На правах рукописи
| Вид материала | Автореферат |
- Печатная или на правах рукописи, 21.09kb.
- Удк 796/799: 378 , 770.24kb.
- На правах рукописи, 399.58kb.
- На правах рукописи, 726.26kb.
- На правах рукописи, 1025.8kb.
- На правах рукописи, 321.8kb.
- На правах рукописи, 552.92kb.
- На правах рукописи, 514.74kb.
- На правах рукописи, 670.06kb.
- На правах рукописи, 637.26kb.
На правах рукописи
ЛЕБЕДЕВА ЕЛЕНА РАЗУМОВНА
ИНТРАКРАНИАЛЬНЫЕ АНЕВРИЗМЫ: ФАКТОРЫ РИСКА,
РАННЯЯ ДИАГНОСТИКА
14.00.13 - Нервные болезни
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук
Пермь — 2007
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Уральская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (г. Екатеринбург)
| Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук, профессор | Сакович Владимир Петрович Хуснутдинова Эльза Камилевна |
| Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор | Кравцов Юрий Иванович Ахмадеева Лейла Ринатовна Нестерова Марина Валентиновна |
| Ведущая организация: ГУ Научно-исследовательский институт нейрохирургии имени академика Н.Н. Бурденко Российской Академии медицинских наук | |
Защита состоится "___" __________ 2007г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.067.01 при ГОУ ВПО "Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (614990 г. Пермь, ул. Куйбышева, 39).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" по адресу: г. Пермь, ул. Коммунистическая, 26 и с авторефератом на сайте.
Автореферат разослан "___" _________ 2007г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Доктор медицинских наук,
профессор Мудрова О.А.
Общая характеристика работы
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
Артериальные аневризмы головного мозга представляют наиболее сложную и актуальную проблему современной неврологии и нейрохирургии. Они служат одной из главных причин спонтанных субарахноидальных кровоизлияний (САК) (Van Gijn J. et al., 2007). Аневризматическое САК – тяжелое заболевание с высокой смертностью и инвалидностью. Каждый год в США > 30 000 людей страдают от разрыва интракраниальных аневризм (Qureshi AI. еt al., 2005). Частота САК в России варьирует от 6 до 19,4 на 100.000 населения в год (Лебедев В.В. и др., 1996). Среди этих людей 50% умирают, 25% становятся инвалидами. У оставшихся 25% повышен риск повторных кровоизлияний (Peters D.G. et al. 2001; Qureshi A.I. et al., 2005). Потеря продуктивных лет жизни в общей популяции от САК сравнима с церебральным инфарктом, который составляет основную часть всех инсультов (Johnston S.C. et al., 1998). Главная причина этого связана с возникновением САК у относительно молодых людей и плохими исходами (Feigin V.L. et al.; 2003; Hackett M.L. et al., 2000). На долю САК приходится четверть летальных исходов вследствие цереброваскулярных заболеваний (Медведев Ю.А. и др., 1998; Qureshi A.I. et al., 2005).
По данным регистра инсульта частота геморрагических инсультов в России увеличилась за последние годы и составила 0,57 на 1000 населения в год (Скворцова В.И., Крылов В.В. 2005). Своевременное выявление аневризм и их лечение (хирургическое или эндоваскулярное) является надежной профилактикой внутричерепных кровоизлияний. Разработки по созданию скрининговой диагностики аневризм ведутся в основном в двух направлениях: проведение скринингового исследования сосудов головного мозга (МР-ангиография) у ближайших родственников больных с аневризмами и определение генетических биомаркеров. В России подобные работы еще не проводились. В связи с этим данное исследование представляет большой научный и практический интерес.
Цель исследования: оценить значение клинических и генетических факторов риска и возможность их использования в ранней диагностике интракраниальных аневризм.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Дать клиническую характеристику интракраниальных аневризм до их разрыва.
2. Определить основные факторы риска и их влияние на развитие интракраниальных аневризм в Уральском регионе.
3. Обнаружить гены-кандидаты, причастные к развитию аневризм сосудов головного мозга.
