• Эпизоотологический мониторинг и иммунопрофилактика классической чумы свиней и болезни, 755.76kb.
• Кудряшова жанна Алексеевна Теоретические и практические аспекты новых подходов профилактики, 392.23kb.
• Совершенствование системы ветеринарно-профилактических мероприятий и её влияние, 471.82kb.
• Темы рефератов для поступления в аспирантуру по научной специальности 06. 02. 02 ветеринарная, 14.27kb.
• Оптимизация системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого, 1086.61kb.
• Программа вступительного экзамена в аспирантуру по специальной дисциплине 06. 02., 270.79kb.
• Получение и использование моноклональных антител в диагностике гриппа птиц 16. 00., 455.11kb.
• Резервуары лиссавирусов на территориях, стационарно неблагополучных по бешенству 16., 223.09kb.

На правах рукописи


СКОМАРОВА МАРИЯ НИКОЛАЕВНА


ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ

ГИНОДИКСИНА ПРИ ЭНДОМЕТРИТАХ

И МАСТИТАХ У КОРОВ, ВЫЗВАННЫХ

УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРОЙ


06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией


Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук


Новосибирск – 2010

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии и закрытом акционерном обществе «Росветфарм»


Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Распутина Ольга Викторовна


Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Шкиль Николай Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

старший научный сотрудник

Смертина Елена Юрьевна,


доктор биологических наук, профессор

Топурия Лариса Юрьевна


Ведущая организация: Институт ветеринарной медицины ФГОУ ВПО

«Омский государственный аграрный университет»


Защита состоится «15» июня 2010 г. в 13:00 ч. на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62


С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.


Автореферат разослан «___»__________2010 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета Стеблева Г.М.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В современных условиях ведения животноводства особую актуальность приобретают мероприятия, направленные на повышение продуктивности животных и качества сельскохозяйственной продукции.

Одной из главных причин, снижающей темпы воспроизводства и продуктивности молочного скота, являются заболевания репродуктивных органов и молочной железы, которые имеют широкое распространение и во многих случаях проявляются одновременно, либо одна сменяет другую.

Эти болезни связаны с огромными потерями молока за счет уменьшения молочной продуктивности, сокращения срока хозяйственного использования коров, недополучения приплода (П.Н. Никоноров, 1987; Т.Е. Григорьева, 1990; Э. Анюлис с соавт., 2009; Ю.Н. Алехин, 2009; А.Я. Батраков с соавт., 2009; И.С. Коба, А.Н. Турченко, 2009).

Многие авторы ведущую роль в этиологии указанных болезней отводят микроорганизмам (бактериям, грибам и вирусам). На микробный фактор приходится около 72–86% всех случаев мастита и эндометрита у коров. Из секрета пораженных четвертей вымени и маточно-влагалищного экссудата коров выделяют условно-патогенную микрофлору (стафилококки, стрептококки, эшерихии, иерсинии), которая вызывает заболевание либо наслаивается на патологический процесс, вызванный другими факторами (В.А. Париков, 1990; А.Г. Шахов, 2005).

Разработке эффективных методов, средств терапии и профилактики посвящены многие работы отечественных и зарубежных ученых. Несмотря на достижения в этой области, маститы и эндометриты распространены повсеместно, носят массовый характер, причиняют значительный экономический ущерб. Нередко применяемые фармакологические средства малоэффективны, схемы их применения трудоемки, неудобны для выполнения, либо дорогостоящие (А.В. Андреева, 2003).

В связи с этим, актуальными являются комплексные исследования, направленные на разработку и применение новых более эффективных лекарственных средств.

Цель исследований. Разработать рациональный способ терапии послеродового эндометрита и мастита, вызываемых условно-патогенной микрофлорой у коров, на основе применения комплексного лекарственного средства гинодиксин.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи:

1. Определить состав микрофлоры и ее свойства при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите.

2. Изучить противовоспалительное действие гинодиксина.

3. Оптимизировать способ применения гинодиксина при гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите и дать оценку его терапевтической и экономической эффективности.

Научная новизна работы. Разработано лекарственное средство гинодиксин и способ его применения (патент РФ № 2287329 от 20.11.06 г.).

Определена чувствительность микрофлоры, участвующей в акушерско-гинекологических патологиях у коров, к применяемым антибактериальным препаратам и комплексному лекарственному средству гинодиксин.

Выявлено преимущественное значение при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите бактерий рода: Staphylococcus, Enterobacter, Citrobacter, при серозном мастите - Staphylococcus, Streptococcus.

Впервые раскрыт механизм противовоспалительного действия гинодиксина, основанный на его противоотечном эффекте, активизации репаративных процессов и антиоксидантного статуса организма, снижения АМК-генерирующей активности нейтрофилов крови и повышения их реактивности.

Определена терапевтическая и экономическая эффективность гинодиксина при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите у коров.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основе результатов научных исследований предложен новый способ терапии послеродового эндометрита у коров, позволяющий повысить эффективность лечения больных животных за счет механизма противовоспалительного действия гинодиксина, обусловленного активацией реактивности нейтрофилов, снижением их способности к синтезу активных метаболитов кислорода, антиоксиданным эффектом, а также стимуляцией репаративных процессов.

