Минорный белок сыворотки крови связанный с беременностью альфа 2 -гликопротеин: теоретические и практические аспекты 03. 00. 04. Биохимия

Вид материала

Содержание

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Подобный материал:

1 2 3 4 5 6

Показатели СБАГ в крови больных со злокачественными новообразованиями достоверно превышают таковые при доброкачественных опухолях, что позволяет рекомендовать тест на СБАГ в качестве дополнительного лабораторного критерия диагностики, а, главное, оценки эффективности лечения онкологических заболеваний.

Для расширения диагностического диапазона СБАГ и технического упрощения практического использования теста получены предварительные результаты по разработке набора реагентов для иммуноферментного анализа, который может быть использован не только в клинических, но и поликлинических условиях при скрининг-обследовании населения с целью выявления латентного воспаления.

СБАГ был отнесен к белкам острой фазы (БОФ) с момента его обнаружения (Ю.С. Татаринов, 1971). Именно поэтому представляется логичным его изучение параллельно с классическим острофазовым белком – СРБ. Был проведен сравнительный анализ результатов определения обоих белков и показателей клеточного и гуморального иммунитета у 93 больных с различными соматическими заболеваниями (табл 15).

Таблица 15

Показатели иммунограммы в группах БОФ-позитивных и БОФ-негативных обследованных лиц

Показатели	Еди-ницы изме-рений	Значения показателей иммунограммы в группах:	P
БОФ-позитивных (n=42)	БОФ-негативных (n=51)
M  m	min - max	M  m	min - max
Возраст	лет	34,50  3,58	1,00 - 71,00	30,232,60	1,00 - 64,00
Лейкоциты	10⁹/л	5,79  0,35	4,20 - 11,20	5,820,28	3,00 - 11,60
Эозинофилы	%	3,00  0,58	1,00 - 18,00	2,490,34	1,00 - 14,00
Нейтрофилы п/я	%	1,69  0,16	1,00 - 5,00	1,880,21	1,00 - 10,00
Нейтрофилы с/я	%	52,20  2,21	16,00-82,00	46,702,04	19,00-79,00
Лимфоциты	%	40,59 1,84	23,00-71,00	46,372,09	15,00-78,00	0,04
Моноциты	%	2,38  0,18	1,00 - 6,00	3,170,25	1,00 - 8,00	0,01
Т-лимфоциты	%	60,02  2,46	29,00-90,00	64,721,77	37,00-91,00
Т-лимфоциты	10⁹/л	1,57  0,16	0,45 - 5,04	1,810,13	0,37 - 5,99
Т-лимфоциты акт.	%	57,80  2,44	19,00-90,00	64,961,85	26,00-90,00	0,02
В-лимфоциты	%	18,61  1,67	5,00 - 52,00	19,121,58	7,00 - 53,00
В-лимфоциты	10⁹/л	0,47  0,06	0,08 - 2,65	0,540,06	0,05 - 1,89
Фагоцитарный индекс	%	60,072,24	30,00-90,00	65,821,77	30,00-88,00	0,04
Фагоцитарное число		5,460,27	2,00 - 10,50	6,320,24	8,20 - 12,00	0,02
Количество активных фагоцитов		1,800,12	0,56 - 4,10	1,840,15	0,58 - 6,92
Циркулирующие иммунные комплексы	у.е.	32,203,08	2,00 - 80,00	31,22,61	2,80 - 82,00
Ig A	г/л	1,130,10	0,19 - 4,46	1,070,05	0,11 - 2,22
Ig G	г/л	12,90,53	4,26 - 23,60	11,550,58	5,61 - 25,32
Ig M	г/л	1,030,08	0,23 - 3,58	1,170,08	0,34 - 3,92

В БОФ-положительных образцах достоверно ниже значения по числу лимфоцитов, моноцитов, активированных Т-лимфоцитов и показателей фагоцитоза. Полученные результаты свидетельствуют о том, что БОФ объективно отражают снижение активности иммунитета и могут быть использованы на первом этапе профилактического обследования.