4. Разработать шкалу оценки риска развития аневризм для отбора пациентов, нуждающихся в скрининговом обследовании сосудов головного мозга.
5. Разработать общую схему ранней диагностики интракраниальных аневризм.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ
1. Впервые произведена комплексная оценка различных факторов риска и симптомов до разрыва интракраниальных аневризм в Российской популяции на основе их исследования в Уральском регионе и показано, что семейный анамнез кровоизлияний является главным фактором риска развития интракраниальных аневризм, все остальные факторы (артериальная гипертензия, дисплазия соединительной ткани и мигрень) ассоциированы с ним генетически или патогенетически. Впервые произведены морфологические исследования биоптатов поверхностной височной артерии и кожи височной области, а также генетические исследования у больных с аневризмами с учетом выявленных факторов риска.
2. Впервые произведено скрининговое исследование сосудов головного мозга у родственников первой степени родства больных с ИА в Уральском регионе и показано, что они имеют повышенный риск развития артериальной гипертензии, ишемической болезни сердца, инфарктов и инсультов, а также внезапной смерти.
3. Впервые в Российской популяции проанализированы симптомы до разрыва ИА и обнаружено, что головные боли и, прежде всего мигрени без ауры, а также нарушение функций глазодвигательного нерва и ишемические нарушения мозгового кровообращения являются наиболее частыми их клиническими проявлениями.
4. Впервые доказано, что ген аполипопротеина Е может служить геном-кандидатом, влияющим на развитие аневризм. Впервые обнаружено, что аллель ε2 и генотип ε2/ε3 гена аполипопротеина Е являются рисковыми для развития аневризм сосудов головного мозга у женщин с артериальной гипертензией и семейной отягощенностью по гипертензии, а также у больных с семейным анамнезом аневризм, кровоизлияний и инсультов.
5. Впервые выявлено, что DD генотип гена ангиотензин-превращающего фермента повышает риск развития аневризм у мужчин с артериальной гипертензией.
6. Впервые продемонстрировано, что 2 однонуклеотидных полиморфизма (rs1722561 и rs1701946) в кластере гена калликреина ассоциированы с интракраниальными аневризмами в русской и финской популяциях и впервые доказано, что калликреины являются важными генами-кандидатами для развития интракраниальных аневризм.
7. Впервые проведено исследование VNTR и Alu-инсерционного полиморфизмов гена α цепи коллагена III типа и Alu-инсерционного полиморфизма в гене ингибитора протеиназы серина у больных с интракраниальными аневризмами и показано, что данные гены не связаны с развитием аневризм в исследуемой русской популяции.
8. Впервые разработана шкала оценки риска развития интракраниальных аневризм и создана схема скрининговой диагностики аневризм до их разрыва. Выявление лиц с семейным анамнезом кровоизлияний и, прежде всего аневризматических кровоизлияний, является первостепенным в отборе лиц для ранней диагностики интракраниальных аневризм.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
Доказано, что интракраниальные аневризмы являются мультифакториальным заболеванием и устанавлено значение трех главных этиологических факторов в аневризмогенезе: семейный анамнез внутричерепных кровоизлияний, дисплазия соединительной ткани и артериальная гипертензия.
Проведенные генетические исследования показали, что гены аполипопротеина Е и калликреина могут быть одними из генов-кандидатов, играющих важную роль в развитии аневризм, а также установить генетическую детерминированность артериальной гипертензии как фактора риска развития аневризм у мужчин и женщин и значение генов аполипопротеина Е и ангиотензин-превращающего фермента в этом процессе.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
1. Выделены клинические симптомы до разрыва аневризм, знание которых необходимо неврологам, нейрохирургам и терапевтам для ранней диагностики аневризм.
2. Разработанная шкала оценки риска развития интракраниальных аневризм может быть использована при отборе пациентов из групп риска, нуждающихся в проведении ранней диагностики аневризм.
3. Выявленные ассоциации генов калликреина, аполипопротеина Е и ангиотензин-превращающего фермента с аневризмами сосудов головного мозга могут быть использованы в будущем для создания шкалы оценки генетического риска развития аневризм.