По результатам исследований подготовлены две методические рекомендации «Применение ветеринарных препаратов на основе синтетического аналога фитогормона для профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных» (прот. №3, 2006 г.) и «Фармакологические свойства и применение лекарственного средства гинодиксин в ветеринарии» (прот. № 3, 2009 г.), утвержденные подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на: Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклеидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005); VI Сибиркой ветеринарной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2006); Международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006); Международной научно-практической конференции «Современные технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции» (Новосибирск, 2009); II Сибирском ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2010).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ («Ветеринария», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки»).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 20 рисунками. Список литературы включает 203 источника, в т.ч. 50 зарубежных авторов.

Внедрение результатов исследований. Разработано и внедрено в производство лекарственное средство гинодиксин, ежегодное производство которого составляет 1,5 – 2,0 тыс. л, достаточного для обработки 4,0 тыс. гол.

Разработанное лекарственное средство гинодиксин зарегистрировано в России (ПВР-2-8.6/01985 от 09.07.07 г.).

Производство препарата осуществляется в ЗАО «Росветфарм» (р.п. Краснообск, Новосибирской области).

Основные положения, выносимые на защиту:

- данные по изучению состава микрофлоры при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите у коров;

- результаты изучения противовоспалительного действия лекарственного средства гинодиксин;

- обоснование терапевтической и экономической эффективности гинодиксина при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите.


2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований


Работа выполнена в лаборатории по разработке новых методов лечения животных Государственного научного учреждения Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока и в ЗАО «Росветфарм», в 2004 – 2009 гг. Экспериментальные и клинические исследования по теме диссертации проводились в НИИ клинической иммунологии СО РАМН и в сельскохозяйственных предприятиях Новосибирской и Кемеровской областей.

При мониторинге акушерско-гинекологических патологий у коров анализировали отчетную документацию Управления ветеринарии Новосибирской области.

Для определения состава условно-патогенной микрофлоры, полевые изоляты, выделенные от больных коров, дифференцировали путем посева на элективные среды и с помощью «Определителя бактерий Берджи» (2001). Дифференциацию микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae проводили с использованием «Систем индикаторных бумажных для идентификации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae» (производство ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, г. Нижний Новгород) с последующей их дифференциацией в компьютерной экспертной системе «Биохимия микроорганизмов 2.0».

Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам и гинодиксину проводили методом диффузии в агар с применение дисков в соответствии с «Методическими указаниями по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных» (утвержд. ГУВ МСХ СССР 30.10.1971 г.).

Антиоксидантную активность препарата изучали на базе НИИ клинической иммунологии совместно с Распутиной О.В., Цырендоржиевым Д.Д. Оценку прооксидантной (ПОА) и антикосидантной активности (АОА) сыворотки крови больных эндометритом коров проводили до лечения (n=8) и после окончания курса терапии (n=6). Для контроля использовали сыворотку крови здоровых коров (n=8). Исследования проводили с помощью биохемилюминометра «СКИФ-0306М» (НПО «Наука», Красноярск).

Терапевтическую эффективность препарата при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите у коров, вызываемых условно-патогенной микрофлорой, изучали на базе ГНУ ИЭВСиДВ и в хозяйствах Новосибирской и Кемеровской областей.

Острую токсичность гинодиксина определяли руководствуясь «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (Л.П. Маланин, А.П. Морозов, А.С. Селиванова, 1988), «Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических средств» (Е.В. Арзамасцев с соавт., 1997) и «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Р.У. Хабриев с соавт., 2005).

Для проведения исследований по изучению острой токсичности было использовано 100 белых нелинейных мышей с массой тела 19-21 г и 24 белых беспородных крыс с массой тела 120-140 г.

Эксперименты по оценке противовоспалительной активности гинодиксина проведены на 45 крысах-самцах линии Вистар массой тела 150-180 г. Экспериментальное экссудативное воспаление (ЭЭВ) индуцировали введением в субплантарный (подошвенный) апоневроз правой задней лапки крыс 0,05 мл полного адъюванта Фрейнда («Sigma», США). Через 1 ч после введения адъюванта Фрейнда подкожно вводили гинодиксин.

В качестве критериев, характеризующих тяжесть ЭЭВ, были выбраны следующие показатели: масса тела, размер правых задних конечностей, общая температура, а также количество и состав лейкоцитов в периферической крови и в экссудате из зоны поражения. Дополнительно оценивали суммарный хемилюминесцентный ответ (ХЛ-ответ) клеток крови (нейтрофилов) и их реактивность, про- и антиоксидантную активность сыворотки крови.

Результаты полученных исследований обрабатывали с помощью методов математической статистики (Г.Ф. Лакин, 1990), а также с помощью лицензированных пакетов прикладных программ «Statistica 5.0» и «Microsoft Exel 7.0» на PC Pentium-IV.

Производственные испытания лечебной эффективности изучаемого препарата проведены в хозяйствах Новосибирской и Кемеровской областей на 654 коровах (ГУСП ОПХ «Элитное», ЗАО «Совхоз Морской», ООО «Моховское»).

Экономическую эффективность лечебных мероприятий определяли согласно утвержденной МСХ и П РФ в 21.02.97 г. «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий».

Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю - доктору ветеринарных наук О.В. Распутиной, научному консультанту - доктору ветеринарных наук, профессору Н.А. Шкилю, доктору медицинских наук, профессору НИИ клинической иммунологии СО РАМН Д.Д. Цырендоржиеву руководству ЗАО «Росветфарм» в лице М.Н. Дольниковой и Н.А. Дровосекова.


2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Определение состава микрофлоры

и ее свойств при послеродовом гнойно-катаральном

эндометрите и серозном мастите у коров

Анализ распространения акушерско-гинекологических патологий у коров проводили на примере хозяйств Новосибирского района с использованием данных ветеринарной отчетности в период 1997 – 2007 гг. включительно.

При анализе данных было установлено, что наряду с сокращением количества сельскохозяйственных предприятий неуклонно сокращается поголовье коров. За анализируемый период оно уменьшилось на 35,7%.

В структуре акушерско-гинекологических патологий у коров преобладают мастит (6,44 – 38,07%), эндометрит (2,8 – 14,99%), задержание последа (2,8 – 7,76%).

Результаты анализа динамики акушерско-гинекологических патологий указывают на возрастание количества больных маститами – на 6,46%, увеличение числа мертворожденных – на 0,11%. Пик заболеваемости маститами приходится на 2005 г. (количество больных по сравнению с 1997 г. увеличилось на 26,74%).

Для определения состава условно-патогенной микрофлоры нами был исследован биологический материал: маточно-влагалищные выделения и секрет пораженных долей вымени коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и серозным маститом.

При бактериологическом исследовании маточно-влагалищных выделений от 52 коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, выделена условно-патогенная микрофлора. В 48 пробах (92,3%) изолированы ассоциации с преобладанием бактерий рода Staphylococcus, Enterobacter, Citrobacter. Патогенность выделенных ассоциаций проявлялась в 9,61%. В 4 пробах (7,69%) изолированы монокультуры рода Salmonella и Pasteurella.

При микологическом исследовании 52 проб влагалищной слизи в 6 пробах (11,54%) были изолированы Mucor, Aspergillus, в 4 пробах (7,69%) - Penicillium.

Чувствительность выделенной микрофлоры исследовали к 23 антибактериальным средствам.

Антимикробные препараты (АМП), по степени чувствительности к ним микрофлоры, были разделены на 3 группы. К первой группе отнесли АМП с высокой степенью активности к выделенной микрофлоре (зона задержки более 25 мм): энрофлокс, гинодиксин, тилан. Ко второй группе – АМП со средней степенью чувствительности (зона задержки 15 – 25 мм): гентамицин, амикацин, карбенициллин, цефазолин, окситетрациклин, левомицетин, фурадонин, рифампицин. К третьей группе – АМП, обладающие слабой активностью по отношению к выделенной микрофлоре (зона задержки до 15 мм): ампициллин, неомицин, доксициклин, мономицин, стрептомицин, канамицин, тетрациклин бензилпенициллин, эритромицин, линкомицин. Следует указать отсутствие чувствительности микрофлоры к оксациллину, полимиксину.

При бактериологическом исследовании секрета долей вымени от 42 коров, выделены условно-патогенные микроорганизмы, относящиеся к 7 родам. Среди выделенных культур в пробах преобладают изоляты, относящиеся к классу Bacilli: Staphylococcus, Streptococcus.

Условно-патогенная микрофлора выделялась преимущественно в виде ассоциаций: из 42 проб в 34 (80,95%) выделены ассоциации микроорганизмов. Патогенность выделенных ассоциаций составила 14,28%.

В 8 пробах (19,04%) выделены монокультуры: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis.

Оценка чувствительности изолированной микрофлоры была проведена в отношении восьми антибактериальных средств, в том числе: мастисана-А, мастицида, а также разработанного нами гинодиксина.

Разная степень чувствительности микрофлоры позволила, так же как и в первом случае, выделить 3 группы антимикробных препаратов (АМП). Первая группа – АМП, с высокой степенью активности к выделенной микрофлоре (зона задержки более 25 мм): гинодиксин. Вторая группа – АМП, со средней степенью чувствительности (зона задержки 15 – 25 мм): мастисан-А, гентамицин. Третья группа – АМП, обладающие слабой активностью по отношению к выделенной микрофлоре (зона задержки до 15 мм): тетрациклин, неомицин, мастицид, стрептомицин, эритромицин.

Таким образом, результаты анализа ветеринарной отчетности указывают на сокращение количества сельскохозяйственных предприятий и маточного поголовья коров в хозяйствах Новосибирского района. Несмотря на это, наибольшее распространение у коров имеют такие патологии, как мастит, эндометрит, задержание последа.

При послеродовом эндометрите и мастите условно-патогенная микрофлора преимущественно выявляется в виде ассоциаций с преобладанием при эндометритах бактерий, относящихся к родам Staphylococcus, Enterobacter, Citrobacter, при маститах - Staphylococcus, Streptococcus. Выделение ассоциаций и монокультур условно-патогенной микрофлоры, обладающей в 12% случаев патогенностью, указывает на ее роль в развитии эндометритов и маститов у коров.

