Новые подходы к фармакокоррекции неспецифических составляющих патогенеза токсических поражений 14. 00. 25 фармакология, клиническая фармакология 14. 00. 16 патологическая физиология
| Вид материала | Автореферат диссертации |
- Клиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим, 462.25kb.
- «Клиническая фармакология» Специальность: 111201 Ветеринария Пояснительная записка, 94.74kb.
- Календарно-тематический план лекций элективного курса «Клиническая фармакология в акушерстве», 28.46kb.
- «Экспериментальная и клиническая фармакология» журнал к сведению, 84.61kb.
- Программа вступительных испытаний для специальности магистратуры 1-79 80 10 Фармакология,, 197.39kb.
- Антиметастатическая активность препаратов природного происхождения 14. 00. 25 фармакология,, 1023.15kb.
- Оптимизация фармакотерапии плоского лишая 14. 00. 25. фармакология, клиническая фармакология, 214.56kb.
- Оптимизация противотромботической терапии острого инфаркта миокарда 14. 00. 06 кардиология, 862.58kb.
- Лекарственные растительные средства в профилактике респираторных заболеваний у детей, 439.68kb.
- Типовые учебный план и программа для клинических ординаторов по специальности «клиническая, 656.73kb.
Статистический анализ результатов
Анализ результатов проводили с использованием пакета статистических программ реализованных в Windows 2000/XP: Statistica 6.0 (StatSoft), Pharmacologic Calculation System 4.1. Использовали параметрические и непараметрические методы анализа. Различия между группами считали достоверными при уровне значимости p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Антиокислительную активность бемитила и других производных бензимидазола исследовали на двух модельных системах свободнорадикального окисления различной сложности. Активность соединений в системе «этилбензол-ледяная уксусная кислота» оценивали по величине константы К7 (характеризует антирадикальную активность препаратов), которую сопоставляли с константой К7 ионола – известного синтетического ингибитора свободнорадикальных реакций. Показано, что бемитил, этомерзол и соединение Б-16 проявляют выраженную антирадикальную активность (табл. 1). Наиболее активными препаратами в данной модельной системе являются этомерзол и соединение Б-16, которые по способности ингибировать инициированное окисление этилбензола не уступали ионолу (ионольный эквивалент - 0,64 и 0,65, соответственно). Тиетазол и диэтиксим не проявляли антиокислительной активности в данной модельной системе.
Активность препаратов также оценивали в модельной системе с использованием гомогената печени крыс, оценивая влияние препаратов (через 1, 2, 3 и 4 часа после инкубации) на процессы свободно-радикального перекисного окисления липидов при спонтанном, неферментном (Fe2+ аскорбатзависимом) и ферментном ПОЛ.
Таблица 1
Антирадикальная активность препаратов, оцененная на модельной системе инициированного окисления этилбензола
-
Препарат
Антирадикальная активность, К7 (л/моль) с
Ионольный эквивалент
Бемитил
(1,00,3) ∙103
4,5∙10-2
Этомерзол
(1,40,1) ∙104
0,6
Соединение Б-16
(1,50,2) ∙104
0,65
Тиетазол
0,0
-
Диэтиксим
(8,12,0) ∙101
3,5∙10-3
Ионол
(2,30,6) ∙104
1,0
В условиях аскорбатзависимого и ферментного ПОЛ антиоксидантная активность бемитила не уступала этомерзолу и соединению Б-16. В условиях автоокисления (система спонтанного ПОЛ) этомерзол был несколько активнее бемитила (препараты ингибировали ПОЛ на 73% и 62%, соответственно). Препараты незначительно уступали ионолу по способности ингибировать свободно-радикальное ПОЛ (51% - 73%, против 75% - 100% под действием ионола). Тиетазол практически не влиял на процессы ПОЛ.
Таблица 2
Антиокислительная активность препаратов, оцененная на модельной системе перекисного окисления липидов печени крыс
| Препарат (соединение) | Антиокислительная активность, % | ||
| Спонтанное ПОЛ | Неферментное ПОЛ | Ферментное ПОЛ | |
| Бемитил | 62 | 51 | 67 |
| Этомерзол | 73 | 55 | 67 |
| Соединение Б-16 | не определяли | 62,5 | 68 |
| Тиетазол | не определяли | 20,8 | 10,5 |
| Ионол | 100 | 100 | 75 |
Таким образом, в различных модельных системах показана высокая антирадикальная и антиокислительная активность бемитила и других производных бензимидазола – этомерзола и соединения Б-16.