4. Созданная схема ранней диагностики аневризм может способствовать профилактике аневризматических внутричерепных кровоизлияний.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
Главными факторами риска развития интракраниальных аневризм в Уральском регионе являются: артериальная гипертензия, дисплазия соединительной ткани и семейный анамнез кровоизлияний.
- Мигрень без ауры является самым частым клиническим проявлением интракраниальных аневризм до их разрыва.
- Сосудистая патология является лидирующей у родственников I степени родства больных с интракраниальными аневризмами. Семейные случаи являются редкими в нашей популяции, и большинство аневризм являются спорадическими. Родственники больных с аневризмами имеют высокий риск возникновения геморрагических инсультов и внезапной смерти, а также предрасположены к развитию ишемических инсультов, артериальной гипертензии и ишемической болезни сердца.
- Аневризмы представляют мультифакториальное заболевание, в развитие которого вовлечены многие гены. Среди изученных нами генов, наибольшую роль играет ген аполипопротеина Е, ген ангиотензин-превращающего фермента и гены кластера калликреина.
- Разработанная шкала оценки риска развития аневризм и схема ранней диагностики может быть использована в отборе пациентов для скринингового обследования сосудов головного мозга.
РЕАЛИЗАЦИЯ РАБОТЫ В ПРАКТИКЕ
Полученные при выполнении настоящей работы результаты внедрены в практику Свердловского межтерриториального нейрохирургического центра им. проф. Д.Г. Шефера, МО “Новая больница”, ГКБ №40, ГКБ №6, ГКБ №20 г. Екатеринбурга, используются в педагогической работе со студентами и врачами на кафедре нервных болезней и нейрохирургии ГОУ ВПО "Уральская государственная медицинская академия Росздрава", на кафедре неврологии с курсами нейрохирургии и медицинской генетики ГОУ ВПО "Башкирский государственный медицинский университет Росздрава" (г. Уфа).
ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА В ИССЛЕДОВАНИЕ
1. В 1995 на основе анализа историй болезни больных с интракраниальными аневризмами автором создан банк данных больных, находившихся на лечении в клинике нервных болезней и нейрохирургии Уральской государственной медицинской академии с 1990 года.
2. Начиная с 1995 года, 200 больных с аневризмами, проживающих в городе Екатеринбурге и его окрестностях, были взяты на диспансерное наблюдение. В последующие годы автор диссертации проводила консультации этих больных, при этом анализировались все имеющиеся жалобы, изменения в неврологическом статусе, изменения в родословных за эти годы. При необходимости назначались дополнительные обследования (ультразвуковое исследование сосудов головного мозга, сердца, брюшной полости, почек, КТ или МРТ головного мозга). Пациентам были даны рекомендации по лечению артериальной гипертензии, нарушений обмена холестерина, атеросклероза, головных болей, по профилактике инфарктов и инсультов. Им назначались регулярные курсы лечения препаратами, улучшающими реологические свойства крови, метаболические процессы в головном мозге и когнитивные функции. При этом также были проконсультированы их родственники первой степени родства, которым также были проведены необходимые дополнительные методы обследования, в том числе МР-ангиография у 40 родственников.
В процессе консультаций у всех этих больных была взята кровь (10 мл) при пункции локтевой вены, которая была помещена в пробирки с консервантом (ЭДТА). В дальнейшем эти пробирки транспортировались в Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук. Кроме того, были обследованы 194 пациента контрольной группы, у которых была также взята кровь.
4. Автором разработана специальная карта и методика опроса больных с аневризмами для выявления и детализации факторов риска развития и симптомов до разрыва аневризм, методика проведения осмотра для выявления признаков дисплазии соединительной ткани, а также разработан алгоритм анализа данных морфологических и генетических исследований.
5. Все исследуемые биоптаты поверхностной височной артерии и кожи височной области были проанализированы совместно с морфологом.
6. Результаты всех исследований были занесены в таблицы EXEL для статистической обработки и произведены расчеты по всем анализируемым показателям.
7. Была достигнута договоренность о сотрудничестве и проведении генетических исследований в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук под руководством профессора, д.б.н. Хуснутдиновой Э.К.
