Хроматографическое разделение углеводов
Информация - Разное
Другие материалы по предмету Разное
В±ент. Другой конец трубки присоединен к вакуум-насосу. Для улавливания сорбента в трубку помещают кусок стеклянной ваты. К попавшему в трубку сорбенту добавляют хлороформ (20 мл), осадок отфильтровывают и промывают 20 мл хлороформа. Фильтрат упаривают при пониженном давлении и остаток повторно растворяют в хлороформе, чтобы удалить все следы сорбента. Из нижней зоны выделяют в виде беiветного сиропа метил-2,3,6-три-О-бензил-4-О-этил--D-глюкопиранозид.
Из верхней зоны выделяют метил-2,3,6-три-O-бензил-4-O-этил--D-глюкопиранозид.
5. РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА ИОНООБМЕННЫХ СМОЛАХ
Впервые разделение углеводов методом распределительной хроматографии на ионообменных смолах в смесях растворителей различной полярности было описано в 1952 г. В последние годы метод был значительно усовершенствован. В качестве элюента при разделении сахаров и их производных наиболее пригоден водный спирт, и далее речь будет идти только об этом элюенте.
Одним из основных факторов, обусловливающих сорбцию сахаров точно так же, как и других полярных неэлектролитов в данном виде хроматографии, является неодинаковое распределение компонентов элюирующей смеси между смолой и внешним раствором. В случае водного спирта относительное количество воды в неподвижной фазе выше, чем в подвижной, и этим объясняется тот факт, что смолой преимущественно удерживаются полярные вещества. На состав подвижной и неподвижной фаз существенное влияние оказывает также взаимодействие смола - растворитель и смола - растворенное вещество. При
смене противоиона порядок элюирования некоторых сахаров может измениться.
Коэффициенты распределения веществ возрастают с увеличением концентрации спирта и уменьшаются с повышением температуры. За редким исключением, коэффициенты распределения растут с увеличением числа гидроксильных групп в молекуле. Введение в молекулу неполярных групп, например метильных, приводит к уменьшению коэффициента распределения. Величина последнего зависит также от положения заместителей.
В табл.5 приведены коэффициенты распределения ряда свободных сахаров.
Распределительная хроматография на ионообменных смолах была с успехом применена для разделения моно- и олигосахаридов, альдитов и производных сахаров, не содержащих ионогенных группировок, например гликозидов и частично метилированных сахаров. Этот метод можно использовать как в аналитических, так и в препаративных целях.
Таблица 5. Коэффициенты объемного распределения (Dv) некоторых моносахаридов и ангидросахаров при различных температурах и концентрациях спирта
СахараПористая смола (SO42-)
75ССмола малой
Емкости (SO42-)
75 СДауэкс (SO42-)
90СДауэкс (Li+)
75 САмберлит IR-120 (Li+)75 С100 С Концентрация этанола, 86908692,492,4Эритроза3,081,9Треоза3,841,4Рибоза6,554,065,804,984,03,1Арабиноза10,16,269,797,563,83,0Ксилоза12,57,3812,19,192,73,02,4Фруктоза13,58,0413,810,35,64,3Сорбоза8,9315,611,04,63,7Манноза16,49,3716,911,85,34,4Галактоза23,413,024,416,15 76,85,3Глюкоза28,114,929,519,54 85,44,4Альтроза16,64 2Рамноза4,752,804,113,541.41,2Фукоза3,254,964,192,41,8
На рис.4 приведена принципиальная схема прибора, используемого для разделения сахаров. Элюент (спирт вода) помещают в колбу Мариотта и обезгаживают кипячением, чтобы предотвратить появление пузырьков воздуха в колонке. За колбой расположена открытая градуированная трубка, обычно заполненная элюентом. Скорость движения элюента в системе регулируют, перекрывая выходное отверстие колбы. Элюент подается в колонку поршневым насосом из нержавеющей стали который помещают ниже остальных аппаратов системы элюирования..
Рис. 4 Аппаратура для проведения хроматографического разделения и автоматического анализа сахаров орциновым методом.
Давление измеряют манометром Бурдона, снабжённым прерывателем. Последний отключает насос и нагреватель, если давление в системе превышает норму (80 атм) и также если оно падает из-за утечки жидкости. Анализ можно проводить на колонках, имеющих пористое дно и тефлоновое уплотнение на верхнем конце колонки. Если работа ведется при высоком давлении, не рекомендуется пользоваться колонками со стеклянными фланцами. Вместо них можно использовать стеклянные трубки с приклеенными эпоксидной смолой муфтами из поливинилхлорида.
Чтобы в колонке поддерживалась требуемая температура(70-90 С), по рубашке колонки циркулирует вода из термостата. Повышение температуры колонки приводит к сужению зон вымываемых веществ и снижению рабочего давления.
Смолы, применяемые в распределительной хроматографии, представляют собой сильноосновные аниониты или сильнокислые катиониты, основу которых составляет сополимер стирола и дивинилбензол. В аналитических колонках, диаметр которых равен 26 мм, а скорости элюирования высокие (820 мл-см-2мин-1), рекомендуется использовать мелкозернистые смолы с размером частиц 813 или 1015 мкм. Для препаративнго разделения сахаров на широких колонках (диаметр 1225 мм) и при меньшей скорости элюирования можно применять более грубые смолы.
Колонку промывают элюентом до тех пор, пока не образуется однородный слой ионита. После этого растворитель, находящийся над слоем смолы, отсасывают, в колонку переносят новую порцию суспензии и операцию повторяют. Перед хроматографическим разделением заполненную колонку приводят в состояние равновесия с элюентом данного состава, промывая ее элюентом не менее 16 ч.
АНАЛИЗИРУЮЩАЯ СИСТЕМА. Определение сахаров и их различных производных