Результаты исследования СБАГ параллельно с маркером апоптоза - DR 5 и двумя маркерами воспаления - макрофагальным белком воспаления MIP-1β и СРП в 91 образце сыворотки крови детей больных воспалительными заболеваниями почек и легких (гломерулонефрит, пиелонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит, липоидный нефроз, хроническая почечная недостаточность, инфекция мочевых путей, цистит, обструктивный бронхит, бронхиальная астма средней и тяжелой степеней тяжести) свидетельствуют о том, что все белки острой фазы связаны с разными патогенетическими звеньями и могут иметь значение взаимно дополняющих диагностических факторов. MIP-1β и СБАГ имеют наибольшую прямую корреляционную связь, а СБАГ и DR5 - наибольшую обратную корреляцию, что может быть связано с регуляцией иммунного ответа, так как СБАГ обладает иммуномодулирующими свойствами.

ВЫВОДЫ

Установлено, что электрофоретическая подвижность в геле и объем элюции при гель-хроматографии на сефадексе, отношение к осаждающим агентам СБАГ не соответствуют молекулярной массе этого белка (365 кДа): его присутствие выявляется во фракциях «тяжелых белков». Получены прямые доказательства межмолекулярных взаимодействий СБАГ с МГ и ТБГ по достоверному (р<0,05) изменению скорости распределения указанных белков в носителях после воздействия детергентов на нативную смесь.
При анализе аминокислотной последовательности полипептидных цепей СБАГ и МГ показаны высокий процент неполярных аминокислот (39 и 46% соответственно) и наличие аналогичных звеньев гидрофобных радикалов (ГР), вероятно участвующих в формировании пространственной конформации белка, а также отдельно расположенных ГР, которые могут обеспечивать межмолекулярные взаимодействия или эффект прилипания на поверхности молекулы.
Разработан новый рациональный способ выделения и очистки СБАГ из исходного биоматериала с использованием раствора мочевины для устранения межмолекулярных взаимодействий СБАГ с ТБГ и МГ, а также аффинной хроматографии на эстрадиол-сефарозе с триазиновой вставкой.
Выявлено, что иммунофлюоресцентным методом СБАГ обнаруживается в зрелой плаценте в симпласте ворсин хориона, в толстом кишечнике в эпителии крипт, в аппендиксе в области базальной мембраны, в печени в прослойках междольковой соединительной ткани, в тканях нормального и патологически измененного эндометрия. Аденокарциноматоз существенно влияет на содержание СБАГ в органе и, соответственно, на его синтез в зависимости от органа и различной степени малигнизации. Вероятно, при канцерогенезе в клетке увеличивается содержание факторов, выполняющих роль индукторов дерепрессии структурного гена СБАГ.
Показано, что СБАГ в редких случаях может быть выявлен в амниотической жидкости, а при воспалении и опухолях в бронхиальном секрете и в маточном смыве. Разница в частоте выявления СБАГ в крови по полу более выражена в детском возрасте: у женщин выше в 1,5-2 раза, чем у мужчин, а у девочек раннего возраста в 4 – 7 раз по сравнению с мальчиками.
Установлено, что СБАГ имеет в крови обезьян полностью идентичный белок, а ТБГ – аналог с низким числом общих детерминант. Уровень СБАГ в некоторых образцах небеременных самок, сопоставимый с концентрацией его у беременных обезьян (20 мг/л), может быть основой для обсуждения эволюционных изменений иммунореактивности организма: ТБГ является более молодым белком в филогенетическом смысле, чем СБАГ, выполняющий важную биологическую роль при вынашивании материнским организмом плода.
Выявлена корреляция между уровнем СБАГ и иммуноглобулинами классов A и G, а также экспериментально доказан иммуносупрессивный эффект СБАГ in vivo на формирование первичного иммунного ответа у мышей, иммунизированных внутрибрюшинно эритроцитами барана. В дозе 25 мг/кг ТБГ снижает число АОК на 59,21 %, СБАГ – на 11,51%. Установлено также, что СБАГ имеет однонаправленные изменения с противовоспалительными цитокинами и разнонаправленные с провоспалительными цитокинами и маркером готовности к апоптозу.
Выявлены сродство СБАГ и ТБГ к гормональным компонентам сорбентов, содержащим эстрогены и, зависимость уровня СБАГ в крови больных с онкогинекологическими заболеваниями от гормонотерапии. Феномен сродства СБАГ к стероидам может быть использован при выделении и очистке белков беременности.
Установлено, что СБАГ является минорным белком сыворотки крови, продукция которого возрастает при ряде физиологических и патологических состояний: воспалении, опухолях, системных заболеваниях у взрослых и детей. Причем, в некоторых случаях (ревматизм, гломерулонефрит и т. д.) его уровень повышается на один-два порядка по сравнению с концентрацией в крови здоровых лиц и достигает величин, сопоставимых с уровнем этого белка при беременности.

^ СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Трубников Г.А., Никулина Д.М., В.И.Балашов и другие. Роль иммунохимических проб на альфа₂-глобулин и гамма-фрагмент фибриногена в диагностике вялотекущего ревматизма. Тезисы Всероссийской научной конференции в Иванове. – 1972. - С.44.
Трубников Г.А., Никулина Д.М. Оценка иммунохимического теста на альфа₂- глобулин при ревматизме. Тезисы 55-й научной сессии АГМИ, Астрахань. – 1973. - С.152-153.
Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И., Рагозин Ю.Е., Кривоносов С.К. Клинико-иммунохимические исследования некоторых острофазовых протеинов при ревматизме // Терапевтический архив. – 1975. №11. - С.55-61.
Трубников Г.А., Никулина Д.М., Кучерова Т.П. и другие Значение некоторых клинических, биохимических и иммунохимических показателей активности ревматического процесса Сборник «Ишемическая болезнь сердца и ревматизм», Волгоград, 1975. – С.120-132.
Л.М.Лунева, В.В.Бочановский, Д.М Никулина и другие. Активносекрктируемые тканевые антигены в сыворотке крови больных лепрой Ученые записки института по изучению лепры, Астрахань. – 1976. – 9 (14). - С.197-200.
Прошина П.П., Никулина Д.М. К вопросу об изучении острофазовых белков и иммуноглобулинов у больных хроническим колитом Труды 2-го Всесоюзного съезда гастроэнтерологов, Л. – 1978. - т.2. - С.430-431.
Трубников Г.А., Грачева Л.Н., Никулина Д.М. и другие. Тканевая антигенемия и вопросы диагностики активности ревматического процесса Сборник тез. докл. 60-ой Юбилейной научной сессии АГМИ. – 1978. - С.36.
Афанасьева А.В., Грачева Л.Н., Никулина Д.М. Липсон Э.Д., Парфенова Л.Ф., Меснянкина Н.В.. Канцероплацентарные антигены при патологии беременности. Сборник «Энзимология новообразований», Саратов, 1981. - С.81-88.
Никулина Д.М., Трубников Г.А., Афанасьева А.В. Яценко К.С., Сухарев А.Е. Сравнительное изучение острофазовых белков в сыворотке крови больных со злокачественными и неопухолевыми заболеваниями легких Сборник «Маркеры опухолей», Саратов. – 1981. - С.64-71.
Николаев А.А., Никулина Д.М. Антонов Н.М., Острофазовые протеины в диагностике опухолей предстательной железы // Лабораторное дело. – 1981. – 4. - С.230-232.
Никулина Д.М., Костина Л.А., Вереина Т.Л., Толстых В.В., Краморенко В.А. К вопросу о биологической роли трофобластического бета-1-глобулина и клиническом значении теста на этот белок. Краткие тезисы докладов к 64-й итоговой научной сессии АГМИ. – 1983. - С.41.
Трубников Г.А., Никулина Д.М., Балашов В.И.. Значение иммунохимических тестов на острофазовые белки в оценке эффективности лечения больных с неспецифическими заболеваниями легких. Тезисы к Республиканской конференции «Новые методы диагностики и реабилитации больных НЗЛ», М.-Барнаул. – 1985 - т.1. - С.163-164.
Никулина Д.М. Тезисы докладов к научной конференции «Медицинские проблемы биохимии», Кемерово. - 1985, С.9-11.
Никулина Д.М. Воробьева Т.Б., Костина Л.А., Шульгина А.П. Теоретические и практические аспекты изучения альфа₂-глобулина, связанного с беременностью. Тезисы V Всесоюзного биохимического съезда, М. - 1986- т.2.- С.288-289.