Чувствительность микрофлоры характеризовалась высокой степенью вариабельности. В связи с этим, при конструировании лекарственных средств и проведении лечебных мероприятий следует отдавать предпочтение антимикробным препаратам в соответствии с чувствительностью к ним микрофлоры.

2.2.2. Комплексная оценка гинодиксина

2.2.2.1. Общая характеристика препарата


Гинодиксин представляет собой стерильный, прозрачный раствор желто-зеленого цвета. В его состав входят: 1,4-Ди-N-окись 2,3-бис (оксиметил) хиноксалин; трис (2-оксиэтил) аммония орто-крезоксиацетат; органические и неорганические растворители.

Результаты изучения острой токсичности гинодиксина, показали, что внутрибрюшинное введение белым мышам в максимально допустимой дозе для данного способа введения (1,0 мл/гол. – 50 мл/кг) приводит к гибели 60% экспериментальных животных. У оставшихся в живых мышей регистрировали нарушение двигательной и тактильной чувствительности, которые через 3,5 – 8 часов после введения гинодиксина исчезали, клиническое состояние животных приходило в норму.

При внутрижелудочном введении препарата в дозе 1,0 мл/гол. – 50 мл/кг летальность достигла самого высокого значения для данного способа введения – 40%.

Таким образом, при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении белым мышам 100% летальность отсутствует. ЛД₅₀ при внутрибрюшинном введении составила 47,5 мл/кг (по АДВ – 475,0 мг/кг).

Установлено, что белые крысы, при исследуемых способах введения, к препарату не чувствительны. В соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» гинодиксин отнесен к малотоксичным соединениям III класса опасности.

Антиоксидантная активность препарата изучена на 22 коровах в возрасте 3 – 5 лет черно-пестрой породы, на базе ГУСП ОПХ «Элитное» Новосибирского района.

Для оценки влияния гинодиксина на атиоксидантную активность сыворотки крови больных гнойно-катаральным эндометритом коров, его вводили 4 – 8 раз в дозе 100 мл с интервалом 24 часа.

При исследовании сыворотки крови установлено, что у коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, возрастает прооксидантная активность и снижается антиоксидантная. При этом, прооксидантная активность может достигать 1501,90±346,51 отн.ед. (Р ≤ 0,05), а антиоксидантная - 11,63±1,92 отн.ед. (Р ≤ 0,05).

После введения гинодиксина прооксидантная активность сыворотки крови снижается (до 486,25±184,02 отн.ед.), а антиоксидантная повышается (до 25,41±3,42 отн.ед., Р ≤ 0,05) и становится соизмеримой с показателями у здоровых коров. В соответствии с этим, коэффициент соотношения (Кс) ПОА/АОА снижается в 6,6 раза (от 129,14±30,46 до 19,13±3,09 отн.ед., Р ≤ 0,05) по сравнению с таковым у больных животных.

Таким образом, лекарственное средство гинодиксин относится к малотоксичным веществам, обладает антиоксидантным действием.


2.2.2.2. Изучение противовоспалительного действия гинодиксина


Опыты проводили на крысах линии Вистар, которые были разделены на 3 группы: I-я группа (контрольная) – 5 крыс, которым в субплантарный (подошвенный) апоневроз правой задней лапки вводили по 0,05 мл физиологического раствора; II-я группа – 20 крыс с индуцированным экспериментальным экссудативным воспалением (ЭЭВ); III-я группа – 20 крыс с индуцированным ЭЭВ, которым вводили гинодиксин.

Через 1 сутки после введения адъюванта Фрейнда развивалось экссудативное воспаление правой задней лапки, размер которой был увеличен в 3,6 раза по сравнению с таковыми у животных контрольной группы (1,3±0,04 см³) и в среднем составил 4,7±0,15 см³. На последующих сроках исследования (3, 7 и 14 сутки) размер правой лапки крыс с экссудативным воспалением постепенно снижался до 3,9±0,24 см³; 3,4±0,12 см³ и 2,5±0,16 см³, соответственно.

У крыс III группы после введения гинодиксина размер правой лапки снижался быстрее, чем у крыс II группы, хотя после однократной его инъекции данный показатель практически не менялся (1 сут). На 3, 7 и 14 сутки различия в изменениях размера правой лапки между крысами II и III групп были более заметными. Так, на 3 сутки после введения гинодиксина данный показатель составил 3,4±0,11 см³, а к 14 суткам снизился до 1,6±0,13 см³.

Таким образом, на 14 сутки исследования отек правой лапки крыс с ЭЭВ снижался на 46,8%, а на фоне гинодиксина – на 65,2% (Р ≤ 0,05).

Температуры тела у крыс контрольной группы в среднем составила 37,8±0,08С. Через 1 сутки после индукции ЭЭВ температура у крыс II-й группы возросла до 39,6±0,29С. На 3 сутки развития ЭЭВ зафиксированы ее максимально высокие значения - 40,9±0,24С. Высокие значения температуры у крыс этой группы сохранялись до конца срока исследования. Так, на 7 и 14 сутки исследования средние значения температуры у крыс с ЭЭВ соответственно составили 39,0±0,17С и 38,9±0,19С.

