Анализ комплексов лактоферрина молока человека
Дипломная работа - Химия
Другие дипломы по предмету Химия
°ется высоким и сопоставимым с таковым для ЛФ в отсутствие соли и других лигандов, даже при добавлении 0,15 М КСl (рис. 15). Это свидетельствует о том, что олигомерные формы ЛФ, существующие в растворе, не стабильны и разрушаются при контакте с Sepharose 4В в процессе гель-хроматографии.
Данные по оценке олигомерных форм с помощью абляции лиофилизованных препаратов ЛФ с алюминиевой подложки также могут свидетельствовать в пользу наличия в растворе высокоолигомерных форм ЛФ по размеру соответствующих как минимум 16-меру. В целом, данные СР и абляции приводят к сопоставимым результатам, подтверждающим наличие крупных олигомеров.
Основные результаты
. Методом гель-хроматографии впервые проведен анализ олигомерных форм лактоферрина (ЛФ), которые образуются под действием его природных лигандов. Показано, что в нейтральном буфере при низкой ионной силе основной формой лактоферрина, устойчивой в условиях хроматографии, является тетрамер, диссоциирующий до димеров и мономеров после добавления 0,1 М КСl. АТР и АМР в отсутствие соли стимулируют образование преимущественно димерной, а олигосахарид - мономерной формы белка. Олигосахарид в присутствии соли КСl стимулирует образование димера, ATP разрушает тетрамерную и димерную форму ЛФ, а в присутствии АМР происходит формирование димера и необычной формы лактоферрина - пентамера.
2. Методом светорассеяния исследована эффективность образования олигомеров в присутствии и отсутствии различных лигандов и показано, что лактоферрин в присутствии АТР и АМР образует высокоолигомерные формы. Согласно средним радиусам инерции этих олигомеров они могут содержать в своем составе до 10 и более мономеров ЛФ.
. Впервые исследованы олигомерные формы лактоферрина методом лазерной абляции. Данные светорассеяния и абляции приводят к сопоставимым результатам, подтверждающим наличие в растворах лактоферрина крупных по размеру олигомеров лактоферрина. Сравнение данных гель-хроматографии, светорассеяния и лазерной абляции свидетельствует в пользу того, что высокоолигомерные формы лактоферрина могут разрушаются при их контакте с сорбентом в процессе хроматографии.