Жучкова Л.И., Никулина Д.М. Значение иммунохимического определения некоторых белков сыворотки крови при туберкулезе у детей. Тезисы докладов Х Всесоюзного съезда фтизиатров, Киев. – 1986. - С.80.
Никулина Д.М., Г.А.Трубников, Л.И.Жучкова. Связанный с беременностью альфа₂-гликопротеин сыворотки крови как один из показателей реактивности организма у больных с заболеваниями легких. Сборник научных трудов «Реактивность организма и антигенность соединительной ткани при туберкулезе и нетуберкулезных заболеваниях легких», Саратов. – 1986. - С.86-91.
Дербенева Л.И., Никулина Д.М. Клиническая оценка иммунохимического теста на связанный с беременностью альфа₂-гликопротеин как показателя острой фазы ревматизма у детей // Вопросы охраны материнства и детства. – 1986. – №12. - С.28-31.
Жучкова Л.И., Никулина Д.М. Винник Л.А., Трубников Г.А. Концентрация связанного с беременностью альфа₂-гликопротеина сыворотки крови у больных с различными заболеваниями легких // Проблемы туберкулеза. – 1987. - №3. - сС.57-59.
А.Е.Сухарев, Г.А.Трубников, Н.А.Талукдер, Никулина Д.М., Л.И.Жучкова. Иммунохимическое изучение сывороточных острофазовых белков и тканевых протеинов в мокроте при специфической и неспецифической легочной патологии. Тезисы докладов V1 Всероссийского съезда фтизиатров, Кемерово. – 1987. - С.160-161.
Никулина Д.М. Подходы к выделению и очистке связанного с беременностью альфа₂-гликопротеина Тезисы докладов 68-й итоговой научной сессии сотрудников АГМИ и областной научно-практич. конференции врачей, Астрахань. – 1987. - С.201-202.
Белопасова Н.А., Никулина Д.М. Клиническое значение связанного с беременностью альфа₂-гликопротеина при заболеваниях легких у детей. Сборник научных работ «Профилактика, диагностика, лечение бронхолегочных заболеваний у детей», Саратов. – 1987. - С.25-28.
Макаревич А.Я., Прошина П.П., Никулина Д.М. Острофазовые белки и иммуноглобулины у больных хроническим колитом Хронические болезни кишечника. Республиканский сборник научных трудов под ред. проф. А.Р.Златкиной, М. – 1987. - С.56-64.
Трубников Г.А., Никулина Д.М., Грачева Л.Н., Николаева Н.Н. Клиническое значение иммунохимического исследования сывороточных и тканевых белков в мокроте при легочной патологии // Терапевтический архив. – 1988. – 12. - С.66-70.
Никулина Д.М., А.П.Шульгина, Ю.Е.Рагозин, А.А.Терентьев, Ю.А.Калинин. Определение биологической роли связанного с беременностью альфа₂-гликопротеина Тезисы докладов итоговой научной сессии сотрудников АГМА и областной научно-практической конференции врачей, Астрахань. 1988. - С.181-182.
Никулина Д.М. Колебания уровня связанного с беременностью альфа₂-гликопротеина сыворотки крови при воспалительных заболеваниях Тезисы докладов итоговой научной конференции «Биохимия – медицине (молекулярные механизмы формирования патологических состояний)», Ленинград. – 1988. С.147-148.
Никулина Д.М., Аншакова Н.И., Белопасова Н.А., Малометов А.В. Сравнительное изучение острофазовых белков в сыворотке крови детей, проживающих в особо контролируемой зоне Астраханского газового комплекса /АГК/. Тезисы региональной конференции «Экологические проблемы Волги», Саратов, 1989. C.81.