В условиях острого смертельного отравления экспериментальных животных нитритом натрия, введение мышам бемитила в дозе 25 мг/кг (табл. 3) достоверно не увеличивает длительность жизни отравленных животных, в отличие от метиленового синего (10 мг/кг; +31,6%). Сочетанное применение бемитила (25 мг/кг) и метиленового синего (10 мг/кг) увеличивало продолжительность жизни мышей на 55% (р < 0,01).
Повышение дозы бемитила до 50 мг/кг достоверно, сравнимо с метиленовым синим, увеличивало продолжительность жизни отравленных животных. Сочетанное введение бемитила (50 мг/кг) и метиленового синего (10 мг/кг) приводило к выраженному потенцированному эффекту и увеличивало длительность жизни мышей в 2,1 раза (p < 0,001).
Таблица 3
Влияние бемитила и его комбинации с метиленовым синим или цистамином на продолжительность жизни мышей при острой нитритной интоксикации.
-
Препараты
n
Время жизни, мин
M±m
%
1 серия
Нитрит натрия
Бемитил (25 мг/кг)
Метиленовый синий (10 мг/кг)
Бемитил(25мг/кг)+метиленовый синий(10 мг/кг)
12
12
12
12
12,0±0,85
13,2±1,34
15,8±0,82 *
18,6±1,22 **
100
110
131,6
155
2 серия
Нитрит натрия
Бемитил (50 мг/кг)
Метиленовый синий (10 мг/кг)
Бемитил(50 мг/кг)+метиленовый синий(10 мг/кг)
12
12
12
12
12,0±0,85
15,6±0,56 *
15,8±0,08 *
25,2±2,30 ***
100
130
131,6
210
3 серия
Нитрит натрия
Бемитил (50 мг/кг)
Цистамин (50 мг/кг)
Бемитил(50 мг/кг)+цистамин (50 мг/кг)
10
10
10
10
11,2±0,62
16,4±1,23 **
15,8±0,66 *
24,5±2,08 ***
100
149
141
218,7
Примечание: *, **, *** – статистически достоверное различие (p < 0,02, p < 0,01, p < 0,001, соответственно) с группой «нитрит натрия»
Бемитил (50 мг/кг) сравнимо с антидотом цистамином (50 мг/кг) увеличивал длительность жизни отравленных животных на 49% и 41% соответственно. Сочетанное введение бемитила и цистамина увеличивало длительность жизни мышей в 2,2 раза (p < 0,001).
Показано, что в условиях острой гемической гипоксии, вызванной введением смертельной дозы нитрита натрия, бемитил потенцирует защитный эффект деметгемоглобинообразователей – метиленового синего и цистамина.
В условиях метгемоглобинемии, вызванной длительной нитритной интоксикацией в качестве антидота использовали цистамин, который имеет большую по сравнению с метиленовым синим широту терапевтического эффекта. Другим преимуществом цистамина является возможность его использования в таблетированной форме для перорального применения.
В условиях длительной нитритной интоксикации на 15 и 30 сутки эксперимента содержание метгемоглобина у крыс составляет соответственно 45,02,15% и 42,62,60% от общего гемоглобина. Введение крысам бемитила не оказывало существенного влияния на динамику образования и разрушения метгемоглобина, поскольку его уровень в крови отравленных крыс существенно не изменялся в указанные сроки тестирования. В то же время применение цистамина, обладающего деметгемоглобинизирующим действием, статистически достоверно снижает содержание метгемоглобина на 15-е и 30-е сутки опыта соответственно до 67,0% и 79,3% от аналогичного показателя в контроле (табл. 4).
