Тезисы докладов

Вид материала

Тезисы

Содержание Взаимодействие медной ферроксидазы церулоплазмина с белками нейтрофилов Генетические вариации тромбоцитарных рецепторов и их вклад в гиперагрегацию тромбоцитов, риск инфаркта миокарда и чувсвительност О.В.Сироткина, Н.А. Боганькова, Е.Л. Железняк, Т.В. Вавилова Цель работы Материалы и методы

Подобный материал:

• Тезисы докладов, 4952.24kb.
• Тезисы докладов, 1225.64kb.
• Правила оформления тезисов докладов Тезисы докладов предоставляются в электронном виде, 22.59kb.
• «Симпозиум по ядерной химии высоких энергий», 1692.86kb.
• Требования к тезисам докладов, 16.83kb.
• Тезисы докладов научно-практической, 6653.64kb.
• Тезисы докладов 1 Межвузовская научно -практическая конференция студентов и молодых, 100.64kb.
• Тезисы докладов и заявки на участие, 104.97kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 788.61kb.
• Тезисы докладов, принятые Оргкомитетом для опубликования в Материалах форума, 1066kb.

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МЕДНОЙ ФЕРРОКСИДАЗЫ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА С БЕЛКАМИ НЕЙТРОФИЛОВ

В.Р.Самыгина ¹⁾, А.В.Соколов ²⁾, Е.В.Филиппова ¹⁾, Е.Т.Захарова ²⁾, В.Б.Васильев ²⁾, Г.Бартуник ³⁾

¹⁾ Институт кристаллографии РАН, Москва

²⁾ ГУ НИИ экспериментальной медицины, Санкт-Петербург

3) ASMB-MPG, DESY, Hamburg, Germany


Большинство биохимических процессов в организме регулируются белок-белковыми взаимодействиями. Церулоплазмин (ЦП) – медьсодержащая ферроксидаза плазмы крови человека образует бинарные комплексы с несколькими белками нейтрофилов: миелопероксидазой, лактоферрином, катепсином G, нейтрофильной эластазой, азурацидином, протеиназой 3. Взаимодействие с миелопероксидазой было установлено ранее [1], взаимодействие с остальными 4 белками установлено нами [2]. Все выявленные белки являются аутоантигенами, провоцирующими развитие системных васкулитов. Вероятно, взаимодействие этих белков с церулоплазмином является частью механизма участвующего в патогенезе этих заболеваний.

Мы начали исследование этих взаимодействий с изучения бинарных комплексов церулоплазмин-миелопероксидаза и церулоплазмин-лактоферрин. Гем-содержащий белок нейтрофилов миелопероксидаза (МПО) катализирует образование гипохлорида, высвобождающегося в плазму крови во время иммунного ответа. Гипохлорид играет важную роль в уничтожении микробов иммунной системой, но является мощным оксидантом и его неконтролируемое внеклеточное высвобождение может приводить, в частности, к повреждению стенок артерий и соответственно, атеросклерозу. Церулоплазмин образует комплекс с миелопероксидазой (МПО), попавшeй в кровяное русло и ингибирует ее активность. Воздействие на образование и распад комплекса и/или на его структуру – эффективный инструмент оптимизации работы МПО – этого ключевого белка острой фазы воспаления, усилив его полезную антимикробную функцию и ограничив побочный повреждающий эффект. Лактоферрин – железосодержащий гликопротеин семейства трансферриновых, подавляет рост микроорганизмов.

Мы определили кинетические параметры ингибирования ЦП ферментативной активности МПО, характер диссоциации комплекса. На основании полученных результатов сделан вывод, что ЦП выступает как конкурентный ингибитор, препятствуя связыванию ароматических субстратов с активным центром МПО. Нами изучено влияние лактоферрина на ферроксидазную активность церулоплазмина.

Структуры бинарных комплексов ЦП-МПО и ЦП-ЛФ изучались методами рентгеноструктурного анализа и методом малоуглового рассеяния. Полученные в результате структуры низкого разрешения позволили определить зоны взаимодействия белков. Полученные данные хорошо согласуются с данными биохимических исследований. Нами также закристаллизован комплекс церулоплазмина с пептидом азуроцидина, содержащим участок полипептидной цепи азуроцидина, который по предварительным данным участвует во взаимодействии с церулоплазмином.

[1] Segelmark M., Persson B., Hellmark T. et al. (1997). Clin. Experim. Immunol., 108, 167-174.

