Структура лекарственно-устойчивого туберкулеза в Минской области в 2008–2011 гг.
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
ров материала.
.Для снижения токсичного воздействия на микобактерии различных остатков веществ (в том числе возможных химиопрепаратов) проводили еще одну процедуру отмывки осадка 10-15 мл дистиллированной воды.
Супернатант удаляли, а осадок в объеме 0,8-1,0 мл готовили к инокулированию и приготовлению мазка:
Реактивы
.Трехзамещенный фосфорнокислый натрий (Na3PO4).
.Кислота соляная (HCl) концентрированная.
.Бумага индикаторная универсальная.
Приготовление растворов
1.100 г трехзамещенного фосфата натрия растворяли в 800 мл дистиллированной воды и доводили объем раствора до 1 л.
.6 мл концентрированной соляной кислоты добавляли к 94 мл дистиллированной воды.
Первой ступенью идентификации является микроскопия всех выделенных культур с окраской мазков по Цилю-Нильсену.
Реагенты
.Карболовый фуксин Циля 1 фл (100 мл)
.Солянокислый спирт (концентрат) 1 фл (10 мл)
.Метиленовый синий 1 фл (100мл)
Набор обеспечивает 200 исследований (при расходе 0,5 мл реагента на одно исследование).
Подготовка к анализу
Предметные стекла перед проведением исследования тщательно мыли и обезжиривали смесью для обезжиривания предметных стекол производства АБРИС+.
Полученные мазки тщательно высушивали и затем фиксировали сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 700С) предметного стекла, которое для этого трижды провели над пламенемспиртовки мазком вверх.
Приготовление рабочего растворасолянокислого спирта.
Для приготовления рабочего (3%) раствора солянокислого спирта, во флакон емкостью 100 мл вносили концентрат солянокислого спирта (10 мл) и добавляли 90 мл этилового спирта (960). Раствор тщательно перемешивали.
Методика окраски:
. Помещали на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносили на фиксированный мазок несколько капель карбол-фуксинЦиля и подогревали над пламенем спиртовки до появления паров. Эту температуру поддерживали в течение 1-2 минуты, не доводя до кипения. Охлаждали мазок до комнатной температуры.
. Сливали краску, удаляли фильтровальную бумагу и основательно промывали в водопроводной воде.
. Обрабатывали рабочим раствором солянокислого спирта до полного визуального обесцвечивания (1-3 минуты).
. Промывали в воде.
. Докрашивали (несколько капель) метиленовым синим 1-2 минуты.
. Основательно споласкивали в воде и высушивали фильтровальной бумагой.
Окрашенные мазки исследовали в масле, с иммерсионным объективом.
Выделение чистой культуры осуществляли традиционным способом _ посевом на плотную питательную среду Левенштейна-Йенсена.
Реактивы
Калий однозамещенный фосфорнокислый KH2PO4.
Магний лимоннокислый Mg3(C6H5O7)2 14H2O.
Магний сернокислый MgSO4 7H2O.
L-аспарагин C4H8N2O3 H2O.
Глицерин C3H8O3.
Малахитовый зеленый C52H54O12N4.
Вода дистиллированная.
Состав среды
) Приготовлениераствора минеральных солей:
Калий однозамещенный фосфорнокислый 2,4 г
Магний лимоннокислый 0,6 г
Магний сернокислый 0,24 г
L-аспарагин 3,6 г
Глицерин 12,0 мл
Вода дистиллированная 600 мл
Вышеперечисленные ингредиенты растворяли в теплой дистиллированной воде вуказанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) наводяной бане. L-аспарагин растворяли отдельно и вносили последним.
Затем солевой раствор стерилизовали в автоклаве при 1 атм. (121 С) в течение 30 минут. Срок хранения раствора составляет 3-4 недели при комнатной температуре.
)Приготовление раствора малахитового зеленого:
Малахитовый зеленый 2 г
Стерильная дистиллированная вода 100 мл
Взвешенный порошок малахитового зеленого растворяли в стерильной теплой дистиллированной воде и помещали раствор втермостат на 2 часа для большего растворения (часто помешивали, поскольку порошок растворяется очень плохо). Затем профильтровывали растворчерез бумажный фильтр, разливали по флаконам и стерилизовали при 1 атм. (121 С) в течение 30 минут.
)Приготовление яичной массы.
Свежие диетические куриные яйца без трещин и дефектов скорлупы тщательномыли в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла.Далее яйца тщательно промывали в проточной воде и погружали в 70% этиловыйспирт на 30 минут.
Тщательно мыли руки с мылом и щеткой. Затем в стерильном боксе разбивали яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доведя общий объем яичной массы до 1 л.
Тщательно взбивали яичную массу стерильным венчиком при минимальной скорости.
Приготовление среды
В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещали следующие растворы:
.раствор минеральных солей 600 мл;
.гомогенизированную яичную массу 1000 мл.
Смесь тщательно перемешивали и профильтровывали через стерильный марлевыйфильтр, имеющий не менее 4 слоев марли. Добавляли 20 мл раствора малахитовогозеленого, тщательно перемешивали, избегая образования пены, и в течение 15 минутразливали в пробирки приблизительно по 5 мл, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок.
Свертывание среды:
Для свертывания среды использовали специальные аппараты-свертывателиАСПС. Пробирки с разлитой в них средой помещали в специальные штативы сподобранным углом наклона для формирования косяка среды высотой 8-10 см. Штативы устанавливали в свертыватель и проводили коагуляцию при 82-83 С в течение40 минут.
В работе использовался коммерческий набор для деконтами?/p>