Таблица 4
Уровень метгемоглобина крови крыс в условиях длительной нитритной интоксикации (в % к общему гемоглобину)
| № | Группы крыс | Статистический показатель | Время эксперимента | |
| 15-е сутки | 30-е сутки | |||
| 1 | Нитрит натрия | M m % | 45,02,15 100 | 42,62,60 100 |
| 2 | Бемитил | M m % | 43,01,90 95,7 | 40,02,16 94,5 |
| 3 | Цистамин | M m % | 30,22,90* 67,0 | 33,82,17* 79,3 |
Примечание: * – статистически достоверное различие (p < 0,05) с группой «нитрит натрия»
Хроническое отравление нитритом натрия сопровождается накоплением диеновых конъюгатов (ДК) в эритроцитах, ДК и оснований Шиффа в полушариях головного мозга и печени крыс, а также снижением активности ферментов антиоксидантной защиты, что свидетельствует о сдвигах в системе регуляции свободно-радикального окисления липидов (табл. 5 и 6).
Сочетанное введение бемитила и цистамина полностью предупреждает сдвиги прооксидантно-антиоксидантного равновесия в эритроцитах, раздельное введение крысам бемитила или цистамина менее эффективно. Комбинация бемитила и цистамина в условиях метгемоглобинемии имеет преимущество по сравнению с индивидуальными препаратами в значительной степени нормализует процессы ПОЛ, оказывает защитно-восстановительное действие на ферментативную активность в головном мозге и печени крыс.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что интенсивность ПОЛ в эритроцитах выше, чем в мозге и печени, в условиях длительной нитритной интоксикации. Это связано, вероятно, с тем, что эритроциты подвергаются прямой атаке свободнорадикальных метаболитов, возникающих при окислении гемоглобина нитрит-ионом, в то время как в мозге и печени усиление липопероксидации присходит, скорее всего, за счет другого патогенетического механизма, а именно: развивающейся гипоксии и токсического стресса, нарушающих клеточный метаболизм.
Таблица 5
Влияние бемитила, цистамина и их комбинации на прооксидантно-антиоксидантное равновесие в эритроцитах крыс в условиях длительной нитритной интоксикации
| Показатели | Группы крыс, n = 8-10 | Сутки эксперимента | |
| 15-е | 30-е | ||
| ДК, нМоль/г Нb | Интактные крысы Нитрит натрия Бемитил Цистамин Бемитил + цистамин | 86,2±4,0 156,3±0,5* 120,9±12,4* ** 124,1±13,2* ** 90,8±6,5** | 86,2±4,0 179,4±7,3* 130,2±9,3* ** 129,9±9,0* ** 99,5±7,2** |
| СОД, усл ед/мг Нb | Интактные крысы Нитрит натрия Бемитил Цистамин Бемитил + цистамин | 1,04±0,04 1,00±0,03 1,01±0,03 0,98±0,04 - | 1,02±0,03 0,89±0,03* 0,90±0,12 0,91±0,48 1,04±0,04** |
| Каталаза, мМоль в мин/г Нb | Интактные крысы Нитрит натрия Бемитил Цистамин Бемитил + цистамин | 32,4±1,19 24,6±0,93* 31,3±1,04** 24,7±0,78* 31,8±1,20** | 31,5±0,92 20,1±1,20* 28,5±1,10** 23,0±1,07* 30,2±0,90** |
| Гл-6-ФДГ, нМоль в мин/мг Нb | Интактные крысы Нитрит натрия Бемитил Цистамин Бемитил + цистамин | 15,2±0,56 11,7±0,47* 13,3±0,50* ** 12,8±0,47* 11,2±0,48** | 14,6±0,56 12,7±0,49* 13,2±0,52 14,8±0,44** 14,8±0,52** |
Примечания: * – статистически достоверное различие (р < 0,05) с группой «интактные
крысы»; ** – с группой «нитрит натрия»
Окислительный стресс и лидирующее его проявление – активация ПОЛ – важное и малоисследованное звено в патогенезе тяжелых отравлений ФОС. ФОС обладают выраженным мембранотоксическим действием. Продукты ПОЛ оказывают дестабилизирующее действие на структурно-функциональное состояние биологических мембран, что выражается в нарушении их основных физико-химических свойств – проницаемости, вязкости, фазового состояния; изменяют молекулярную структуру мембраны клеток: нарушаются липид-липидные, а также липид-белковые взаимодействия, изменяется активность мембраносвязанных ферментов, в частности Na+/K+ АТФазы.