Введение гинодиксина крысам с ЭЭВ (III группа) приводило к более заметному снижению температуры. Однако, повышенный уровень температуры, но менее выраженный, чем у крыс II-й группы, сохранялся до 14 суток исследования. Так, среднее значение температуры в динамике исследования (1, 3, 7 и 14 сутки) после введения гинодиксина соответственно составило 39,2±0,15С; 39,8±0,23С; 38,4±0,15С и 38,2±0,16С, соответственно.

Масса тела крыс контрольной группы до начала эксперимента в среднем составляла 169,4±1,76 г, а в день убоя (14 сут.) – 188,2±1,89 г, что на 11,1% выше исходного состояния. В то же время, в динамике развития ЭЭВ (II группа) наблюдается неуклонное снижение массы тела крыс. Так, максимальное снижение массы тела крыс данной группы наблюдается на 7 сутки исследования (-17,4±0,61% относительно исходного веса до начала опытов), а на 14 сутки – характер снижения веса животных практически остается на том же уровне (-10,8±0,75%).

Введение гинодиксина препятствует резкому снижению массы тела у крыс с ЭЭВ. Так, на 7 сутки исследования снижение массы тела в этой группе животных относительно исходного веса составило 9,1±0,8%, а на 14 сутки – 4,2±0,9%.

Одним из важных показателей активности воспалительного процесса является изменение клеточного состава периферической крови, а также экссудата в зоне воспаления.

Результаты проведенного нами исследования показали, что общее количество лейкоцитов в периферической крови крыс на всем протяжении наблюдения после индукции ЭЭВ остается на достоверно высоком уровне. В то же время, введение гинодиксина приводит к заметному снижению их числа в крови уже к 3-м суткам наблюдения и затем неуклонно происходит уменьшение (рис. 1).





Рисунок 1 – Динамика общего количества лейкоцитов в периферической крови у крыс различных групп


Снижение общего количества лейкоцитов под действием тестируемого препарата происходило в результате снижения численности нейтрофильных гранулоцитов на фоне сохранения количества моноцитов к концу срока наблюдения (рис. 2, 3).





Рисунок 2 – Динамика общего количества нейтрофилов в периферической крови крыс различных групп




Рисунок 3 – Динамика общего количества моноцитов в периферической крови крыс различных групп


Анализ клеточного состава экссудата из пораженной конечности выявил подобные изменения, как и в периферической крови.

Таким образом, при введении гинодиксина происходит более выраженное снижение количества нейтрофилов на фоне моноцитоза, как в периферической крови, так и в экссудате из зоны ЭЭВ конечности крыс.

Исследование функционального состояния нейтрофилов периферической крови крыс с ЭЭВ правой задней конечности показало, что величины их суммарного хемилюминисцентного ответа (I_sum ХЛ-ответ) на всех сроках наблюдения достоверно превышали контрольные значения (табл. 1).

Введение гинодиксина приводило, за исключением третьих суток наблюдения, к снижению спонтанного I_sum ХЛ ответа нейтрофилов крыс с ЭЭВ. Однако к концу срока наблюдения данный показатель оставался более высоким, чем у крыс контрольной группы. Кроме того, при введении гинодиксина ХЛ ответ нейтрофилов крови на дополнительный стимул (ЗГ-I_sum) был выше, чем у крыс с ЭЭВ (II группа) (табл. 1).

Анализ результатов расчета индекса стимуляции (ИС), отражающего реактивность нейтрофилов, показал, что на 1, 3 и 7 сутки наблюдения у крыс обеих групп данный показатель был ниже, чем у крыс контрольной группы.

Так, у крыс контрольной группы значение ИС в среднем составило 2±0,06 отн.ед. У крыс с ЭЭВ (II группа) на всех сроках исследования данный показатель составил 1,1±0,01; 1,2±0,05; 1,4±0,05 и 1,3±0,06 отн.ед.

После введения гинодиксина реактивность нейтрофилов крови крыс (III группа) возрастала, и в эти же сроки составила 1,6±0,12; 1,6±0,06;, 1,8±0,12 и 2,1±0,09 отн.ед.

Таким образом, к 14 суткам наблюдения после введения гинодиксина реактивность нейтрофилов крови практически не отличалась от показателей в контрольной группе.


Таблица 1 – Показатели суммарного спонтанного и ЗГ-индуцированного ХЛ ответа нейтрофилов крови крыс различных групп

Период исследования (сут)	Суммарный ХЛ-ответ Нф (х105/103 Нф/20 мин)
	спонтанный Isum	ЗГ-индуцированный Isum
1	7,4±0,48 * Х	12,0±0,79 * Х
	14,2±0,70 Х	16,2±0,71 Х
3	7,0±0,34* Х	10,8±0,49* Х
	5,1±0,53 Х	6,3±0,5 Х
7	5,3±0,38 Х	9,1±0,16 Х
	6,3±0,38 Х	8,6±0,24
14	4,2±0,20* Х	8,8±0,36
	6,9±0,47 Х	8,6±0,45
Контроль	3,8±0,17	7,4±0,26

Примечание: в числителе – данные крыс III-й группы, в знаменателе – II-й группы;

^Х - достоверные различия по сравнению с контролем, при Р ≤ 0,05;

* - по сравнению с данными у крыс II-й группы, при Р ≤ 0,05


С целью установления степени нарушения баланса «оксидант-антиоксидант» в организме экспериментальных животных изучалось состояние прооксидантной (ПОА) и антиоксидантной (АОА) активности сыворотки крови.