8. Была достигнута договоренность о сотрудничестве и проведении части генетических исследований в городе Детройте, штат Мичиган, США после посещения в 2002 году отделения нейрохирургии и курса стажировки в университетском госпитале в городе Куопио, Финляндия. Эти исследования были проведены под руководством профессора генетики из Куопио Helena Kuivaniemi.
9. Самостоятельно осуществлен набор всех пациентов в исследование, анализ всей первичной медицинской документации (истории болезни, амбулаторные карты). В процессе интервью и обследований больных получена полная информация о всех факторах риска развития аневризм, а также информация о симптомах до развития аневризм, что было записано на специально разработанных картах опроса, а в дальнейшем эта информация была занесена в созданную на компьютере базу данных.
10. В процессе подготовки и написания диссертации были использованы все возможные ресурсы Интернет на русском и английском языках для поиска необходимой информации, абстрактов и статей по интересующим вопросам (Al-Shahi R. et al., 2003).
11. В процессе стажировки в университетской клинике в г. Куопио, Финляндия (2002) под руководством профессора Аntti Ronkainen и профессора Matti Vapalahti, курса обучения на кафедре неврологии в г. Утрехте, Голландия (2004) под руководством профессора Jan van Gijn и профессора Gabriel Rinkel, а также стажировки в г. Эдинбурге, Великобритания под руководством профессора Charles Warlow (2006) были усовершенствованы все проводимые исследования, получены полные тексты всех статей, используемых в диссертации, которые были переведены на русский язык, кроме того, были переведены на русский язык главы из некоторых книг на английском языке.
12. На основании статистического анализа данных о главных факторах риска и симптомов до разрыва аневризм создана шкала оценки риска развития аневризм и разработана схема скрининговой диагностики аневризм.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Основные положения диссертации обсуждались на Всероссийских конгрессах по нейрохирургии (Екатеринбург, 1995; Санкт-Петербург, 2004), региональных неврологических конференциях в г. Екатеринбурге, на региональном обучающем курсе по неврологии под эгидой Европейской Федерации неврологических обществ (Екатеринбург, 2006), на Европейской конференции по инсульту (Венеция, Италия, 1999), на Европейском конгрессе по нейрохирургии (Копенгаген, Дания, 1999), на Всемирном конгрессе по неврологии (Лондон, Великобритания, 2001), на конгрессе Европейского общества неврологов (Вена, 2005), на конгрессах Европейской Федерации неврологических обществ (Севилья, Испания, 1998; Париж, Франция, 2004; Афины, Греция, 2005; Глазго, Великобритания, 2006), где автор диссертации представляла стендовые и устные доклады.
ПУБЛИКАЦИИ
Содержание работы отражено в 40 печатных работах (из них в России — 23, за рубежом — 17), в том числе 8 – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация изложена на 237 страницах машинописного текста и состоит из введения, 7 глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 36 работ отечественных и 318 работ иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 13 рисунками и 44 таблицами.
СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
материалы И методы исследования
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СОБСТВЕННЫХ НАБЛЮДЕНИЙ
В основу настоящей работы положены результаты исследования, включающего 199 больных с интракраниальными аневризмами и 194 лиц контрольной группы, а также 812 родственников первой степени родства (РIстР) больных с аневризмами и 1011 РIстР контроля при анализе родословных и 40 РIстР больных с аневризмами при проведении скринингового исследования сосудов головного мозга. Данное исследование было одобрено этическим комитетом Уральской государственной медицинской академии.
Из 199 больных с аневризмами было 103 женщины и 96 мужчин. Их возраст варьировал от 14 до 73 лет, средний возраст – 43,2 года. Наиболее многочисленную группу составили больные в возрасте от 41 до 50 лет – 79 человек (39,7%).
36 человек (18,1%) имели множественные аневризмы, из них у 28 больных было 2 аневризмы, у пяти — 3 аневризмы, у одного — 4 аневризмы, у одного – 6 аневризм и еще у одного больного – 7 аневризм. С учетом множественных аневризм общее число их у 199 больных составило 251. Подробные сведения о локализации всех выявленных аневризм представлены в таблице 1.