Таблица 6
Влияние бемитила, цистамина и их комбинации на прооксидантно-антиоксидантное равновесие в условиях хронической нитритной интоксикации
-
Показатели
Группы крыс, n = 8-10
Головной мозг
Печень
ДК, Д232
Интактные крысы
Нитрит натрия
Бемитил
Цистамин
Бемитил + цистамин
0,202±0,017
0,304±0,025*
0,229±0,019**
0,263±0,034
0,220±0,018**
0,454±0,022
0,672±0,039*
0,380±0,026**
0,543±0,035**
0,391±0,036**
ШО,
усл ед/мг липидов
Интактные крысы
Нитрит натрия
Бемитил
Цистамин
Бемитил + цистамин
0,16±0,01
0,24±0,02*
0,20±0,04*
0,21±0,01*
0,18±0,01**
0,390±0,025
0,570±0,040*
0,390±0,030**
0,420±0,040**
0,402±0,017**
Каталаза,
мМоль в мин/мг белка
Интактные крысы
Нитрит натрия
Бемитил
Цистамин
Бемитил + цистамин
1,12±0,045
0,75±0,040*
0,78±0,060*
0,86±0,050*
1,13±0,045**
328,0±24,0
222,0±19,0*
310,0±10,0**
254,0±19,0*
318,0±18,5**
Гл-6-ФДГ,
нМоль в мин/мг белка
Интактные крысы
Нитрит натрия
Бемитил
Цистамин
Бемитил + цистамин
19,9±0,63
20,5±1,55
18,3±1,16
23,4±1,3
-
58,3±3,1
29,4±3,4*
44,9±4,7* **
50,3±2,8**
54,2±3,5**
Примечания: * – статистически достоверное различие (р < 0,05) с группой «интактные
крысы»; ** – с группой «нитрит натрия»
Введение крысам карбофоса в дозе 0,9 LD50 снизило на 42,6% активность Na+/K+ АТФазы на 14-е сутки эксперимента у выживших животных. Армин в дозе 0,9 LD50 снижает активность фермента на 38,4% (табл. 7).
Таблица 7
Активность Na+/К+ АТФазы в мозге крыс, отравленных
фосфорорганическими соединениями (в мкМ Фн на 1 мг белка/час; n = 12)
| № | Группы крыс | Карбофос | Армин |
| 1 | Интактные крысы | 4,50,44 | 4,50,44 |
| 2 | Фосфорорганические соединения | 2,60,32* | 2,80,36* |
| 3 | Атропин (10 мг/кг) + диэтиксим (25 мг/кг) | 3,60,50 | 4,40,74 |
| 4 | Атропин (10 мг/кг) + диэтиксим (25 мг/кг) + Бемитил (50 мг/кг) | 4,20,55** | 4,60,56** |
Примечания: * – статистически достоверное различие (p < 0,05) с группой «интактные крысы»; ** – с группой «фосфорорганические соединения»
Лечение отравленных карбофосом крыс двумя антидотами ФОС (М-холиноблокатор атропин в дозе 10 мг/кг и реактиватор холинэстеразы диэтиксим в дозе 25 мг/кг) дважды внутримышечно – через 30 минут и 2 часа после введения карбофоса – несколько повысило активность Na+/K+ АТФазы до 3,60,5 мкМ Фн на 1 мг белка в час, но не восстановило активность фермента. В то же время включение в схему лечения бемитила (50 мг/кг 2 раза – на 2-е и 3-и сутки) полностью восстановило активность Na+/K+ АТФазы (табл. 7).
Введение комплекса антидотов крысам, отравленным армином, через 0,5 мин, 30 мин и 3 часа после интоксикации приводит к недостоверному увеличению активности фермента. Более эффективна комбинация антидотов с бемитилом, который применяли дополнительно на 2-е и 3-и сутки после отравления внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг. Активность Na+/K+ АТФазы в данной группе крыс была полностью восстановлена до аналогичных показателей здоровых животных (табл. 7).
Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод, что острая интоксикация крыс карбофосом (0,9 LD 50) или армином (0,9 LD50) сопровождается интенсификацией процессов ПОЛ, что выражается в резком увеличении содержания продуктов ПОЛ на 14-е сутки постинтоксикационного периода (табл. 8). При отравлении карбофосом уровень ДК повысился в полушариях мозга и миокарде на 232,2% (p < 0,05) и 278,4% (p < 0,05) от контроля соответственно, а уровень ШО на 112,5% (p < 0,05) и на 173,7% (p < 0,05). При отравлении армином содержание ДК в мозге и миокарде повысилось на 133,3% (p < 0,05) и 110,8% (p < 0,05), а содержание ШО на 162,5% (p < 0,05) и на 86,8% (p < 0,05) от уровня интактных животных соответственно.