Результаты исследования показали, что ПОА сыворотки крови крыс с ЭЭВ, а также на фоне гинодиксина повышается в течение первых трех суток воспаления на 50% и 44,4% соответственно, затем, постепенно снижаясь, приближается к контрольным значениям. АОА снижается в течение первых трех суток на 28% у крыс с ЭЭВ и на 9% на фоне гинодиксина. К концу исследования АОА повышается у крыс с ЭЭВ на 40%, с гинодиксином на 54% по сравнению с исходными данными и отличается от контрольных значений соответственно на 1,9 отн.ед (21,3%) и 0,4 отн.ед. (4,7%). В соответствии с этим уменьшается и значение коэффициента соотношения (Кс) ПОА/АОА, что говорит о преобладании антиоксидантных процессов (табл. 2).

Таким образом, исследованиями установлено, что у крыс с ЭЭВ антиоксидантный статус снижается, начиная с первых суток индукции воспаления. Максимальное снижение АОА сыворотки крови у крыс с ЭЭВ (II группа) наблюдается на 3 сутки после индукции воспаления, затем постепенно возрастает, но к 14 суткам она полностью не восстанавливается. Введение гинодиксина способствует восстановлению антиоксидантного статуса организма крыс к концу срока исследования.

Анализ расчета Кс сыворотки крови показал, что уже с первых суток после индукции ЭЭВ превалирует активность процессов свободно-радикального окисления на фоне снижения антиоксидантного статуса организма крыс, которое, вероятно, связано с усиленным потреблением антиоксидантов. Во II-й группе высокое значение Кс сохраняется до конца срока исследования (14 сут.). Введение гинодиксина крысам с ЭЭВ способствует снижению и нормализации к 14 суткам баланса в системе «оксидант-антиоксидант».

Таблица 2 – Показатели про- и антиоксидантной активности сыворотки крови крыс различных групп

Период исследования (сут)	ПОА, отн.ед.	АОА, отн.ед.	Кс
1	0,9 ± 0,06 Х	5,5 ± 0,36 Х	17,1 ± 1,29 Х
	1,0 ± 0,03 Х	5,0 ± 0,14 Х	19,4 ± 0,99 Х
3	1,3 ± 0,06 Х	5,0 ± 0,19 Х *	25,6 ± 1,89 Х *
	1,5 ± 0,07 Х	3,6 ± 0,16 Х	41,5 ± 0,30 Х
7	0,9 ± 0,06 Х	7,1 ± 0,28 Х *	12,7 ± 0,87 Х
	0,8 ± 0,05 Х	5,8 ± 0,30 Х	13,4 ± 0,68 Х
14	0,6 ± 0,03	8,5 ± 0,33*	6,6 ± 0,20*
	0,7 ± 0,04 Х	7,0 ± 0,25 Х	10,4 ± 0,94 Х
Контроль	0,5 ± 0,03	8,9 ± 0,32	5,1 ± 0,19

Примечание: в числителе – данные крыс III-й группы, в знаменателе – II-й группы;

^Х - достоверные различия по сравнению с контролем, при Р ≤ 0,05;

* - по сравнению с данными у крыс II-й группы, при Р ≤ 0,05


Таким образом, гинодиксин обладает противовоспалительным действием, механизм которого обусловлен противоотечным эффектом, снижением АМК-генерирующей активности нейтрофилов крови и повышением их реактивности, а также активизацией антиоксидантных процессов в организме крыс.


2.2.2.3. Терапевтическая эффективность гинодиксина при

послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров


Оценку терапевтической эффективности препарата при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите проводили в ОПХ «Элитное» Новосибирской области. Для научных опытов использовали коров черно-пестрой породы, которые были разделены на опытную и контрольную группы. Животным опытной группы (n=24) внутриматочно вводили гинодиксин в дозе 100 мл с интервалом 48 часов. Животным контрольной группы (n=24) применяли фурапен согласно наставлению: по 1 суппозиторию 1 раз в день.

При использовании гинодиксина патологические выделения из влагалища уменьшались и становились прозрачными после 2 – 3-го введения. При лечении фурапеном положительная динамика наблюдалась на 6–7 сутки введения препарата. Количество лечебных процедур в опытной группе составило 6,1±0,32; в контрольной – 10,58±0,16. В опытной группе выздоровело 26 животных (96,3%), в контрольной – 18 (66,7%).

Из данных таблицы 3 следует, что терапевтический эффект применения гинодиксина составляет 96,3%, что на 29,6% больше по сравнению с контролем, при этом кратность введения препарата сокращается на 42,34% (4-5 введений).


Таблица 3 – Основные показатели терапевтической эффективности препаратов

№ п/п	Показатель	Группа
		опытная	контрольная
1.	Количество больных коров, гол	27	27
2.	Выздоровело коров, гол	26	18
3.	Выздоровело коров, %	96,3	66,7
4.	Продолжительность бесплодия, дни	65,27 ± 6,44	97,53 ± 9,32
5.	Кратность введения препарата	6,1 ± 0,32	10,58 ± 0,16

При анализе гематологических показателей у больных эндометритом коров, содержание витамина Е и альфа-глобулинов находилось на нижней границе физиологической нормы. Щелочной резерв и количество эритроцитов были снижены на 26,15% и 32,32% соответственно.

