Geum.ru

Выделение и идентификация нетуберкулезных микобактерий у пациентов фтизиатрических учреждений 03. 00. 07 Микробиология

Вид материалаАвтореферат
Практические рекомендации
Список работ, опубликованных по теме диссертации
Подобный материал:
1   2   3   4   5
ВЫВОДЫ

1. Установлено, что нетуберкулезные микобактерии в последние годы с возрастающей частотой обнаруживают в клиническом материале, полученном от больных туберкулезом и лиц с подозрением на туберкулез. В результате культурального исследования 163766 образцов такого материала, поступившего из противотуберкулезных диспансеров города Москвы за период с января 2006 по ноябрь 2009гг., было получено 13283 изолятов микобактерий, из них к НТМ отнесены – 764 (5,8 %) культуры. При этом если в 2006 г. выделено 102 (3,0%), в 2007 г. – 111 (3,4%), то в 2008 г. – 253 (6,9%) и за 10 месяцев 2009 года – 268 (8,7%) изолятов НТМ (от общего числа выделенных микобактерий).

2. Наибольшее число НТМ из клинического материала удается выделить при использовании модифицированной жидкой среды Миддлбрука 7Н9 в автоматизированной системе BACTEC MGIT 960 (85,4%), в сравнении с агаровой средой Миддлбрука 7Н11 (73,2%) и яичной средой Левенштейна-Йенсена (65,9%). При этом срок детекции роста микобактерий при использовании жидкой питательной среды – 19,8±5,2 дней, что в 1,9 раз короче, чем на плотной яичной (37,2±4,5 дней) и в 1,5 раза, чем на плотной агаровой среде (30,5±3,9 дней).

3. Для видовой идентификации НТМ разработан метод биологических микрочипов (БИОЧИП IMS), на основе поэтапного испытания различных вариантов биочипов с увеличением количества иммобилизированных в лунках с гелем специфических олигонуклеотидов (увеличение числа идентифицируемых НТМ). БИОЧИП «IMS» позволяет идентифицировать 9 видов НТМ: M. avium, M. intracellulare, M. sсrofulaceum, M. kansasii, M. gordonae, M. xenopi, M. marinum, M. fortuitum, M. chelonae и дифференцировать их от M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG).

4. Использованные для видовой идентификации микобактерий методы – микробиологические, биочипы, ПДРФ, ВЭЖХ дают сопоставимые результаты. При этом ВЭЖХ и молекулярно-генетические методы характеризуются более высокой специфичностью и скоростью получения результатов, а преимуществом биочипов также является автоматизированный учет с помощью программного обеспечения.

5. Разработан оптимальный комплекс методов (алгоритм) выделения и идентификации НТМ, который включает выделение микобактерий с помощью культивирования биологического материала на двух питательных средах (жидкой и плотной) и применение ВЭЖХ и/или одного из молекулярно-генетических методов (ПДРФ, биочип – последний предпочтительнее) для определения вида выделенной культуры.

6. Охарактеризован видовой состав НТМ, выделенных от больных туберкулезом и лиц с подозрением на туберкулез за период с января 2006 по ноябрь 2009 в городе Москве. Установлено, что с наибольшей частотой среди медленнорастущих НТМ из клинического материала выделяются МАС (33,6%), M. xenopi (13,2%) и M. kansasii (12,7%), а быстрорастущих – M. fortuitum (28,5%). Неоднократное обнаружение в диагностическом материале, полученном от больного, одного и того же вида НТМ, при отсутствии M. tuberculosis и наличии соответствующей клинико-рентгенологической симптоматики, дает основание для рассмотрения лечащим врачом в диагностическом ряду микобактериоза.

7. Установлено, что большинство клинических изолятов НТМ, выделенных от больных туберкулезом и лиц с подозрением на туберкулез в городе Москве отличается высоким уровнем устойчивости как к основным, так и к большинству резервных противотуберкулезных препаратов и чувствительностью к таким фторхинолонам, как ципрофлоксацин и моксифлоксацин.

8. Поскольку материал для исследования поступал в Централизованную микробиологическую лабораторию МНПЦБТ из противотуберкулезных диспансеров, в которых состоят на учете больные туберкулезом и лица из групп риска развития туберкулеза из двух третей населения города, данные видовой идентификации НТМ и определения их чувствительности к антибактериальным препаратам отражают ситуацию в целом в городе Москве.


ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для эффективного выделения НТМ из биологического материала рекомендуется его посев на две питательные среды: жидкую (Миддбрука 7Н9 в автоматизированной системе BACTEC MGIT 960) и одну из плотных (агаровую или яичную).

