Структура лекарственно-устойчивого туберкулеза в Минской области в 2008–2011 гг.
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
?ротив микобактерий. Для определения антигенов в сыворотке крови необходимо диссоциировать иммунные комплексы, но в плевральной и в спинномозговой жидкости антигены можно определять методом непрямого твердофазового иммуноферментного анализа. Главной проблемой является получение антител, обеспечивающих достаточную специфичность и чувствительность исследования, особенно при непосредственном использовании клинического диагностического материала.
Молекулярно-генетические методы обнаружения М.tuberculosis основаны на полимеразной цепной реакции (ПЦР). Принцип метода состоит в циклическом повторении трех стадий реакции:
1)денатурации ДНК при нагревании;
2)гибридизации искусственно синтезированных олигонуклеотидов с фланговыми участками цепей амплифицируемого фрагмента ДНК (так называемых праймеров или затравочных фрагментов);
)синтеза (достройки) цепи фрагмента ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы.
Многократное удвоение цепей ДНК (30-40 циклов) позволяет в течение нескольких часов умножить (амплифицировать) специфический участок ДНК в геометрической прогрессии, а затем идентифицировать его (при электрофорезе в агарозном геле в присутствии красителя бромидэтидия синтезированный фрагмент ДНК выявляется в виде светящейся под действием ультрафиолета полосы) (Вишневская, 1998).
Высокая чувствительность (теоретически возможно определять единичные М.tuberculosis в образце) и быстрота проведения анализа (1-2 дня) чрезвычайно ценны для клинической практики. Метод эффективен в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью (в том числе L-форм), определение которых требует длительного культивирования и сложныхпитательных сред. Однако метод не позволяет определять степень жизнеспособности выявляемых микобактерий.
Метод ПЦР перспективен для дифференциации М.tuberculosis и нетуберкулезных микобактерий (в том числе и после культивирования микобактерий, особенно на жидких питательных средах с использованием систем типа ВАСТЕС) и для быстрого определения лекарственной устойчивости. Штаммовая идентификация М.tuberculosis позволяет определять внутривидовые различия возбудителя туберкулеза и представляет интерес для эпидемиологических исследований и определения роли суперинфекции при рецидивах туберкулеза. Проблема специфичности ПЦР в диагностике туберкулеза обусловлена высоким риском ложноположительных результатов, поскольку продукты амплификации (фрагменты ДНК) легко могут попасть в исследуемые образцы и служить матрицей для новых реакций. Это определяет очень жесткие требования к технологии проведения анализов, в том числе - раздельные помещения для каждой из трех стадий анализа. Проблема может быть решена за счет инактивации загрязняющих молекул специальными реагентами и совершенствования технологии подготовки клинических образцов (выделение ДНК на микропористых частицах стекла, иммуномагнитная сепарации микобактерий и проч.).
Использование методов, основанных на амплификации фрагментов генома микобактерий (ПЦР), допускается как дополнительный метод ускоренной дифференциальной диагностики туберкулеза при обязательном параллельном применении классических микробиологических методов (Вишневская, 1998).
1.4 Лекарственная устойчивость
Чувствительность микобактерий к ПТП определяется неспособностью штамма расти в среде, содержащей препарат, при стандартных условиях постановки опыта. Чувствительными к препарату считаются те штаммы микобактерий, на которые этот препарат в критической концентрации оказывает бактерицидное или бактериостатическое действие в соответствии с принятым критерием устойчивости.
Устойчивость (резистентность) определяется как снижение чувствительности до такой степени, что данный штамм микобактерий способен размножаться при воздействии на него препарата в критической или более высокой концентрации.
Наряду с понятиями чувствительность и устойчивость к ПТП в настоящее время используются также термины, определяющие различные аспекты ЛУ.
Монорезистентность - штаммы МБТ резистентны только к одному из пяти ПТП первого ряда (рифампицин, изониазид, этамбутол, пиразинамид, стрептомицин).
В случае наличия устойчивости к двум или более лекарственным препаратам данный штамм микобактерий определяется как полирезистентный.
Особое место среди полирезистентных занимают микобактерии, у которых обнаруживается ЛУ к двум основным ПТП (изониазиду и рифампицину): штаммы, обладающие ЛУ одновременно к изониазиду и рифампицину, независимо от наличия устойчивости к другим ПТП, обозначаются как штаммы с множественной лекарственной устойчивостью. Им уделяется особое внимание, так как лечение пациентов, у которых патологический процесс вызван такими штаммами, сопряжено с большими трудностями. Оно длительное, дорогостоящее и требует использования препаратов резервного ряда, многие из которых также дорогостоящи и могут вызывать тяжелые побочные реакции. Кроме того, некоторые штаммы обладают повышенной способностью к распространению и вызывают тяжелые прогрессирующие формы заболевания, нередко приводящие к неблагоприятному исходу.
Наряду с перечисленными видами спектра ЛУ микобактерий в международной практике принято различать первичную и приобретенную ЛУ.
Первичная ЛУ определяется как устойчивость, обнаруженная у микобактерий, выделенных от пациента, который никогда не принимал ПТП или получал такое лечение ?/p>