Дослiдження антагонiстичних властивостей сучасних пробiотикiв
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
оСЧ захворюваностi понад 72 86 % населення УкраСЧни, особливо дiтей, повиннi не менше як двiчi на рiк проводити курс пробiотикотерапiСЧ чи пробiотикопрофiлактику.
На сьогоднi пробiотичнi препарати в УкраСЧнi виробляють досить мало пiдприСФмств. Серед них Одеське пiдприСФмство з виробництва iмунобiологiчних препаратiв, КиСЧвське пiдприСФмство з виробництва бактерiйних препаратiв тАЬБiофарматАЭ, Харкiвське орендне пiдприСФмство тАЬБiолiктАЭ. Це такi препарати, як бiфiдобактерин, лактобактерин, бiфiкол. На превеликий жаль технологiя виготовлення флаконних лiкарських форм пробiотикiв, що використовуСФться украСЧнськими виробниками, настiльки несучасна, що говорити про забезпечення населення УкраСЧни вiтчизняними пробiотиками нинi неможливо. Пiдходи до технологiСЧ виробництва, що iснують в УкраСЧнi (вiдсутнiсть порошкоподiбних форм) не дозволяють вирiшити питання повноцiнного широкого профiлактичного застосування пробiотикiв на цивiлiзованому рiвнi.
Винятком СФ деякi молокозаводи, що виробляють кисломолочнi сумiшi з включенням бiфiдобактерiй. Слiд розробляти препарати пробiотикiв, збагаченi компонентами, якi сприяють кращiй пролiферацiСЧ i адсорбцiСЧ бiфiдо- i лактобактерiй (лактулоза, вiтамiни, харчовi i синтетичнi волокна). Необхiдно розширювати спектр кисломолочних харчових продуктiв.
Отже, в сучасний перiод застосування пробiотикiв та пребiотикiв, в звязку iз встановленням позитивноСЧ дiСЧ останнiх на органiзм людини, набуваСФ все бiльшого поширення. Значно збiльшуСФться кiлькiсть пробiотичних препаратiв, розширюСФться спектр СЧх використання. Часто, однак, активнiсть пробiотикiв в експериментi та клiнiчних умовах не спiвпадають, що потребуСФ подальшого збагачення знань вiдносно способу дiСЧ окремих препаратiв, проведення коректних дослiджень з метою визначення показiв для застосування пробiотичних препаратiв.
Роздiл 2. Матерiали та методи дослiджень
2.1 Матерiали дослiджень
ОбСФктом дослiдження являлись:
- виробничi штами: E.coli M17 (препарат тАЬКолибактеринтАЭ) та B.cereus IP 5832 (тАЬБактисубтилтАЭ).
Препарат тАЬКолибактерин сухойтАЭ (Colibacterinum siccum) представляСФ собою лiофiлiзовану мiкробну масу живих кишкових паличок - штам E.coli М17, виготовлений КиСЧвським пiдприСФмством з виробництва бактерiйних препаратiв тАЬБiофарматАЭ. ВипускаСФться у флаконах. Одна доза мiстить 1*10МК.
тАЬБактисубтилтАЭ (Bactisubtil) кожна капсула препарату мiстить 1млрд. спор бактерiй культури B.cereus IP 5832. Фiрма-виробник Hoechst Marion Roussel.
- колекцiя свiжевидiлених та музейних тест-культур (включаючи набiр тест-штамiв, якi використовуються при контролi антагонiстичноСЧ активностi пробiотикiв: Shigella sonnei 2802, 5063 Shigella flexneri 337, 170; Escherichia coli 157; Proteus vulgaris 177; Proteus mirabilis 24а, 249; Staphylococcus aureus 209): 24 клiнiчних штами роду Shigella (збудники дизентерiй); 26 клiнiчних штамiв представникiв патогенноСЧ та умовно патогенноСЧ мiкрофлори людини (родiв Escherichia, Staphylococcus, Klebsiella, Pseudomonas, Enterobacter, Proteus); 4 колекцiйнi штами (Staphylococcus epidermidis) та 11 музейних штамiв, якi були люб`язно наданi нам для проведення дослiджень КиСЧвським науково-дослiдним iнститутом епiдемiологiСЧ та iнфекцiйних хвороб iм.Л.В. Громашевського (КНДРЖЕРЖХ), за що висловлюСФмо вдячнiсть.
2.2 Методи дослiдження культурально-бiохiмiчних властивостей штамiв
Дослiдження культуральних i ферментативних властивостей штамiв продуцентiв проводили загальноприйнятими методами, використовуючи диференцiально-дiагностичнi середовища (середовище Ендо, Левiна, Плоскiрева, Сабуро, КА,Цейсслера).
2.3 Метод визначення антагонiстичноСЧ активностi мiкроорганiзмiв
Для оцiнки явища мiкробного антагонiзму окремих компонентiв та композицiй пробiотичних продуктiв, а також офiцiальних препаратiв-пробiотикiв в умовах in vitro використовували вiдповiднi методики [68]. Антагонiстичну активнiсть визначали по вiдношенню до патогенних та УПМ з колекцiСЧ живих культур лабораторiСЧ загальноСЧ мiкробiологiСЧ КНДРЖЕРЖХ i до клiнiчних iзолятiв, видiлених iз обстежених осiб, використовуючи метод вiдстроченого антагонiзму.
Тест-культури
З метою оцiнки антагонiстичноСЧ активностi виробничого штаму використовують тест-культури, якi повиннi знаходитись в S-формi клiтинного циклу, володiти типовими морфологiчними, серологiчними, бiохiмiчними властивостями i вiрулентнiстю, яка визначаСФться для мiкробiв кишковоСЧ групи величиною LD50 при внутрiшньочеревному зараженi бiлих мишей; для шигелл Флекснера повинна бути не бiльше 250 млн МК при зараженнi суспензiСЧ живих мiкроорганiзмiв в 0.9% розчинi хлориду натрiю або не бiльше 20 млн МК при зараженнi в 0.4% голодному агарi; для S. sonnei - не бiльше 50 млн МК при зараженнi в 0.9% розчинi хлориду натрiю; для штамiв Proteus - не бiльше 350 млн МК в 0.9% розчинi хлориду натрiю i 30-50 млн МК в 0.4% голодному агарi.
Тест-культури шигелл Флекснера i Зонне повиннi давати позитивну кератоконюктивну пробу у морських свинок.
Тест-культури стафiлококу повиннi володiти наступними властивостями: утворювати зону гемолiзу розмiром (3-5) мм через (191) годин росту на МПА з 0.5% кровi (людини, барана, кроля), розлитому в чашки Петрi шаром (2-3) мм; коагулювати плазму кровi кроля на протязi (21) годин; викликати некроз при пiдшкiрному введеннi 200 млн МК добовоСЧ культури в 0.2 см3 0.9% розчину хлориду натрiю кролям вагою (1.50.2) кг на протязi 48-72 годин.
Антагонiстичну активнiсть штамiв перевiряли до таких музейних штамiв як S.flexneri, S.sonnei, ентеропатогенних E. coli, S.aureus, Proteus vulgaris i Proteus mirabilis (стандартних тест-штамiв, якi використовуються для к?/p>