Действие экстракта гриба Fusarium на биохимические показатели прорастания семян
Дипломная работа - Сельское хозяйство
Другие дипломы по предмету Сельское хозяйство
створа карбоната натрия, все тщательно перемешивали и вьдерживали в темном месте. Через 15 минут измеряли оптическую плотность полученного раствора на фотоколориметре при длине волны 720 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служила вода очищенная.
Содержание суммы фенольных соединений в процентах (X) в пересчете на галловую кислоту в абсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:
А - оптическая плотность исследуемого раствора;- объем экстракта, мл; - объем раствора для спектрофотометрирования, мл; - объем экстракта, взятый для определения, мл;
- удельный показатель поглощения галловой кислоты в комплексе с реактивом Фолина-Чиокальто при длине волны 720 нм, равный 90;
m - масса сырья в граммах;
W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
2.6 Количественное определение суммы проантоцианидинов
Действие проантоцианидинов обусловлено их способностью связывать свободные радикалы (активные биомолекулы, уменьшать интенсивность окислительных процессов в организме. Замедляют процессы старения и износа клеточных мембран и самих клеток, а следовательно и всего организма в целом; повышают устойчивость к воздействию радиации и других вредных факторов внешней среды, усиливают иммунитет, нормализуют функции сердечнососудистой и нервной систем, обладают анитиканцерогенным действием, что препятствует развитию рака; оказывают выраженный косметический эффект. Проантоцианидины легко проникают через гематоэнцефалический барьер, осуществляя защиту и восстановление клеток мозга [27].
К 0,1мл полученного извлечения прибавляли 0,1 мл железосодержащего реактива (2% раствор FeNH4(S04)2 в 1 н кислоте хлористоводородной) и 2,8 мл 5% раствора кислоты хлористоводородной в н-бутаноле. Флакон с полученным раствором закрывали пробкой и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. После охлаждения измеряли оптическую плотность при длине волны 550 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения такой же раствор без нагревания.
Содержание суммы проантоцианидинов в процентах (X) в абсолютно сухом сырье вычисляли по формуле:
А - оптическая плотность исследуемого раствора;
- удельный показатель поглощения цианидин-хлорида, равный 136;- объем экстракта, мл;
V2 - объем раствора для спектрофотометрирования, мл;
V3 - объем экстракта, взятый для определения, мл;
m - масса сырья в граммах;- потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
.7 Определение ТБК-реагирующих соединений
Различные токсиканты, в том числе тяжелые металлы, могут вызывать окислительный стресс у растений, стимулируя образование в клетках активных форм кислорода (АФК). Супероксидный радикал (О2.-),пероксид водорода (Н2О2) и гидроксильный радикал (НО.) обладают очень высокой агрессивностью и способны повреждать практически все компоненты клетки. Активные радикалы, главным образом НО., взаимодействуя с органическими веществами, образуют гидропероксиды ДНК, белков, липидов (ROOH). Гидропероксиды, также как и пероксиды, химически активны и в ходе метаболизма переходят в спирты, альдегиды, эпоксиды и другие окисленные соединения. Образование ROOH называют перекисным окислением. В липидах в основном в полиненасыщенных жирных кислотах АФК вызывают цепные реакции с накоплением липидных (L.), пероксильных (LOO.), алкоксильных (L0.) и других радикалов. Участие тяжелых металлов с переменной валентностью, таких как медь, железо, кобальт и др. приводит к разветвлению этой цепи. Перекисное окисление липидов является индикаторной реакцией повреждения клеточных мембран. В результате ПОЛ образуются конечные метаболиты (малоновый диальдегид, этан, пентан и др.), реагирующие с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-реагирующих продуктов) [39].
Приготовление реакционной среды:
В 100 мл дистиллированной воды растворяли 10 г трихлоруксусной кислоты и 250 мг тиобарбитуровой кислоты.
Ход определения. Растительный материал (300 мг сырых листьев) растирали в ступке с небольшим количеством реакционной смеси, состоящей из 0,25% раствора тиобарбитуровой кислоты (ТБК) в 10% растворе трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Для лучшего растирания добавляли стеклянный песок. Гомогенат переносили в мерную пробирку и доводили объем реакционной средой до 4 мл. Пробы перемешивали и помещали в нагретую до 95С водяную баню на 30 мин. Затем пробы резко охлаждали, помещая в сосуд с холодной водой. Содержимое проб переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали 10 мин при 10000 об/мин. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре СФ-2000 при ? = 532 нм и 600 нм против контроля, содержащего 0,25% раствор ТБК в 10% растворе ТХУ. Концентрацию ТБК-реагирующих соединений рассчитывали с учетом коэффициента экстинкции 155 мМ-1 см-1.
А (ммоль/г ) = (?532-?600)/(155*0,3)
3. Результаты исследований и их обсуждение
.1 Морфометрические параметры прорастания зерна
Всхожесть семян
Это способность семян образовывать нормально развитые проростки, то есть стебли растения в самом начале его развития из семени (ростки) вместе с развившимися зародышевыми корешками. Всхожесть определяют проращиванием семян в течение 7-10 дней при оптимальных условиях, установленных для каждой культуры.
Энергия прорастания
Это способность семян быстро и дружно прорастать. Энергию прорастания определяют в тех же условиях и однов?/p>