Применение бемитила в дозе 50 мг/кг в условиях интоксикации карбофосом или армином совместно с комплексом антидотов снижает накопление ДК и ШО в полушариях мозга и миокарде через 14 суток после введения ядов в организм до уровня интактных животных.
Наряду с активацией ПОЛ в условиях тяжелых отравлений антихолинэстеразными ядами наблюдается снижение активности ферментов антиоксидантной системы организма (Сойнов Н.А., 2000; Крылова Е.В., 2003). Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что карбофос (0,9 LD50) вызывает гибель 30% крыс в течение первых суток, а в постинтоксикационном периоде оказывает выраженное действие на систему эритрона. У отравленных животных выявлено увеличение в крови содержания ретикулоцитов, снижение осмотической резистентности и электрического заряда эритроцитарных мембран, подавление активности антиоксидантной системы и увеличение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ (табл. 9).
Таблица 8
Содержание диеновых конъюгатов и оснований Шиффа в головном мозге
и миокарде крыс, отравленных фосфорорганическими соединениями
| Группы животных, условия опыта | Карбофос | Армин | ||
| Диеновые конъюгаты (Д232) | Мозг | Интактные крысы | 0,180,01 | 0,180,01 |
| Фосфорорганические соединения | 0,580,03* | 0,420,05* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) | 0,400,06* | 0,340,03* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) | 0,210,04** | 0,220,02** | ||
| Миокард | Интактные крысы | 0,370,01 | 0,370,01 | |
| Фосфорорганические соединения | 1,400,12* | 0,780,08* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) | 0,800,04* | 0,540,05* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) | 0,440,05** | 0,300,02** | ||
| Шиффовы основания (F) | Мозг | Интактные крысы | 0,160,02 | 0,160,02 |
| Фосфорорганические соединения | 0,340,02* | 0,420,04* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) | 0,280,01* | 0,370,02* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) | 0,190,01** | 0,200,02** | ||
| Миокард | Интактные крысы | 0,380,04 | 0,380,04 | |
| Фосфорорганические соединения | 1,040,06* | 0,710,04* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) | 0,840,06* | 0,580,05* | ||
| Атропин (10мг/кг) + диэтиксим (25мг/кг) + бемитил (50 мг/кг) | 0,480,03** | 0,430,02** | ||
Примечания: * – статистически достоверное различие (p<0,05) с группой «интактные крысы»; ** – с группой «фосфорорганические соединения».
Карбофос приводит к снижению активности СОД и каталазы в эритроцитах отравленных животных на 14-е сутки постинтоксикационного периода на 36,4% (p < 0,05) на 23% (p < 0,05) от контроля соответственно.
Введение отравленным крысам атропина (10 мг/кг) предупреждает развитие ретикулоцитоза и ограничивает рост уровня ДК, однако антидотная терапия не влияет на антиоксидантную систему эритрона, ПОЛ, осмотическую резистентность и электрический заряд мембран. Включение в схему лечения бемитила (50 мг/кг) восстанавливает большинство нарушенных показателей, в том числе содержание ретикулоцитов, активность СОД, каталазы, Гл-6-ФДГ, осмотическую резистентность и электрический заряд эритроцитарных мембран до уровня интактных животных.