Таблица 1
Локализация артериальных аневризм головного мозга в основной группе наблюдения
| Локализация | Число наблюдений | % к общему числу |
| Внутренняя сонная артерия (ВСА) | 79 | 31,5% |
| Передняя мозговая и передняя соединительная артерии (ПМА-ПСА) | 78 | 31,0% |
| Средняя мозговая артерия (СМА) | 64 | 25,5% |
| Основная артерия | 8 | 3,18% |
| Задняя соединительная артерия (ЗСА) | 14 | 5,57% |
| Задняя мозговая артерия (ЗМА) | 4 | 1,59% |
| Задняя нижняя мозжечковая артерия (ЗНМА) | 2 | 0,79% |
| Задняя верхняя мозжечковая (ЗВМА) | 1 | 0,39% |
| Позвоночная артерия | 1 | 0,39% |
| В С Е Г О | 251 | 100, 0 |
Наибольшее число аневризм локализовались в области внутренней сонной (ВСА) и передней соединительной артерии (ПМА-ПСА) — 79 и 78 аневризм соответственно, что составляет 62,5% от числа всех аневризм. На третьем месте по частоте были аневризмы средней мозговой артерии (СМА) — 64 аневризмы (25,5%). Всего на долю передних отделов виллизиева круга приходится 221 аневризма, на долю задних его отделов — 30 аневризм.
По размерам аневризмы распределились следующим образом: аневризматические выпячивания — 24 случая, маленькие размеры (менее 6 мм в диаметре) - 11 аневризм, средние размеры (6-15 мм в диаметре) — 189 аневризм, крупные (15-25 мм) — 14 аневризм, гигантские (более 25 мм) — 13.
190 больным было проведено хирургическое лечение. У 170 пациентов выполнено клипирование шейки аневризмы, у 8 — укрепление стенки аневризмы кусочком мышцы, у 6 — клипирование аневризмы и укрепление стенки мышцей, у 3 — окклюзия артерии баллон-катетером и эмболизация полости аневризмы спиралями, у 2 — создание экстра-интракраниального анастомоза и последующее клипирование аневризмы, у 1 – удаление гигантской аневризмы. Большинство больных прооперировано в «холодном» периоде кровоизлияния. При выполнении открытых операций использовался разработанный в клинике В.П. Саковичем с соавт. малотравматический доступ (Сакович В.П., Колотвинов В.С., Лебедева Е.Р., 2007). Трепанация черепа производилась в области птериона корончатой фрезой диаметром всего 35 мм. У 9 больных операции не было вследствие отказа больного от хирургического лечения или в связи с тем, что аневризмы были неоперабельные.
При проведении морфологических исследований операционных биоптатов поверхностной височной артерии (ПВА) и кожи височной области использовалась группа 50 больных с интракраниальными аневризмами, которым выполнено хирургическое лечение аневризм (клипирование или укутывание аневризмы кусочком мышцы). Среди них- 33 мужчины и 17 – женщины. Их возраст варьировал от 22 до 62 лет, средний возраст – 41,8 лет.
При исследовании генов аполипопротеина Е, гена ангиотензин-превращающего фермента, коллагена 3 типа и гена ингибитора протеиназы серина использовалась группа 166 больных с аневризмами, среди них – 83 женщины и 83 мужчины, их возраст варьировал от 14 до 73 лет, средний возраст составил 43,5 года. Кроме того, при исследовании генов калликреина использовалась группа 368 финских пациентов с ИА, среди них - 191 женщины и 177 мужчины, их средний возраст при диагностике аневризмы составил 47,5, а при этом использовалась группа 156 больных русской популяции (77 –женщины и 79 – мужчины), средний возраст которых составил 43,5 лет. Эти 156 больных входят в состав 199 исследуемых больных с ИА.
К родственникам первой степени родства были отнесены родные отец и мать, братья, сестры, а также дети больных с аневризмами. Скрининговое исследование сосудов головного мозга было проведено у 40 РIстР, среди них было 33 женщины и 7 мужчин. Их возраст варьировал от 18 до 63 лет.