[2] А.В. Соколов, М.О. Пулина, К.В. Агеева, О.Л. Рунова,

Е.Т. Захарова, В.Б. Васильев (2007). Биохимия, 72, 1072-1077.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ВАРИАЦИИ ТРОМБОЦИТАРНЫХ РЕЦЕПТОРОВ

И ИХ ВКЛАД В ГИПЕРАГРЕГАЦИЮ ТРОМБОЦИТОВ, РИСК ИНФАРКТА МИОКАРДА И ЧУВСВИТЕЛЬНОСТЬ

К АНТИАГРЕГАНТНОЙ ТЕРАПИИ КЛОПИДОГРЕЛЕМ

О.В.Сироткина¹⁾, Н.А. Боганькова²⁾, Е.Л. Железняк¹⁾, Т.В. Вавилова²⁾

¹⁾ Петербургский институт ядерной физики им. Б.П. Константинова РАН

²⁾ Санкт-Петербургская Государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова


Цель работы – выявить генетические вариации ключевых тромбоцитарных рецепторов, которые лежат в основе гиперагрегации тромбоцитов, приводят к развитию тромбоэмболий и влияют на индивидуальную чувствительность к антиагрегантной терапии.

Материалы и методы: В исследование были включены пациенты, перенесшие инфаркт миокарда (ИМ) и принимающие клопидогрель (21 человек, от 43 до 72 лет), и здоровые доноры без сердечно-сосудистых и тромбоэмболических заболевание в анамнезе (21 человек, от 22 до 56 лет). В исследуемых группах проанализированы генетические варианты C18T и G36T P2Y12, Leu33Pro GPIIIa, C-154T и T13254C GPVI, C807T GPIa методом PCR-RFLP, коллаген- и АДФ-индуцированная агрегация по Борну, количество рецепторов GPIIb-IIIa, GPIa-IIa и GPVI методом проточной цитометрии с использованием соответствующих FITC-меченых AB, экспрессия генов GPIIb, GPIIIa, GPVI и P2Y12 методом RT-PCR с использованием TaqMan технологии.

Результаты: Мы выявили ассоциацию T13254C GPVI с риском развития инфаркта миокарда: частоты генотипов достоверно различались в группе пациентов – 36 % и 64 % для TT и TC, соответственно, по сравнению с донорами – 82 % и 18 % для TT и TC, соответственно (p=0.001), OR=8.1(95 %CI 2.9-23.1). С другой стороны, частота протективного варианта C18T P2Y12 была ниже у пациентов – 50 %, 39 % и 11 % для CC, CT и TT, соответственно, у доноров – 18 %, 59 % и 23 % для CC, CT и TT (p=0.02), OR=0.2 (95 % CI 0.1-0.4). У пациентов до начала антиагрегантной терапии и в группе доноров уровень АДФ-индуцированной агрегации не зависел от исследуемых генетических вариантов. Однако в динамике пациенты – носители мутаций G36T P2Y12, C-154T и T13254C GPVI, C807T GPIa и лица с отсутствием протективного аллеля С18 P2Y12, изначально показывая более высокую степень агрегации, на фоне терапии снижали ее более эффективно. Напротив, при мутации Leu33Pro GPIIIa у больных не наблюдалось уменьшения степени агрегации тромбоцитов на фоне приема клопидогреля. В группе доноров было определено, что T13254C и C-154T GPVI, а также Leu33Pro GPIIIa ассоциированы с большим числом соответствующих рецепторов – MFI 1.54±0.19 и 1.83±0.33 для TT13254 и TC13254, соответственно (p=0.09); 1.47±0.09, 1.73±0.06 и 1.56±0.08 для CC(-154), CT(-154) и TT(-154), соответственно (p=0.06); 53.9±1.4 тыс./кл. и 60.9±2.7 тыс./кл. для LeuLeu33 и ProLeu33, соответственно (p=0.09). Уровень достоверности не достиг значимых значений возможно вследствие малого объема выборки. Коллаген-индуцированная агрегация не зависела от количества рецепторов GPVI и GPIa-IIa, в то время как АДФ-индуцированная агрегация имела прямую корреляцию с числом GPIIb-IIIa (R=0.51, p=0.002). Экспрессия генов P2Y12, GPIIb и GPVI обратно коррелировала с возрастом обследованных (R от -0.39 до -0.45, p от 0.05 до 0.009). Экспрессия GPIIIa наоборот увеличивалась с возрастом (R=0.38, p=0.047) и в группе пациентов снижала эффективность уменьшения степени АДФ-индуцированной агрегации после приема клопидогреля (R=0.69, p=0.038 и R=0.68, p=0.042 для АДФ 5 и 10 мкМ, соответственно).

Заключение: генетические вариации рецептора GPIIb-IIIa и его количество на мембране тромбоцита вносят наибольший вклад в гиперагрегацию и чувствительность к клопидогрелю. На риск развития инфаркта миокарда в пожилом возрасте могут влиять варианты тромбоцитарных рецепторов T13254C GPVI и C18T P2Y12.