Хроматографическое разделение углеводов
Информация - Разное
Другие материалы по предмету Разное
можным селективное разделение индивидуальных веществ или классов соединений.
Как показали Кремер и Мюллер (1951г), при применении адсорбентов в качестве неподвижной фазы в некоторых случаях переход вещества происходит не между подвижной фазой и адсорбентом, а между подвижной фазой и адсорбционным слоем, покрывающим адсорбент (хроматография с использованием адсорбционных слоев). Розелиус (1957) добился разделения инертных газов на адсорбционном слое из двуокиси углерода. Следовательно, неподвижной фазой в данном случае был газ.
Описанные виды хроматографии почти все экспериментально осуществлены как с газообразной, так и с жидкой подвижными фазами. Целесообразно принять следующие их названия: распределительная газовая хроматография, газоадсорбционная хроматография на молекулярных ситах, адсорбционно-жидкостная хроматография, обменно-жидкостная хроматография.
На практике наблюдаются многочисленные промежуточные виды хроматографии. Хроматография, основанная на комплексообразовании, всегда связывается с распределительной хроматографией, потому что комплексообразователь находится в жидкости. Между адсорбционной и распределительной хроматографиями не существует резкого разграничения. С одной стороны, на поверхности носителя, как покрытой, так и не покрытой жидкостью, может иметь место адсорбция, с другой адсорбционную хроматографию можно частично приблизить к распределительной путем модификации адсорбентов. Примером этого может служить хроматография на адсорбционных слоях. Наконец, при низких температурах колонок может проявиться адсорбция на поверхности жидкой неподвижной фазы.
Четкое разграничение отдельных видов хроматографии, очевидно, невозможно. Дести (1957) предложил в связи с этим классификацию только на основе агрегатного состояния обеих фаз:
хроматография газ жидкость (ГЖХ),
хроматография газ твердое тело (ГТХ),
хроматография жидкость жидкость (ЖЖХ),
хроматография жидкость твердое тело (ЖТХ).
Принцип действия жидкостного хроматографа
Рис. 2 Схема жидкостного хроматографа.
Любой жидкостной хроматограф состоит из следующих частей:
1 насос;
2 узел ввода пробы;
3 хроматографическая колонка;
4 детектор;
5 регистратор (самописец, интегратор или компьютер);
6 термостат колонок;
7 узел подготовки элюента с емкостями для элюента;
8 слив элюата или коллектор фракций.
Принцип действия хроматографа заключается в следующем: раствор анализируемой смеси с помощью УЗЛА ВВОДА ПРОБЫ вводится в верхнюю часть хроматографической КОЛОНКИ. С помощь НАСОСА анализируемая смесь прокачивается элюентом через хромотографическую КОЛОНКУ, в которой происходит разделение анализируемой смеси на отдельные вещества (компоненты). Вытекающий из колонки ЭЛЮАТ, содержащий отдельные компоненты анализируемой смеси, детектируется ДЕТЕКТОРОМ, показания которого регистрируются РЕГИСТРАТОРОМ.
Рис.3. Схема газохроматографической установки.
1 баллон со сжатым газом-носителем; 2 вентиль; 3 регулятор и измеритель скорости газа-носителя; 4 дозатор; ,5 проба; 6 хроматографическая колонка; 7 детектор; 8 выход газа; 9 питание детектора; 10 преобразователь сигналов; 11 ленточный самописец; 12 терморегулятор; 13 термостат.
ПРИМЕРЫ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЕ УГЛЕВОДОВ
1. Хроматография на колонках с углем/5/
Колоночная хроматография на угле была впервые описана в 1950 г.Уистлером и Дерсо. Они использовали этот метод для разделения углеводов на классы в зависимости от степени их полимеризации, т. е. моносахариды, дисахариды, трисахариды и т. д.
Согласно работе, разделение проводилось как ступенчатое элюирование углеводов водным спиртом из колонки, содержащей смесь угля iелитом. Этот метод получил распространение и особенно широко применялся для разделения серии гомологичных олигосахаридов. Однако разделения более сложных смесей, например олигосахаридов одного и того же класса, необходимо градиентное элюирование.
Хроматография на колонках с углем пригодна не только для разделения олигосахаридов, она также применялась для разделения кислых углеводов, многоатомных спиртов и их ацетатов, олигосахаридов, содержащих аминосахара, и метиловых эфиров сахаров. В каждом случае хроматография на угольных колонках, по-видимому, превосходит все другие методы, так как позволяет добиться желаемого разделения; однако, если нужно разделить сложную смесь, обычно необходимо предварительное градиентное элюирование. Новый метод разделения дисахаридов был опубликован в 1955 г.; он основан на способности некоторых дисахаридов образовывать в мягких условиях метилфуранозиды. Эти метилглюкозиды абсорбируются сильнее свободных сахаров.
Хроматография на угольной колонке удобна еще и тем, что угольная колонка обладает высокой емкостью, а это позволяет количественно выделить компоненты и разделить большие количества материала. На эффективность разделения не влияет присутствие неорганических солей или степень разведения раствора сахара. В лабораториях некоторых исследователей для дезактивации угля применялась концентрированная соляная кислота. Элм, Вильямс и Тизелиус насыщали уголь стеариновой кислотой (1% кислоты в 96%-ном спирте). Предварительная дезактивация или насыщение увеличивает возврат введенных в колонку веществ почти до 100%, позволяет элюировать сильно адсорбирующиеся высшие олигосахариды и улучша?/p>