Таблица 9
Морфофункциональные показатели эритроцитов и их мембран у крыс
после острого отравления карбофосом и коррекции бемитилом и атропином
| Показатель | Препараты (группа животных) | |||
| Атропин | Атропин +бемитил | Контроль (карбофос) | Интактные крысы | |
| Гемоглобин, г/л | 140,2±4,8 | 152,0±3,0 | 142,5±2,8 | 148,2±5,2 |
| Эритроциты, 102/л | 4,6±0,2 | 4,7±0,09 | 4,5±0,18 | 4,6±0,1 |
| Гематокрит, % | 41,6±3,5 | 41,3±1,8 | 41,5±4,0 | 42,0±3,4 |
| Ретикулоциты, 0/00 | 36,4±2,0** | 30,6±2,0** | 58,2±2,7* | 34,0±3,5 |
| ССГ, пг | 0,23±0,03 | 0,24±0,01 | 0,27±0,03 | 0,28±0,02 |
| СЭФПЭ, м2/v•с | 1,11±0,01 | 1,13±0,05** | 1,00±0,02* | 1,13±0,01 |
| Каталаза, ммоль/мин/мг Hb | 26,5±1,6* | 33,1±2,0** | 24,4±2,5* | 31,7±1,8 |
| СОД, усл. ед./мг Hb | 0,70±0,05* | 1,12±0,05** | 0,68±0,07* | 1,07±0,04 |
| Гл-6-ФДГ, мк моль/мин/мг Hb | 12,8±0,4* | 16,9±0,4*** | 10,2±0,4* | 15,7±0,4 |
| ДК, н моль/г Hb | 125,0±2,4** | 99,6±11,2** | 182,0±1,8* | 102,1±5,0 |
| ТБК-РП, н моль/мг белка | 0,68±0,05* | 0,25±0,07** | 0,56±0,02* | 0,26±0,11 |
Примечания: * – статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»;** – статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «контроль (карбофос)».
О состоянии мембран эритроцитов в условиях отравления карбофосом и применения корригирующей терапии бемитилом и атропином судили также по тушению интенсивности флуоресценции мембранного зонда АНС (табл. 10). Зонд АНС является «универсальным» зондом, который встраивается в поверхностные локусы мембраны и реагирует на различные перестройки, происходящие в мембранах, отражая состояние области белок-липидного взаимодействия (Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 1980).
Показано статистически значимое уменьшение флуоресценции зонда АНС на 14-е и 21-е сутки как у крыс, отравленных карбофосом, так и у крыс, отравленных карбофосом и леченных атропином, что свидетельствует о нарушении структурной организации мембраны эритроцитов, повышении их микровязкости. Выявленное тушение флуоресценции обусловлено активацией процессов ПОЛ, которые приводят к увеличению поверхностной плотности заряда, увеличению электростатической отталкивающей силы между АНС и мембраной участка связывания АНС и уменьшению флуоресценции системы «АНС – мембрана».
В то же время у крыс, отравленных карбофосом и леченных атропином и бемитилом, интенсивность флуоресценции АНС в мембранах эритроцитов оставалась в пределах нормы на протяжении всего опыта (тушение флуоресценции АНС было меньше 3%), что обусловлено мембраностабилизирующими свойствами бемитила.
Таблица 10
Степень тушения флуоресценции мембранного зонда АНС
в мембранах эритроцитов крыс, отравленных карбофосом, ((F0-F)/F0)
| Группы животных, n=8 | Сутки эксперимента | ||
| 2–3-и | 14–15-е | 21-е | |
| Карбофос | 0,06±0,01 | 0,13±0,02** | 0,12±0,02* |
| Карбофос + атропин | 0,02±0,01 | 0,11±0,01** | 0,11±0,01** |
| Карбофос+атропин+бемитил | 0,02±0,01 | 0,03±0,01 ## | 0,02±0,01 # |
Примечания: * – статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»;
** – статистически достоверное различие (р<0,002) с группой «интактные крысы»;
– статистически достоверное различие (р<0,02) с группой «карбофос»;
– статистически достоверное различие (р<0,001) с группой «карбофос»;
# – статистически достоверное различие (р<0,01) с группой «карбофос + атропин»;
## – статистически достоверное различие (р<0,01) с группой «карбофос + атропин»;
F – интенсивность флуоресценции препаратов (отн. ед.);
F0 – интенсивность флуоресценции контроля (интактные крысы);
F0 = 0,9±0,02 ед. фл.
В то же время у крыс, отравленных карбофосом и леченных атропином и бемитилом, интенсивность флуоресценции АНС в мембранах эритроцитов оставалась в пределах нормы на протяжении всего опыта (тушение флуоресценции АНС было меньше 3%), что обусловлено мембраностабилизирующими свойствами бемитила.