2. Для обнаружения смешанных культур микобактерий, получения чистой культуры и изучения культурально-морфологических свойств рекомендуется культуры НТМ, выделенные в жидкой и/или на плотной питательных средах, субкультивировать на чашках с агаровой средой 7Н11.

3. Культурально-морфологические и биохимические свойства разных штаммов одного и того же вида микобактерий вариабельны, что может приводить к неправильной их идентификации. При наличии в лаборатории более точных методов идентификации (например, молекулярно-генетических и ВЭЖХ), использование микробиологических тестов целесообразно лишь в отдельных (спорных) случаях.

4. Поскольку при использовании ВЭЖХ имеет место высокая степень совпадения результатов идентификации микобактерий с данными микробиологических исследований, этот метод может быть рекомендован для их определения в бактериологических референс-лабораториях, тем более что идентификация вида микобактерий микробиологическими методами занимает до 3-4 недель, тогда как применение ВЭЖХ сокращает ее время до 24 часов.

5. Результаты видовой идентификации культур нетуберкулезных микобактерий с помощью молекулярно-генетических методов – ПДРФ и биологических микрочипов, также как и ВЭЖХ, в большинстве случаев совпадают с данными микробиологических исследований, в связи с этим и быстрым получением результатов, данные методы также могут быть рекомендованы для использования в практике. При этом преимуществом применения биочипов является простота метода и автоматизированный учет результатов с помощью программного обеспечения.

6. При неоднократном обнаружении у больного одного и того же вида НТМ (в сочетании с клинико-рентгенологическими проявлениями заболевания) в диагностическом ряду следует рассматривать микобактериоз.