При анализе данных после лечения в опытной группе выявили достоверное увеличение уровня альбуминов (на 10,25%), мочевины (на 23,09%); и активность АсАТ (на 34,73%); снижение содержания альфа- (на 12,89%), бетта-глобулинов (на 25,85%) и активности АлАТ (на 34,56%).

В контрольной группе наблюдали уменьшение концентрации витамина Е (на 28,57%), альфа- (на 13,97%), бета- (на 26,22%), гамма-глобулинов (на 4,55%), АлАТ (на 41,5%); увеличение содержания альбуминов (на 13,73%).

Производственное испытание терапевтической эффективности гинодиксина на поголовье коров численностью 165 голов, принадлежащих ОПХ «Элитное», ЗАО «Совхоз Морской», ООО «Моховское», показало, что лечебный эффект составил 93,7-96,7%. В контрольных группах терапевтическая эффективность составила 81,8-86,9%.


2.2.2.4. Оценка терапевтической эффективности

гинодиксина при серозном мастите у коров


Оценку эффективности лечения коров, больных серозным маститом, проводили в ООО «Моховское» Кемеровской области. Для этого по принципу аналогов были сформированы две группы – опытная и контрольная – по 32 гол. в каждой. Группы формировались из коров черно-пестрой породы, с характерными клиническими признаками серозного мастита.

Животных контрольной группы лечили мастисаном-А, опытной – гинодиксином. Препараты вводили в дозе 10 мл один раз в день интрацистернально, в течение 2-4 дней.

Эффективность лечения в группах составила 100%. Сроки лечения коров опытной группы были меньше в среднем на 10,6% (табл. 4). В процессе терапии не было отмечено осложнений, рецидивов и побочных эффектов после введения препаратов.

Лейкограмма, количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и биохимические показатели сыворотки крови у опытных и контрольных коров до и после лечения препаратами соответствовали физиологической норме.


Таблица 4 – Основные показатели терапевтической эффективности препаратов

№ п/п	Показатель	Группа
		опытная	контрольная
1.	Больных коров, четвертей	32	32
2.	Излечено коров, четвертей, %	100	100
3.	Сроки лечения, дни	3,13 ± 0,30	3,50 ± 0,27
4.	Эффективность лечения, %	100	100

Производственные испытания гинодиксина при серозном мастите, проведенные на 355 коровах в 3-х хозяйствах Новосибирской и Кемеровской областей, показали, что лечебный эффект составил 94,7-96,7%, в то время как в контрольных группах - 90,1-92,6%.


2.2.2.5. Экономическая эффективность гинодиксина при послеродовом

гнойно-катаральном эндометрите и серозном мастите у коров


Анализ применения гинодиксина при гнойно-катаральном эндометрите, показал, что экономическая эффективность мероприятий на рубль затрат составила 17,39 руб., в то время как при использовании фурапена – 13,25 руб., что в 1,31 раза выше.

При лечении коров больных серозным маститом с использованием гинодиксина и мастисана-А экономическая эффективность мероприятий на рубль затрат составила 27,45 руб. и 12,01 руб. соответственно. Из полученных данных можно сделать вывод о том, что применение гинодиксина при серозном мастите эффективнее мастисана-А в экономическом плане в 2,28 раза.


3. ВЫВОДЫ

1. У коров в структуре патологий репродуктивных органов, вызываемых условно-патогенной микрофлорой, преобладают мастит, эндометрит, задержание последа. Их доля составляет 6,44-38,07%; 2,8-14,99% и 2,8-10,16% соответственно.

2. В развитии послеродового эндометрита преимущественное значение имеет условно-патогенная микрофлора, относящаяся к родам: Enterobacter, Citrobacter, Staphylococcus, которая выявляется в ассоциациях с частотой 55,76-63,38% и проявляет наибольшую чувствительность к энрофлоксу, гинодиксину, тилану.

При серозном мастите изолировали преимущественно Staphylococcus, Streptococcus, которые наиболее чувствительны к гинодиксину. Частота выявления микрофлоры в ассоциациях составляет 78,5-83,3%.

3. Лекарственное средство гинодиксин, включающее в свой состав в качестве активнодействующих веществ 1,4-Ди-N-окись 2,3-бис (оксиметил) хиноксалин; трис (2-оксиэтил) аммония орто-крезоксиацетат обладает низкой токсичностью и высокой антиоксидантной активностью, которая проявляется снижением прооксидантного потенциала сыворотки крови у коров, больных эндометритом.

4. Индуцированное адъювантом Фрейнда экспериментальное экссудативное воспаление, сопровождается температурной реакцией, увеличением размера лапки на 73,6%, развитием окислительного стресса и повышением коэффициента соотношения ПОА/АОА в два раза (с 5,1±0,19 отн.ед. до 10,4±0,94 отн.ед.), а также активизацией окислительно-метаболической функции нейтрофилов крови, при сохранении низких показателей зимозан-индуцированного индекса и снижением реактивности нейтрофилов на 39,53% по сравнению с контрольными значениями.