Таким образом, включение бемитила в схему лечения отравлений карбофосом предупреждает развитие основных токсических эффектов ФОС: активацию ПОЛ, изменение активности ферментов антиоксидантной системы организма и, соответственно, модификацию важнейших физико-химических свойств мембран – проницаемость, вязкость, фазовое состояние. Оптимальные физико-химические свойства бемитила (коэффициент распределения между полярной и неполярной фазами) обеспечивают его уникальные фармакокинетические параметры и, соответственно, взаимодействие с водорастворимыми и липофильными свободными радикалами. Избирательная кумуляция препарата в эритроцитах при курсовом введении (табл. 21) предупреждает деструкцию липидного бислоя, повышение его микровязкости, предотвращает развитие дезорганизации белкового состава, нарушение функциональной активности ферментов и функционального состояния мембран-рецепторного комплекса в эритроне.
В различных модельных системах установлена высокая антирадикальная и антиокислительная активность других производных бензимидазола – этомерзола и соединения Б-16 (табл. 1). Результаты сравнительного исследования влияния монотерапии бемитилом, этомерзолом и соединением Б-16 на процессы ПОЛ при отравлении ФОС представлены в табл. 11 и 12.
Таблица 11
Содержание диеновых конъюгатов в органах крыс, отравленных карбофосом
(отн. ед. оптической плотности/мг липидов, n = 8)
| Группы крыс, препараты | Статистический показатель | Время после отравления | ||
| 2–3-и сутки | 14-е сутки | |||
| Головной мозг | Интактные крысы | М±m | 0,18 ±0,01 | 0,18 ±0,01 |
| % | 100 | 100 | ||
| Карбофос | М±m | 0,40 ± 0,06* | 0,58 ±0,03* | |
| % | 222 | 322 | ||
| Карбофос + бемитил | М±m | 0,25 ± 0,05** | 0,40 ±0,04** | |
| % | 138 | 222 | ||
| Карбофос + этомерзол | М±m | 0,23 ± 0,02** | 0,36 ±0,03** | |
| % | 128 | 200 | ||
| Карбофос + соединение Б-16 | М±m | 0,28 ± 0,05 | 0,39 ± 0,04** | |
| % | 156 | 216 | ||
| Миокард | Интактные крысы | М±m | 0,37 ±0,01 | 0,37 ± 0,01 |
| % | 100 | 100 | ||
| Карбофос | М±m | 1,10±0,10* | 1,41 ±0,10* | |
| % | 297 | 381 | ||
| Карбофос + бемитил | М±m | 0,48 ± 0,02** | 0,51 ±0,03** | |
| % | 130 | 138 | ||
| Карбофос + этомерзол | М±m | 0,42 ± 0,02** | 0,44 ± 0,05** | |
| % | 114 | 119 | ||
| Карбофос + соединение Б-16 | М±m | 0,50 ± 0,04** | 0,42 ± 0,06** | |
| % | 135 | 114 | ||
Примечания: * – статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «интактные крысы»; ** – статистически достоверное различие (р<0,05) с группой «карбофос».
Установлено, что карбофос в дозе 0,8 LD50 вызывает гибель 20% животных и значительно увеличивает активность процессов ПОЛ в головном мозге и сердце крыс на 2–3-и, 6-е и 14-е сутки в постинтоксикационном периоде. На 2–3-и сутки количество ДК в головном мозге у отравленных крыс возрастает в 2,2 раза, а на 14-е сутки – в 3,2 раза (табл. 11).
В миокарде крыс, отравленных карбофосом, содержание ДК на 2–3-и сутки увеличивается в 3 раза, а на 14-е сутки – в 3,8 раза. Исследуемые препараты предупреждают чрезмерное накопление ДК примерно в одинаковой степени. Применение бемитила и этомерзола практически нормализует количество ДК в головном мозге на 2–3-и сутки и достоверно снижает их содержание на 14-е сутки, хотя не достигает нормы. В то же время лечение крыс производным бензимидазола – соединением Б-16 – оказывает положительный эффект на 14-е сутки, но не на 2–3-и сутки (табл. 11).
Результаты изучения содержания ШО в головном мозге и миокарде крыс, отравленных карбофосом и леченных исследуемыми препаратами, представленные в табл. 12, показывают, что бемитил ингибирует процессы ПОЛ и, в частности, снижает уровень ШО в головном мозге и миокарде подобно этомерзолу и соединению Б-16.