7. При проведении химиотерапии микобактериозов следует учитывать то, что НТМ, как правило, устойчивы к основным и большинству резервных противотуберкулезных препаратов и чувствительны к фторхинолонам (ципрофлоксацину и моксифлоксацину).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
  1. Краснова М.А. Идентификация микобактерий комплекса «MAIS» и M. tuberculosis методом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов гена hsp65 / Макарова М.В., Скотникова О.И., Мороз А.М. // БЭБиМ. – 2006. - №8.- с. 188-191.
  2. Макарова М.В. Нетуберкулезные микобактерии: классификация, эпидемиология, патология у людей и животных, лабораторная диагностика // Пробл. туб. и болезней легких.- М. - 2007. - №10. - с.7-17.
  3. Краснова М.А. Применение молекулярно-генетических методов для определения вида микобактерий «MAIS» и M. tuberculosis complex / Макарова М.В., Дорожкова И.Р., Скотникова О.И., Мороз А.М. // Пробл. туб. и болезней легких. – М. – 2007. – №11. – с.29-33.
  4. Макарова М.В. Изучение чувствительности нетуберкулезных микобактерий к химиопрепаратам / Фрейман Г.Е. // Туберкулез и болезни легких. – М. – 2009. – №7. – с.55-58.
  5. Макарова М.В. Изучение чувствительности нетуберкулезных микобактерий, выделенных на плотных и жидких питательных средах, к противотуберкулезным препаратам / Фрейман Г.Е. // Туберкулез и болезни легких. – М. – 2009. – №8. – с.49-51.
  6. Макарова М.В. Частота обнаружения разных видов нетуберкулезных микобактерий в Москве / Краснова М.А., Фрейман Г.Е., Литвинов В.И. // Туберкулез и болезни легких. – М. – 2009. – №9. – с.29-32.
  7. Макарова М.В. Выделение микобактерий на разных питательных средах и их идентификация / Левченко Т.Н., Фрейман Г.Е. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – М. – 2009. – №3. – с.7-10.
  8. Макарова М.В. Идентификация микобактерий методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / Краснова М.А., Мороз А.М. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – М. – 2009. – №3. – с.64-66.
  9. Макарова М.В. Идентификация нетуберкулезных микобактерий / Краснова М.А. // Российский медицинский журнал.- М. – 2009. - №1. – с.27-29.
  10. Литвинов В.И.. Нетуберкулезные микобактерии / Макарова М.В., Краснова М.А.// Изд.ЗАО «Информационные технологии в медицине». – 2008, 254 С.
  11. Краснова М.А. Определение вида микобактерий комплексов MAIS и Mycobacterium tuberculosis методом рестрикционного анализа / Макарова М.В., Скотникова О.И. //Методические рекомендации №3. – М. – 2007. – 17С.
  12. Макарова М.В. Идентификация микобактерий методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / Краснова М.А. // Методические рекомендации №18. – М. – 2009. – 18 С.
  13. Макарова М.В. Выделение и идентификация нетуберкулезных микобактерий микробиологическими методами / Краснова М.А., Фрейман Г.Е. // Методические рекомендации №19. – М. – 2009. – 22 С.
  14. Краснова М.А. Определение вида микобактерий комплекса MAIS и M. tuberculosis complex молекулярно-генетическими методами / Макарова М.В., Дорожкова И.Р., Скотникова О.И., Мороз А.М. // Научные труды (к 80-летию ведущего противотуберкулезного учреждения г.Москвы) Под редакцией академика РАМН В.И.Литвинова. М.: МНПЦБТ. – 2007. – с.200-204
  15. Макарова М.В. Нетуберкулезные микобактерии (обзор литературы) // Научные труды (к 80-летию ведущего противотуберкулезного учреждения г. Москвы) Под редакцией академика РАМН В.И.Литвинова. М.: МНПЦБТ. – 2007. – с.233-246
  16. Скотникова О.И. Применение современных технологий для определения вида микобактерий и чувствительности Mycobacterium tuberculosis к лекарственным препаратам / Носова Е.Ю., Галкина К.Ю., Краснова М.А., Макарова М.В., Мороз А.М. // Туберкулез в России. Материалы VIII Российского съезда фтизиатров. – М.- 2007. – с.127-128.
  17. Krasnova M.A. Species identification of mycobacteria in Moscow state / Makarova M.V. // В сб. тезисов «ERS». – Берлин. – 2008. – с.86
  18. Литвинов В.И. Молекулярно-генетические технологии при туберкулезе / Носова Е.Ю., Макарова М.В., Краснова М.А., Мороз А.М. // Актуальные вопросы лечения туберкулеза различных локализаций: Материалы Всерос. Научн.-практ. конф. Под ред. Ю.Н. Левашева – С-Пб. – 2008. – с. 252-254
  19. Макарова М.В. Выявление и идентификация нетуберкулезных микобактерий / Краснова М.А. // Актуальные вопросы лечения туберкулеза различных локализаций: Материалы Всерос. Научн.-практ. конф./ Под ред. Ю.Н. Левашева – С-Пб. – 2008. – с. 254-256
  20. Краснова М.А. Видовая идентификация микобактерий / Макарова М.В.// Научные труды 4-го конгресса Евро-Азиатского респираторного общества и 5-го международного конгресса пульмонологов Центральной Азии. – Ташкент. – 2008. – с.92
  21. Литвинов В.И. Нетуберкулезные микобактерии (Библиографический указатель) / Макарова М.В., Краснова М.А.// Изд.ЗАО «Информационные технологии в медицине». – 2008. – 96 С.
  22. Макарова М.В. Нетуберкулезные микобактерии (выделение, идентификация) / Краснова М.А. // Тезисы докладов. VII Московская ассамблея «Здоровье столицы» 18-19 декабря 2008 г. – М.: ГЕОС, 2008. – с.149.
  23. Makarova M. Isolation and identification of non-tuberculous mycobacteria (NTM) / Krasnova M. // European respiratory society, Austria, September 12-16, 2009. – р.2465.
  24. Krasnova M.A. Mycobacteria identification using the experimental version of biological microchips / Makarova M.V. // 5th Congress of the International Union Against Tuberculosis and Lung Disease. Abstract Book, 27-30 May 2009, Dubrovnik, Croatia. – р.109
  25. Макарова М.В. Видовая идентификация нетуберкулезных микобактерий / Краснова М.А. // Тезисы докладов. VIII Московская Ассамблея «Здоровье столицы» 17-18 декабря 2009 г. – М.: ГЕОС, 2009. – с. 218.
  26. Адамбеков Д.А. Туберкулез и микобактериозы /Литвинов В.И., Макарова М.В., Гергерт В.Я., Сабодаха М.А. // В кн. «Микробиология и иммунология зооантропонозных инфекций» под ред.Д.А.Адамбекова, В.И.Покровского, В.И.Литвинова. – Бишкек, 2009. – с.293-371.
  27. Краснова М.А. Идентификация микобактерий молекулярно-генетическими методами /Макарова М.В. //Сб.тр. к 85-летию со дня рождения М.М.Авербаха. Изд.ЗАО «Информационные технологии в медицине». - М. – 2010. – с.36-39.
  28. Макарова М.В. Идентификация микобактерий методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / Краснова М.А. // Сб.тр. к 85-летию со дня рождения М.М.Авербаха. Изд.ЗАО «Информационные технологии в медицине». - М. – 2010. – с.43-48.