Тезисы докладов
| Вид материала | Тезисы |
- Тезисы докладов, 4952.24kb.
- Тезисы докладов, 1225.64kb.
- Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
- «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
- Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
- Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
- Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
- Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
- Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
- Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.
МЕХАНИЗМЫ ИНАКТИВАЦИИ БАКТЕРИОФАГА РМ2
КАК МОДЕЛЬНОГО ПАТОГЕННОГО АГЕНТА В КРОВИ И МЕДИЦИНСКИХ ПРЕПАРАТАХ ПРИ КОМБИНИРОВАННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ И ВИДИМОГО СВЕТА В ПРИСУТСТВИИ КРАСИТЕЛЕЙ
(ИНАКТИВАЦИЯ БАКТЕРИОФАГА РМ2 ПРИ ХРАНЕНИИ ЛИЗАТОВ)
В.А.Шарпатый, В.М.Андреев, Н.В.Кузнецова, В.А.Кузьмин
Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля, РАН, Москва
Продолжено исследование кинетики и механизмов инактивации неочищенного фага РМ2 в лизатах, полученных путем заражения фагом бактерий Pseudoalteromonas espejiana BAL 31 (Pae) в BAL-бульоне (0,45 M NaCl, 9,4 мМ KCl, 50 мМ MgSO4, 10 мМCaCl2, 8 г пептона на 1л среды, рН 7,6). Зараженную культуру (обычно около 108 клеток в 12 мл среды) наливали в чашку Петри над слоем 1 %-го агара, сделанном на BAL-бульоне, или без агара и инкубировали при комнатной температуре около суток. Полученный лизат освобождали от оставшихся клеток фильтрованием (диаметр пор фильтра 0,2 мкм) и хранили в холодильнике. При хранении лизата фаг в нем постепенно инактивируется – титр фага (Т) падает, причем обычно сначала по экспоненциальному закону: Т = Т010–wt, где t – время в сутках.
Скорость инактивации фага (w) в 19 лизатах, полученных нами по описанному методу, варьировала более чем в 30 раз – от 0,55·10–2 до 19,2·10–2 за сутки. Минимальные значения w почти совпадали со скоростями инактивации при 4º очищенного фага РМ2 в буфере NTC, оптимальном для хранения. Значения w для 8 лизатов, полученных над агаром, были значительно меньше (от 0,55·10–2 до 2,27·10–2), чем для 10 лизатов, полученных без агара (от 2,40·10–2 до 19,2·10–2).
Скорость инактивации может в какой-то мере зависеть от протеолитической активности лизата, поскольку известно, что Pae при росте секретирует в среду протеазу(ы), свойства которой не изучены и которая в принципе может инактивировать фаг РМ2. Мы исследовали изменение протеолитической активности культуральной среды при росте незараженной культуры Pae в чашке Петри (без агара). В качестве субстрата протеаз использовали азоказеин. Было найдено, что на протяжении фазы экспоненциального роста клетки секретировали протеазу почти с постоянной скоростью, и только в конце роста скорость секреции увеличивалась. Протеолитические активности супернатантов ночных культур всегда были выше, чем активности лизатов. После перенесения фага из лизата с низким значением w в такой супернатант скорость инактивации фага резко возрастала.
Приведенные результаты дают основание полагать, что протеолитическая активность лизата должна быть тем выше, чем дольше размножались бактерии при выращивании фага, т. е. чем меньше была величина затравки. Для проверки этого предположения мы вырастили одновременно три лизата (без агара), варьируя величину затравки фага (4,4·106, 4,4·104 и 4,4·102 БОЕ на чашку) при прочих равных условиях. Оказалось, что при уменьшении затравки увеличивалась как протеолитическая активности лизата, так и величина w.
Эти данные позволяют предположить, что протеаза или протеазы Рае могут инактивировать фаг РМ2. Чтобы проверить это, необходимо было бы очистить эти протеазы и исследовать их действие на очищенный фаг. Другие наши наблюдения приводят к выводу, что кроме протеаз в лизатах содержатся и другие факторы, влияющие на скорость инактивации фага, действие которых особенно заметно на поздней стадии хранения, когда инактивация часто замедляется.
