Geum.ru

Тезисы докладов

Вид материалаТезисы
Н.Н.Немова, Л.В.Топчиева, И.Е.Малышева, Н.Л.Рендаков
Исследование молекулярного полиморфизма протеома мочи человека новым методом точной массовой метки с использованием масс-спектро
Подобный материал:
1   ...   64   65   66   67   68   69   70   71   ...   78

РОЛЬ ПОЛИМОРФНЫХ ГЕНОВ АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА И АПОЛИПОПРОТЕИНА Е В МЕХАНИЗМАХ РАЗВИТИЯ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (CCЗ) И ОЦЕНКА РИСКА РАЗВИТИЯ CCЗ У ЖИТЕЛЕЙ РЕСПУБЛИКИ КАРЕЛИЯ




Н.Н.Немова1), Л.В.Топчиева1), И.Е.Малышева1), Н.Л.Рендаков1),

С.Н.Коломейчук1), В.А.Корнева2), Л.Л.Дорошин2)



1)Институт биологии Карельского научного центра РАН

2) МУП Больница скорой медицинской помощи г. Петрозаводска


В последние годы внимание многих исследователей акцентировано на изучении молекулярно-генетических маркеров предрасположенности человека к развитию гетерогенных мультифакторных заболеваний (гипертония, атеросклероз, сахарный диабет и др.). Для них характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды (Пузырев, 1996). К таким заболеваниям относятся и различные патологии сердечно-сосудистой системы. В России показатель смертности от сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) занимает первое место среди прочих заболеваний, и, что еще более существенно, количество больных с данными заболеваниями неуклонно растет (Zapesochnaia, Avtandiliov, 2008). Повышение эффективности ранней профилактики связывают с выявлением полиморфизма генов, продукты которых могут быть вовлечены в формирование различных патологий сердечно-сосудистой системы, и изучением особенностей распространения этих генов в популяциях (Воевода и др., 2006). Для одних групп населения удается выявить ассоциацию генетических маркеров с развитием ССЗ, для других – нет. Следовательно, факторы внешней среды и принадлежность к этнической группе могут вносить значительный вклад в этиологию ССЗ. Тем не менее у населения Карелии, проживающего в условиях нестабильного климата и светового режима Европейского Севера, полиморфизм генов, которые могут быть связаны с риском развития ССЗ, до настоящего времени не изучался. В нашей работе мы предприняли попытку исследовать распределение полиморфных аллелей генов ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), аполипопротеина Е (АпоЕ) и трансферрина среди жителей Карелии.

В ходе выполнения проекта к настоящему времени получены результаты по частоте инсерционно-делеционного полиморфизма гена АПФ (генотипы I/D, I/I и D/D) и ряду биохимических показателей крови (общий холестерин (ОХС), липопротеины низкой и высокой плотности (ЛПНП и ЛПВП), триглицериды (ТГ) и фибриноген (ФГ) и др.). Было обследовано 198 человек (контрольная группа – 49, больные ССЗ – 149).

Результаты наших исследований подтвердили имеющиеся в литературе данные о том, что с увеличением возраста пациентов наблюдается рост ССЗ. Показано, что у больных артериальной гипертензией и обширным инфарктом миокарда наблюдались достоверно более высокие показатели ОХС, ЛПНП, ТГ, фибриногена и более низкие показатели ЛПВП.

Во всех исследованных группах преобладал генотип I/D (около 50 %) над генотипами I/I и D/D (от 22 до 28 %). Частоты генотипов I/D и D/D у здоровых людей и больных артериальной гипертензией и обширным инфарктом миокарда достоверно не различались. Обнаружено достоверное снижение частот генотипа I/I, аллеля I и увеличение частоты аллеля D в группе людей, страдающих артериальной гипертензией. Таким образом, среди больных гипертонией в республике Карелия преобладают носители D аллеля. Однако в исследованной нами популяции не обнаружена ассоциация полиморфизма гена АПФ с риском развития обширного инфаркта миокарда. Дальнейшие исследования будут направлены на оценку распределения частот аллелей генов АпоЕ, трансферрина и их вклада в ССЗ у жителей Карелии.


ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ПРОТЕОМА МОЧИ ЧЕЛОВЕКА НОВЫМ МЕТОДОМ ТОЧНОЙ МАССОВОЙ МЕТКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ ИОННОГО ЦИКЛОТРОННОГО РЕЗОНАНСА




Е.Н.Николаев 1,2, А.С.Кононихин 1,2, С.А.Мошковский 3, О.Н.Харыбин 2,3, И.А.Попов 1,2, Д.М.Автономов 1,2, И.А.Агрон 3, В.С.Курова 1, С.Д.Варфоломеев 1



1 Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

2 Институт энергетических проблем химической физики РАН

3 Институт биомедицинской химии РАМН


Были продолжены систематическим исследованием белков протеома мочи здоровых людей методом точной массовой метки-времени удержания с использованием масс-спектрометрии ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье (FTICR) и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Развиваемый нами метод точной массовой метки – времени удержания основан на двухстадийном подходе, использующем жидкостную хроматографию для разделения смесей пептидов-продуктов трипсинолиза и масс-спектрометрию ионного циклотронного резонанса как самый точный метод измерения масс ионов. В результате выполнения проекта улучшен метод приготовления образцов белков мочи для анализа, что позволило увеличить количество детектируемых белков на 20 %. Проведены исследования различий в экспрессии белков от разных доноров с использованием метода количественной протеомики на основе мечения изотопом 18О. Проведено усовершенствование методики мечения, которое исключает или заметно уменьшает пропуски при мечении. Усовершенствована программа анализа спектров на присутствие пиков от ионов, содержащих 18О при их количественном сравнении. Программа позволяет различать вклад изотопных кластеров от 13С в кластеры от 18О. Усовершенствованы методы выравнивания хроматограмм пептидов-продуктов трипсинолиза белковых смесей для унификации времен элюции пептидов из хроматографической колонки и с использованием внутренних стандартов и методов теоретической хроматографии. Разработанный на предыдущем этапе выполнения проекта метод MRM (multiple reaction monitoring) был опробован для поиска пептида 1-12 альфа- бета амилоида с целью определения предельной чувствительности метода. Достигнута чувствительность 1 нМоль, которая близка к требуемой для детектирования некоторых белковых биомаркеров в моче. С помощью метода фрагментации пептидов, основанного на диссоциации при захвате медленных электронов, найдены посттрансляционные модификации, в том числе фосфорилирование и гликозилирование, и показана возможность их количественной характеризации.