Geum.ru

Тезисы докладов

Вид материалаТезисы

Содержание


К нейродегенеративным изменениям
Этногеномная стратификация cnv и loh в сцепленных с депрессией и шизофренией регионах
Подобный материал:
1   ...   58   59   60   61   62   63   64   65   ...   96

СОЗДАНИЕ ТКАНЕСПЕЦИФИЧНЫХ ЛЕНТИВИРУСНЫХ ТРАНСГЕННЫХ МОДЕЛЕЙ С НАПРАВЛЕННЫМИ ИЗМЕНЕНИЯМИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ В ЛОКАЛЬНЫХ ОБЛАСТЯХ МОЗГА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕХАНИЗМОВ ЦЕРЕБРАЛЬНЫХ ПАТОЛОГИЙ, ПРИВОДЯЩИХ

К НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫМ ИЗМЕНЕНИЯМ

П.М.Балабан, Н.В.Гуляева, В.А.Маркевич, С.В.Саложин, А.П.Большаков, М.Ю.Степаничев, Ш.С.Узаков, Е.П.Кулешова, Г.Р.Тухбатова



Учреждение Российской академии наук Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН


Ранняя стадия большинства нейродегенеративных заболеваний характеризуется нарушением работы определенных групп нервных клеток, поэтому существует потребность в терапевтическом подходе, позволяющем осуществлять локальное и специфическое действие на эти клетки. Возможность специфического и направленного действия представляют лентивирусные системы доставки генетической информации.

В выполняемой работе исследуется нейропротекторный эффект трофических факторов, локально экспрессируемых в структурах мозга с помощью лентивирусных систем доставки. К настоящему моменту в институте проведены тестовые эксперименты на культуре клеток с использованием лентивирусных конструкций для экспрессии трофических факторов BDNF и GDNF. Методами иммуноцитохимии и Вестерн-блот анализа была продемон-стрирована работоспособность полученных конструкций.

Кроме того, были проведены исследования влияния увели-ченной концентрации NGF (фактора роста нервов) на физио-логические свойства нейронов при моделировании болезни Альц-геймера: суспензии лентивирусных частиц, полученные с плазмид-ных конструкция pCSC_CaMKII_hNGF-IRES-EGFP, несущей после-довательность для экспрессии фактора роста нервов человека под контролем нейрон-специфичного промотора CaMKII, и контроль-ной конструкции pCSC_CaMKII_IRES-EGFP. Через 14-16 дней после введения суспензии в гиппокампе крыс наблюдалось увеличение концентрации NGF в гиппокампе на 50 % по сравнению с образцами, полученными из контролькных животных. Усиление экспрессии NGF предотвращало ингибирующее влияние фрагмента бета-амилоида (25-35). Эти данные свидетельствуют о положитель-ном влиянии повышенной экспрессии NGF на функциональное состояние нейронов гиппокампа при введении бА(25-35).

В дельнейшей работе будет исследована зависимость продемон-стрированного эффекта от действия NGF на активность холинер-гических нейронов, а также будет проведен сравнительный анализ действия различных трофических факторов при патологических воздействиях на ЦНС.

ЭТНОГЕНОМНАЯ СТРАТИФИКАЦИЯ CNV И LOH В СЦЕПЛЕННЫХ С ДЕПРЕССИЕЙ И ШИЗОФРЕНИЕЙ РЕГИОНАХ

К.Б.Булаева, Ф.Р.Гургенова, У.М.Гусейнова, О.А.Булаев



Институт общей генетики им Н.И.Вавилова РАН


Полногеномное исследование сцеплений с главной рекуррент-ной депрессией (ГРД) и шизфоренией (ШЗФ), впервые проведенное нами в этнически подразделенных изолятах, позволило установить инвариантные к подразделенности генетических изолятов и популя-ционно-специфические геномные сцепления. Полученные нами результаты воспроизводят данные предыдущих исследований по генетике ГРД в регионах 11p15, 12q23-24, 13q11-32, 18q22 и 22q11-13. Межпопуляционную гомогенность в сцеплениях с ГРД мы установили в 1p36.1-p35.2, 2p13.2-p11.2, 6p22, 17q25.3, 18q22, 21q22 и 22q12.3, которая может быть связана с сохранившейся в «генетической памяти» современных больных блоков гаплотипов с патогенными локусами основателя (родоначальника) из общей для всех дагестанских народов пра-популяции, существовавшей около 300 поколений назад, в пользу существования которой свидетельствуют наши популяционно-генетические исследования коренных народов Дагестана. В сцепленных регионах локализованы гены, функции которых связаны с синаптическими механизмами нейротрансмиттеров и/или c функциями специфических регионов мозга: PLA2G2A1 и HTR6 (1p36.1-p35.2); TACR1, HTRA2, DCTN1, CTNNA2, LRRTM1 и LRRTM4 (2p13.2-p11.2 ); CSNK1D (17q25.3); DSEL (18q22), ApoL1-ApoL6 и SYN3 (22q12.3). В установленных нами сцепленных с ГРД и ШЗФ регионах мы изучали полиморфизм одиночных нуклеотидов (AFFX SNP 5.0, 6.0), сканированных по всему геному у отобранных больных, всего по 500 тыс. SNPов у каждого больного. На основе этих данных мы анализировали наличие молекулярных аберраций в виде изменений числа копий ДНК (CNV) и потерь гетерозиготности (LOH). Мы обнаружили de-novo микроделеции и микродупликации в сцепленных геномных регионах с генами-кандидатами ГРД и ШЗФ, а также воспроизвели ранее установленные редкие рекуррентные мутации, участвующие в патогенезе шизофрении. Общими для разных изолятов оказались геномные аберрации в виде CNV и/или LOH в 7 сцепленных с ГРД регионах и в 6 из 9 сцепленных с ШЗФ. 8 из 12 выявленных CNV у больных ГРД носят наследственный характер. В одном из изолятов у общего для всех современных больных ГРД родоначальника в 7-м поколении установлена делеция размером 120 кб внутри гена CTNNA2(2p12), полученная его 6 больными ГРД потомками. Аналогичные рекуррентные делеции и дупликации, полученные от общих предков, установлены для современных больных ГРД и ШЗФ в регионах 8p23, 1q21, 17p12, 20p13, 22q12. Наряду с этим выявлены спорадические CNV в одиночных случаях, не воспроизводящиеся ни у больных из того же или других изолятов, ни у здоровых. Ряд из выявленных молекулярных аберраций у больных ШЗФ и ГРД охватывает большие участки генома (от 500 до 4 тыс. кб) и охватывают много генов или являются межгенными (intergenic), другие – меньше по размерам и зачастую отражают делеции или дупликации внутри конкретных генов (интроны или экзоны). Изучение эффекта инбридинга на структуру и размеры таких вариаций показало, что LOH в существенной степени обусловлена геномной гомогенностью больных – потомков родственных браков во многих поколениях, традиционных для изучаемых изолятов. Обнаружен эффект инбридинга на размеры сегментов и типы вариаций числа копий (CNV). Полученные результаты исследования показывают важную роль этногеномной стратификации популяций человека в генетической архитектонике и в риске развития ШЗФ и ГРД. Это делает возможным проведение адекватной доклинической диагностики и своевременной профилактики ШЗФ и ГРД в соответствии с генетическим статусом и этнической принадлежностью обратившегося в медучреждение больного.