Состояние лизата влияет на глубину фотоинактивации. Так, фаг РМ2 (из одного и того же лизата) в присутствии карбоцианина (8,4 мкМ, освещение – 5 минут) инактивировался на 4 порядка (возраст лизата 37 суток), на 3 порядка (96 суток), на 5 порядков (41 сутки, перед фотоинактивацией лизат был инкубирован с ДНК-азой).
ЗНАЧИМОСТЬ ИСХОДНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СИСТЕМЫ РЕГУЛЯЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ В ТКАНЯХ
ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПОСЛЕДСТВИЙ ВОЗДЕЙСТВИЯ ИОНИЗИРУЮЩЕЙ РАДИАЦИИ И ХИМИЧЕСКИХ ТОКСИКАНТОВ В ШИРОКОМ ДИАПАЗОНЕ ДОЗ НА ОРГАНИЗМ
Л.Н.Шишкина1), М.В.Козлов1), М.А.Климович1), Л.И.Мазалецкая1),
Н.И.Шелудченко1), Н.В.Хрустова1), В.А.Меньшов1), В.В.Урнышева1), Е.В.Кушнирева1), А.Г.Кудяшева2), Н.Г.Загорская2), О.Г.Шевченко2)
1) Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН, г. Москва
2) Институт биологии Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар
Выяснение участия процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в адаптации организмов к радиоактивному загрязнению окружающей среды и выявление групп риска среди категорий населения при техногенном загрязнении биоты обусловливает необходимость изучения влияния исходного состояния биообъектов на формирование биологических последствий воздействия как ионизирующей радиации, так и совместного действия радиации и химических агентов в широком диапазоне доз и интенсивностей. Совокупность экспериментальных данных, полученных нами ранее в рамках исследований по Программе, позволила предложить новый подход к оценке последствий воздействия слабых повреждающих факторов по изменению масштаба и характера взаимосвязей между скоординированными в норме показателями физико-химической системы регуляции ПОЛ в тканях лабораторных интактных животных и грызунов, обитающих в природной среде на территориях с нормальным радиационном фоном.
При изучении биологических последствий воздействия рентгеновского излучения (РИ) в дозах менее 0,15 сГр переменной мощности в зависимости от исходных характеристик органов и крови в группах контрольных беспородных мышей (самки) выявлено их существенное влияние на масштаб и направленность изменения индекса (относительной массы) селезенки и печени, содержания ТБК-активных продуктов в тканях и физико-химических характеристик липидов печени и головного мозга мышей. Показано отсутствие линейной зависимости изученных параметров от суммарной дозы РИ и/или ее мощности. При этом в плазме крови мышей на масштаб изменения ТБК-активных продуктов спустя месяц после РИ преимущественное влияние оказывает мощность дозы (особенно в области суммарных доз облучения менее 0,05 сГр), а в головном мозге мышей влияние мощности дозы проявляется при воздействии РИ в дозе более 0,05 сГр.
Влияние физико-химических характеристик липидов на характер взаимосвязи между индексом печени мышей SHK и долей кардиолипина в составе ее фосфолипидов (ФЛ) и изменение ингибирующей эффективности природных антиоксидантов в присутствии ФЛ, обусловленное взаимодействием компонентов и подтвержденное спектрофотометрически, позволяет заключить, что степень ненасыщенности липидов, их способность разлагать пероксиды и обеспеченность антиоксидантами оказывают влияние как на процессы биосинтеза и деградации ФЛ, так и на функциональную активность печени.
Сравнительное изучение совместного действия хронического -излучения в суммарной дозе 1,44–1,6 сГр (мощность дозы около 2 мР/ч) ионов свинца и нитрата в широком диапазоне доз на состав ФЛ эритроцитов крови и печени мышей линии CBA и анализ ранее полученных экспериментальных данных позволяет предложить изменение состава липидов эритроцитов крови как тест для оценки биологических последствий воздействия ионизирующего излучения в малых дозах, при проведении радиоэкологического мониторинга и применении биологически активных природных и синтетических препаратов.