При проведении данного исследования использовались три контрольные группы. Первую контрольную группу составили практически здоровые доноры областного центра переливания крови «Сангвис» - 194 человека, из них 108 – мужчины и 86 – женщины. Их возраст варьировал от 18 до 59 лет, средний возраст – 38,4 года. Эти пациенты использовались для сравнения результатов клинических и генетических исследований с основной группой больных с ИА. При проведении исследования генов калликреинов использовалась также контрольная группа, состоящая из 392 финских пациентов без аневризм (195 – женщины и 197 – мужчины). При проведении морфологических исследований использовалась контрольная группа, состоящая из 18 больных с черепно-мозговыми травмами, их возраст варьировал от 30 до 73 лет, средний возраст- 46,6 лет.
МЕТОДЫ ОБСЛЕДОВАНИЯ БОЛЬНЫХ
Методы обследования больных включали:
Сбор данных анамнеза заболевания, анамнеза жизни больных и их родословных.
- Неврологическое обследование и физический осмотр.
- Церебральная ангиография сосудов головного мозга, магнитно-резонансная томография (МРТ), МР-ангиография сосудов головного мозга, компьютерная томография (КТ) и КТ-ангиография сосудов головного мозга, ультразвуковое исследование сосудов головного мозга.
- Морфологическое исследование операционных биоптатов поверхностной височной артерии и кожи височной области.
- Генетические исследования – исследование 5 генов: гена аполипопротеина Е, гена ангиотензин-превращающего фермента, гена коллагена 3 типа, гена ингибитора протеиназы серина и генов кластера калликреинов.
Сбор данных анамнеза заболевания, анамнеза жизни больных, экспертного анамнеза и родословных пациентов осуществлялся в процессе интервью, при клиническом осмотре больных, а также при анализе медицинской документации, данных МРТ, КТ головного мозга и результатов дополнительных обследований. Для сбора данных использовалась специально разработанная проформа. В процессе сбора данных использовался опрос самих пациентов и их родственников. Родословные пациентов включали родственников I степени родства как наиболее генетически близких. Родословные были собраны у 194 пациентов с интракраниальными аневризмами и у 193 пациентов контрольной группы. Мы включили в исследование только тех родственников I степени родства, о которых была полная информация об их заболеваниях.
Физический осмотр включал осмотр по системам, измерение артериального давления (АД), пульса. С целью определения признаков соединительно-тканной патологии у всех больных с интракраниальными аневризмами и пациентов контрольной группы общий осмотр проведен по особой методике. Он включал определение конституции, роста, веса, растяжимости кожи над серединой ключицы в положении стоя и толщины кожной складки на тыле кисти. Растяжимость кожи считалась повышенной, если величина кожной складки над наружными концами ключиц была не менее 4,0 см. Кроме того, определялось наличие видимых мелких сосудов на лице, груди и других участках тела, телеангиоэктазий, ангиом, липом, стрий, варикозного расширения вен, выявление деформаций грудной клетки, сколиоза, плоскостопия, арахнодактилии, диастаза прямых мышц живота, грыж, проведение проб для выявления гипермобильности суставов (признак запястья и большого пальца). Признак большого пальца считали положительным, если дистальная фаланга I пальца смещалась за ульнарный край ладони. Признак запястья — если дистальные фаланги I и V пальцев частично перекрещивались при обхвате запястья противоположной руки (Pope F. M., 1995). Индекс массы тела был рассчитан по формуле: вес (кг) разделить на рост (м) в квадрате. Неврологический статус был исследован по стандартной методике.
Для выявления аневризм сосудов головного мозга производилась церебральная ангиография на аппарате PHILIPS BW 300, МР-ангиография или КТ-ангиография на аппаратах PHILIPS TOMOSCAN NT и PHILIPS JIYROSCAN T5. Церебральная ангиография выполнялась под местной анестезией путем зондирования магистральных артерий головы через бедренную артерию по способу Сельдингера. Кроме того, больным выполнялась компьютерная или магнитно-резонансная томография головного мозга, а также транскраниальная допплерография на аппарате APOGEE 800 PLUS, ATL (США). В качестве скринингового исследования сосудов головного мозга выполнялась МР-ангиография.