Nikulina D.M., Nikolaev AA., Volodin M.A. Reproductive system antigen in the diagnosis of cancer Abstract book XVII-th Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine, Freiburg. – 1989. - P.79.
Nikulina D.M., Shvarev E.G., Vorobyeva T.B. The defection of pregnancy-associated alpha-2-glycoprotein in oncologic patient’s body fluids. Abstract book XVIII-th Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine, Moscow, 1990. P. 261-263.
Никулина Д.М., Рагозин Ю.Е., Кривенцев Ю.А. Иммунохимическая характеристика фракции «тяжелых» глобулинов сыворотки крови беременных женщин. Тезисы докладов областной научно-практической конференции сотрудников Мединститута и врачей Астраханской обл., Астрахань, 1990. - C.261-263.
Никулина Д.М., Шульгина А.П., Аншакова Н.И., П.А.Иванов. Иммунохимическое изучение некоторых компонентов крови у лиц, работающих на Астраханском газовом комплексе. Тезисы докладов областной научно-практической конференции сотрудников Мединститута и врачей Астраханской обл., Астрахань. – 1990. - C. 271-272.
Nikulina D.M., Trubnikov G.A., Derbeneva L.A. Diagnostic and pathogenetic role of pregnancy-associated alpha₂-glycoprotein /a-2-PAG/ in inflammation. Interscience World conference of inflammation Geneva, 1991, P.106.
Белопасова Н.А., Д.М.Никулина, Касаткина Т.И. Диагностическая ценность связанного с беременностью альфа₂-гликопротеина как показателя активности воспалительного процесса при рецидивирующих и хронических заболеваниях легких у детей. Тезисы докладов Всероссийской научной конференции «Современные проблемы диагностики и лечения хронических неспецифических заболеваний легких у детей», М.-Нальчик. – 1991. С. 9-10.
Никулина Д.М. Иммунохимические тесты в диагностике и оценке эффективности лечения воспалительных заболеваний. Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума с международным участием «Патогенез хронического воспаления», Новосибирск. – 1991 - С. 175-176.
Никулина Д.М, Белопасова Н.А., Аншакова Н.И., Шульгина А.П., Иванов П.А., Малометов А.В. Значение ряда иммунохимических тестов в формировании групп риска по воспалительной патологии // Лабораторное дело. - 1991. - №1.- С. 23-27.
Никулина Д.М. Изучение сывороточных иммуноглобулинов и ОФБ у практически здоровых мужчин Тезисы докладов 1 съезда иммунологов России, Новосибирск. - 1992. С. 334-335.
Nikulina D.M., Trubnikov G.A., Vorobyeva T.B. Diagnostic range of pregnancy-associated alpha₂-glycoprotein /a2-PAG/ immunochemical test Abstract 1-st International Conference on Immunoreabilitation, Sochi. – 1992. - P. 54.
Nikulina D.M., Vorobjeva T.B., Ivanov P.A. Pregnancy-associated alpha-2-glycoprotein /a2-PAG/ is the humoral immunity component. // Abstracts book of the 22-rd Meeting of the Federation of European Biochеmical Societies (FEBS.), Stockholm, 1993, № 304/809.

Blog

Минорный белок сыворотки крови связанный с беременностью альфа 2 -гликопротеин: теоретические и практические аспекты 03. 00. 04. Биохимия

Содержание