5. Экспериментальное экссудативное воспаление на фоне применения гинодиксина протекает в условиях нормализации температуры, возрастания размера лапки на 11,1% и снижения реактивности нейтрофилов на 2,3%, восстановления баланса в системе оксидант-антиоксидант, что выражается снижением коэффициента соотношения ПОА/АОА сыворотки крови крыс на 29,41% по отношению к контролю.

6. Функциональные изменения нейтрофилов периферической крови и очага поражения при экспериментальном экссудативном воспалении на фоне гинодиксина характеризуются активизацией смены популяции полинуклеаров на мононуклеарные клетки и увеличением их в периферической крови на 73,5%, а в зоне поражения на 50%; снижением АМК-генерирующей функции нейтрофилов на 39,1% при одновременном повышении на 41,6% их хемилюминисцентного ответа на дополнительный ЗГ-индуцированный стимул. Реактивность нейтрофилов возрастает и превышает таковой показатель у крыс с экспериментальным экссудативным воспалением на 61,5% при индексе стимуляции 2,1±0,09 отн.ед.

7. Терапевтическая эффективность применения гинодиксина с интервалом 48 часов при послеродовом гнойно-катарального эндометрите составляет 93,7-96,7%, количество лечебных процедур сокращается на 42,3%, количество дней бесплодия - на 32,3%. Эффективность гинодиксина при серозном мастите у коров составляет 94,7%-100%, сроки лечения сокращаются на 10,6%.

8. Экономическая эффективность гинодиксина при лечении коров больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и серозным маститом составляет 17,39 руб. и 9,86 руб. на 1 рубль затрат, соответственно.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
   

Для лечения коров больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом у коров препарат рекомендуем вводить внутриматочно, по 100 мл с интервалом 48 час. Кратность введения – 4-8 дней.

При терапии серозного мастита у коров гинодиксин следует применять интрацистернально по 10 мл с интервалом 24 час. Курс лечения составляет 2-4 дня.

По результатам исследований подготовлены 2 методические рекомендации:

- «Применение ветеринарных препаратов на основе синтетического аналога фитогормона для профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных», утвержденные подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 3 от 14.09.2006 г.);

- «Фармакологические свойства и применение лекарственного средства гинодиксин в ветеринарии», утвержденные подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №3 от 13.10.2009 г.).


5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Распутина, О.В. Оксидативный гомеостаз у стельных коров и при остром гнойно-катаральном эндометрите / О.В. Распутина, М.Н. Скомарова, Д.Д. Цырендоржиев // Ветеринария. – 2007. – № 1. – С. 35-39.
   
2. Скомарова, М.Н. Противовоспалительные свойства ветеринарного лекарственного средства гинодиксин / М.Н. Скомарова, О.В. Распутина, Д.Д. Цырендоржиев, В.В. Курилин, М.А. Саперова, Н.А. Шкиль // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. – 2009. – № 11. – С. 77-84.
   
3. Пат. 2287329 Российская Федерация. Препарат для лечения послеродового гнойно-катарального эндометрита и мастита у коров и способ его применения / Распутина О.В., Дровосекова М.Н., Дровосеков Н.А., Дольникова М.Н. – заявитель и патентообладатель ЗАО «Росветфарм»; заявл. 21.02.05 г.; опубл. 20.11.06 г.; Бюл. №32. – 9 с.
   
4. Скомарова, М.Н. Эффективность гинодиксина при серозном мастите у коров / М.Н. Скомарова, О.В. Распутина, Н.А. Шкиль // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний: Материалы междунар. симпозиума. – ФГУ Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных. – Казань. – 2005 г. – Часть 1. – С. 530-535.
   
5. Скомарова, М.Н. Анализ заболеваемости коров маститами в Новосибирской области / М.Н. Скомарова, О.В. Распутина // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: материалы VI Сибирской ветеринарной конференции. – НГАУ, Новосибирск. – 2006 г. – С. 87-88.
   
6. Распутина, О.В. Оксидативно-антиоксидантный статус у коров, больных послеродовым эндометритом и возможность его коррекции / О.В. Распутина, М.Н. Скомарова, Д.Д. Цырендоржиев // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях: Материалы междунар. науч.-практ. конф., посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. – Краснодар. – 2006 г. – С. 366-368.
   
7. Скомарова, М.Н. Влияние гинодиксина на биохимические показатели сыворотки крови коров, больных послеродовым эндометритом / М.Н. Скомарова, О.В. Распутина // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях. Материалы междунар. науч.-практ. конф., посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ. – Краснодар. – 2006 г. – С. 379-381.
   
8. Скомарова, М.Н. Снижение потерь и повышение качества сельскохозяйственной продукции при мастите у коров / М.Н. Скомарова, Л.В. Макаренко // Современные технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции: Сб. материалов междунар. науч.-практ. конф. – Новосибирск. – 2009 г. – С. 155-160.
   
9. Скомарова, М.Н. Мониторинг акушерско-гинекологических патологий у коров в хозяйствах Новосибирского района / М.Н. Скомарова, О.В. Распутина, В.В. Теске // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы II Сибирского ветеринарного конгресса. – НГАУ, Новосибирск. – 2010 г. – С. 98-100.