Биоптаты поверхностной височной артерии и кожи височной области были взяты в процессе операции. Они фиксировались в 10% нейтральном формалине. Затем, после соответствующей проводки по спиртам, заливались в парафиновые блоки. Срезы толщиной 3-5 мкм окрашивались гематоксилином и эозином, по Вангизону. Наряду с общепринятыми гистологическими окрасками применяли окраску по Вейгерту на эластические волокна, использовали ШИК-реакцию на гликопротеиды и окраску по Хэйлу.
Морфологические исследования выполнены заведующей отдела морфологии к.м.н. С.Ю.Медведевой в центральной научно-исследовательской лаборатории Уральской государственной медицинской академии г. Екатеринбурга. При этом исследование было "слепым", т.е. исследователь не знал, какие биоптаты относятся к контролю, а какие – к группе больных с аневризмами. Анализ всех биоптатов был повторен дважды, при этом все биоптаты также просматривались автором диссертации.
Генетические исследования проведены старшими научными сотрудниками к.м.н. Р.И. Хусаиновой и к.м.н. И.А. Кутуевым в Отделе геномики Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук (зав. Отделом геномики - д.б.н., профессор Э.К. Хуснутдинова). Исследование генов калликреинов проведено в центре молекулярной медицины и генетики университета Детройта, Мичиган, США доктором Shantel Weinsheimer под руководством профессора Helena Kuivaniemi (директор центра – профессор Gerard Tromp).
Выделение ДНК из цельной крови проводилось методом последовательной фенольно-хлороформной экстракции (Mathew C.C., 1984). Генотипирование образцов проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК на амплификаторе «Терцик» производства компании “ДНК-технология” с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы “Силекс ” и праймеров, описанных ранее (Rigat B.,1992; Wenham P.R. et al., 1991).
При исследовании генов калликреинов проведено трехэтапное исследование по типу “случай-контроль”, с использованием образцов ДНК больных с ИА и контроля из финской и русской популяций. Было отобрано 19 однонуклеотидных полиморфизмов для создания гаплотипов, располагающихся в области 244 т.п.о. в кластере гена калликреина, используя компьютерную программу (SNPBrowser™ software version 2.0 Applied Biosystems; Foster City, CA).
Геномная ДНК была выделена из периферической крови при помощи набора Puregene (Gentra Systems, Minneapolis, Minnesota); полногеномная амплификация была проведена с использованием предшествующей амплификации удлинения праймеров (primer extencion preamplification, PEP) (Kuivaniemi H. et al., 1993). Для каждой генотипической реакции использовали 1 мкл из разведенных в 100 раз продуктов PEP. Генотипирование выполнено с использованием готового 5’-нуклеазного набора (Taqman® Assay; Applied Biosystems) в ABI PRISM® Sequence Detection System 7900.
МАТЕМАТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Статистическая обработка результатов проводилась с помощью пакета программ Statistica (ver. 6.0) (Реброва О.Ю. 2003; StatSoft, 1999). Связь между количественными показателями оценивалась с помощью линейного коэффициента корреляции (р), достоверность которого определялась с помощью Z-преобразования с последующим вычислением Т-критерия. Для качественных показателей вычислялась частота встречаемости в виде процента. В случае наличия достоверных отличий в исследуемых выборках проводилась оценка показателя отношения шансов (ОШ), а также границ его 95% доверительного интервала (95% ДИ). В некоторых случаях произведен расчет относительного риска (ОР) и границ его 95% ДИ.
При попарном сравнении частот аллелей и генотипов в группах больных и контроля применялся критерий χ2 для таблиц сопряженности 2×2, а также критерий χ2 с поправкой Йейтса, когда число наблюдений хотя бы в одном случае было менее 6. Расчет мощности исследования при исследовании генов кластера калликреина был выполнен c использованием Genetic Power Calculator (Purcell S. еt al., 2003). Анализ ассоциаций однонуклеотидных полиморфизмов произведен на основе двух программ - Haploview и DECIPHER.