Учебное пособие составлено в соответствии с программой по биохимии для студентов всех факультетов медицинских вузов. Оно предназначено для самостоятельной подготовки студентов и оптимизации их работы на практических занятиях
| Вид материала | Учебное пособие |
- Предлагаемое учебное пособие предназначено для студентов, аспирантов и преподавателей, 2052.38kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов ставрополь 2007, 1394.43kb.
- Учебное пособие по дисциплине «Сестринское дело в хирургии» составлено в соответствии, 2118.11kb.
- Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов интернов по специальности, 390.76kb.
- Учебное пособие томск 2009, 1504.09kb.
- Учебное пособие Чебоксары 2007 удк 32. 001 (075. 8) Ббк ф0р30, 1513.98kb.
- Учебное пособие М.: Педагогическое общество России. 1999 442, 5623.86kb.
- Учебное пособие для самостоятельной работы студентов специальности 040600 «Сестринское, 1354.95kb.
- Новые поступления в библиотеку экономическая теория, 225.89kb.
- Учебное пособие Ставрополь 2005 удк 577. 1 (075. 8) Бкк 28. 072, 277.1kb.
ЗАНЯТИЕ 6
СТРОЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ. ВИТАМИНЫ КАК УЧАСТНИКИ
ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ.
БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Витамины являются необходимым компонентом питания для каждого человека. Витамины являются кофакторами целого ряда сложных ферментов, кроме того, некоторые витамины непосредственно участвуют в химических реакциях. В организме человека большинство витаминов синтезироваться не может. Поэтому витамины должны поступать в необходимом количестве с пищей. Доза витаминов, потребляемая с пищей, должна соответствовать суточной потребности в данном витамине. Как недостаток, так и избыток того или иного витамина приводит к нарушению обмена веществ (гипо-, гипер- или авитаминозу).
Работа 1. Открытие апофермента и кофермента в аспартат-аминотрансферазе.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
В сложных белках-ферментах белковый компонент (апофермент) может быть обнаружен с помощью биуретовой реакции. Небелковый компонент, содержащий производное какого-либо витамина, может быть открыт с помощью качественных реакций на соответствующий витамин. В состав аспартатаминотрансферазы входит в качестве кофермента пиридоксальфосфат - производное витамина В6. Витамин В6 (пиридоксол) и его производные бесцветны, но приобретают красную окраску в присутствии хлорного железа. Реакция обусловлена образованием комплексной соли типа фенолята железа.
ХОД РАБОТЫ.
1. Открыть белковую часть фермента с помощью биуретовой реакции. (См. протокол занятия №3).
2. Открыть кофермент с помощью качественной реакции на витамин В6. В пробирке смешать 5 капель раствора аспартатаминотрансферазы и 1 каплю 5% раствора хлорного железа. Встряхнуть. Появляется вишневое окрашивание.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОД:
Работа 2. Количественное определение аскорбиновой кислоты в различных пищевых продуктах.
ОБОРУДОВАНИЕ: весы с разновесами, бюретки для титрования.
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Метод основан на окислении аскорбиновой кислоты в дигидроаскорбиновую кислоту 2,6-дихлорфенолиндофенолом, который в кислой среде восстанавливается в бесцветное лейкосоединение.
ХОД РАБОТЫ.
Исследуемый продукт взвесить на весах (см. таблицу). Навеску измельчить вначале в сухой ступке, а затем с добавлением воды (см. таблицу). Образуется экстракт, в котором содержание витамина С соответствует его содержанию в навеске продукта. Полученный экстракт отфильтровать через ватный фильтр и набрать необходимое количество фильтрата в колбу для анализа (см. таблицу).
| Исследуемый продукт | Навеска или объем продукта для анализа (В) | Кол-во воды для экстракции (Г) | Кол-во экстракта для титрования (Б) | Содержание вит. С (мг%) | Кол-вопродукта (г, мл) |
| Лук репчатый | 5 г | 20 мл | 1 мл экстракта + 5 мл воды | | |
| Настой шиповника | | | 1 мл настоя + 10 мл воды | | |
| Капуста свежая | 5 г | 20 мл | 10 мл | | |
| Капуста квашеная | 10 г | 20 мл | 10 мл | | |
| Сок квашеной капусты | | | 1 мл сока + 5 мл воды | | |
| Лимонная мякоть | 1 г | 10 мл | 5 мл | | |
| Лимонная корка | 1 г | 10 мл | 5 мл | | |
| Яблоко печеное | 5 г | 10 мл | 1 мл экстракта+ 10 мл воды | | |
| Яблоко | 5 г | 10 мл | 5 мл экстракта+ 5 мл воды | | |
| Яблочный сок | | | 5 мл сока +5 мл воды | | |
| Картофель вареный | 5 г | 10 мл | 1 мл экстракта+ 10 мл воды | | |
| Картофель сырой | 1 г | 10 мл | 5 мл экстракта+ 5 мл воды | | |
| Кабачок | 1 г | 10 мл | 5 мл экстракта+ 5 мл воды | | |
| Сок ананасовый | | | 5 мл экстракта+ 5 мл воды | | |
| Сок персика | | | 5 мл экстракта+ 5 мл воды | | |
| Драже поливит.1 | 1 драже | 50 мл | 1 мл экстракта +5 мл воды | | |
К заданному количеству фильтрата при необходимости добавить дистиллированную воду (см. таблицу и добавить 1мл 2% раствора НСL , после чего титровать 2,6 дихлорфенолиндофенолом (2,6-ДХФИФ) до появления слабо-розового окрашивания. Необходимо отметить, сколько мл раствора 2,6-ДХФИФ пошло на титрование.
Расчет содержания аскорбиновой кислоты необходимо провести на 100 г плотного продукта, либо на 100 мл жидкого продукта (в мг %). Для расчета используют формулу:
где: Х - содержание аскорбиновой кислоты в продукте (в мг%),
0,088 - титр аскорбиновой кислоты для 2,6-дихлорфенолиндофенола,
А - результат титрования (кол-во мл 2,6-дихлорфенолиндофенола),
Б - объем экстракта для титрования (мл) без учета воды,
В - навеска (г) или объем (мл) продукта для анализа,
Г - общее количество экстракта (мл),
100 - цифра, необходимая для пересчета содержания аскорбиновой кислоты на 100 г (мл) продукта.
Вычислив содержание аскорбиновой кислоты, необходимо рассчитать количество данного продукта (в г или мл), необходимое для покрытия суточной потребности в витамине С (50-100 мг).
РЕЗУЛЬТАТЫ заносят в правые столбцы таблицы.
ВЫВОД: