Мусієнко М. М., Панюта О. О. Біотехнологія рослин. Навчальний посібник
| Вид материала | Документы |
СодержаниеКультивування ізольованих протопластів |
- Ослин навчальний посібник до лабораторних занять з фізіології рослин для студентів, 2678.12kb.
- Удк 581. 8 (075. 8) Брайон О. В., Панюта О. О., Паршикова Т. В., Славний, 518.84kb.
- Практикум з педагогіки вищої школи: Навчальний посібник за модульно-рейтинговою системою, 411.72kb.
- Дмитриченко М. Ф., Навчальний посібник, 2529.95kb.
- Дмитриченко М. Ф., Навчальний посібник, 2842.03kb.
- Наталя Чабан навчальний посібник з історії української культури мвс україни, 9171.9kb.
- Програма вступних фахових випробувань за спеціальністю «фізіологія рослин» освітньо-кваліфікаційний, 164.35kb.
- Рекомендовано Міністерством освіти України як навчальний посібник для студентів архітектурних, 1979.84kb.
- Т. Г. Сабірзянов Печі ливарних цехів. Гриф «Навчальний посібник», 375.04kb.
- Н. М. Борівська Навчальний посібник містить цікавий матеріал стосовно урок, 283.61kb.
КУЛЬТИВУВАННЯ ІЗОЛЬОВАНИХ ПРОТОПЛАСТІВ
Способи культивування ізольованих протопластів відповідають тим, що використовують для вирощування клітин. Протопласти культивують у рідкому і агаровому середовищах (табл.6).
Одним із прийомів культивування ізольованих протопластів у рідкому середовищі є метод рідких крапель. У цьому разі суспензію протопластів у вигляді крапель поміщають на рідке середовище в чашках Петрі. Метод забезпечує хороший газообмін. Однак при культивуванні цим способом ізольовані протопласти агрегуються у центрі кожної краплини, накопичуючись вони утворюють значні кількості фенольних та інших токсичних сполук, що заважає нормальному культивуванню протопластів.
Другий спосіб культивування ізольованих протопластів - агарова культура або метод плейтінга. У цьому випадку певний об’єм суспензії протопластів у рідкому живильному середовищі наливають у чашки Петрі, додають рівний
Таблиця 6
Склад (мг/л) середовищ для культивування протопластів
| Компоненти середовища | Гамборга та Евелега | Мурасиге і Скуга | Нагате і Такебе | Шенка і Хільде-брандта |
| NH4NO3 | | 1650 | 825 | |
| KNO3 | 2500 | 1900 | 950 | 2500 |
| CaCl22H2O | 150 | 440 | 220 | 200 |
| MgSO47H2O | 500 | 370 | 1233 | 500 |
| NaH2PO4 | 150 | | | 300 |
| (NH4)2SO4 | 134 | | | |
| KH2PO4 | | 170 | 680 | |
| FeSO47H2O | 27,25 | 27,85 | 27,8 | 27,85 |
| Na2EDTA .2H2O | 37,25 | 37,25 | 37,3 | 37,3 |
| H3BO3 | 3 | 6,2 | 6,2 | 5 |
| ZnSO47H2O | 2 | 8,6 | 8,6 | 1 |
| CuSO45H2O | 0,025 | 0,025 | 0,025 | 0,2 |
| CoCl26H2O | 0,025 | 0,025 | 0,03 | 0,1 |
| KI | 0,75 | 0,83 | 0,83 | 1 |
| Na2MoO42H2O | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,1 |
| MnSO4H2O | 10 | 22,3 | 22,3 | 10 |
| Iнозит | 100 | 100 | 100 | 100 |
| PP | 1 | | | 5 |
| В1 | 10 | 1 | 1 | 5 |
| В6 | 1 | 1 | | 0,5 |
| Ca-пантотенат | 1 | 1 | | 5 |
| Кінетин | | 5 | | 0,1 |
| НОК | | 1 | 3 | |
| 2,4-Д | 2 | | | 1 |
| Сахароза | 20000 | 30000 | 10000 | 30000 |
| Маніт | | | 0,7 M | |
| | | | | |
| pH | 5,5 | 5,5 | 5,8 | 5,6 |
об’єм того ж самого середовища, яке містить 1% агару. Температура не вища 450С. Чашки Петрі заклеюють парафілмом і культивують перевернутими при температурі близько 280С.
Протопласти фіксовані в одному положенні і фізично відокремлені один від одного. Основна перевага, цього способу культивування це можливість спостерігати для кожного конкретного протопласта всю послідовність розвитку – формування клітинної стінки, поділ клітин, ріст і розвиток рослини. Недолік полягає у можливому пошкодженні протопластів коли вони змішуються з агар-агаром.
Різновидністю агарової культури є сумісні культури. Цей спосіб використовується для ефективного культивування деяких протопластів. Протопласти, які відрізняються швидким ростом, змішують з протопластами, які важко культивувати. Вважають, що успішне культивування обумовлене речовинами, які виділяють протопласти, що швидко ростуть.