Спектрофотометрия в фармакопейном анализе
Дипломная работа - Медицина, физкультура, здравоохранение
Другие дипломы по предмету Медицина, физкультура, здравоохранение
растворителя, или вследствие ионизации, что часто зависит от природы растворителя.
Ширина щели является одной из наиболее важных переменных величин в спектрофотометрии. Чистота (монохроматизм) излучения частично зависит от ширины щели. Относительная интенсивность полосы при любой длине волны будет неодинаковой; наивысшая интенсивность приходится на центр полосы и уменьшается к ее краям. Если входную щель уменьшить, относительная интенсивность становится более однородной. Однако нельзя уменьшать ширину щели бесконечно, существует предельная величина (оптимальная ширина щели), за которой любое уменьшение щели снижает интенсивность излучения. Центр полосы, имеющий максимальную интенсивность, называется средней длиной волны и является величиной, отмечаемой на шкале длин волн.
Ширина щели имеет большое значение при анализе веществ с узкими адсорбционными полосами. Если используется слишком широкая щель, то существует возможность, что измерение будет выполнено при длинах волн на каждой стороне острого максимума (пика), в связи с чем показание (величина) поглощения окажется низким.
Имея в виду этот факт, Британская фармакопея указывает, что при измерении поглощения три максимуме адсорбции ширина спектральной щели должна быть меньше половины ширины полосы поглощения, иначе может быть ошибочно определена низкая величина поглощения. Особенно внимательно нужно относиться к измерениям таких веществ, как апоморфина гидрохлорид, хингамин, дийодгидроксихинолин, нафазолина нитрат, папаверина гидрохлорид и проциклидина гидрохлорид, которые имеют очень узкую полосу поглощения.
При обычных рабочих условиях ширина полосы составляет от 1 до 5 нм на щель, что является удовлетворительным, за исключением узких максимумов.
Возможные ошибки независимо от ширины щели вероятны в случае, если излучение источника и чувствительность фотоэлемента низкие, пропускаемость растворителя, кювет или призм неудовлетворительная вследствие старения, загрязнения, повреждения или если определение проводится на пределе возможной области.
С призменными инструментами ширина полосы, соответствующая установленной ширине щели, не является постоянной по всей шкале волн, так как разрешение спектра изменяется с длиной волны и увеличивается с ее уменьшением. Настройка ширины щели не является необходимой для ряда приборов, в которых всегда используются условия максимальной чувствительности.
Большинство спектрофотометрических измерений проводится в растворах. В качестве растворителей для области от 220 до 780 нм используются дистиллированная вода, метиловый, этиловый и другие спирты, диоксан, эфиры и низшие углеводороды. При выборе растворителя важно, чтобы он не поглощал в той же части спектра, что и растворенное вещество. Для получения спектроскопически чистых растворителей последние подвергают дополнительной очистке. Проба растворителей на отсутствие бензола может быть выполнена путем измерения поглощения в области от 230 до 265 нм, образцом для сравнения служит дистиллированная вода.
Британская фармакопея определяет, что при измерении поглощения раствора при определенной длине волны поглощение контрольной кюветы и растворителя не должно превышать 0,4 и в общем должно быть меньше чем 0,2, когда измеряется по отношению к воздуху при той же длине волны. Растворители должны быть свободны от флюореiенции, что может привести к возникновению эффекта рассеяния света и последующей ошибке при измерении.
Структура и положение полос поглощения для ряда веществ зависят от природы растворителя. Полярные растворители, как правило, изменяют положение полос и упрощают их колебательную структуру. На рис. 5 и 6 приведены спектры адреналина и сульфафуразола в зависимости от реакции среды.
При сравнении двух кривых поглощения необходимо использовать один и тот же растворитель, поэтому в фармакопейном анализе указывают рН среды или растворитель, который используют в опыте.
Отклонения от закона Ламберта - Бера могут быть также вызваны рассеянием света. Рассеяние света - это любое излучение, которое попадает в фотоэлемент, минуя раствор. Причинами возникновения рассеяния света могут быть неправильный выбор фильтров, слишком широкая полоса поглощения, установленная на приборе, а также сильное поглощение и флюореiенция растворителя.
Вследствие недостатков оптической системы прибора небольшое количество рассеянного излучения может обычно присутствовать, однако оно возрастает по мере старения зеркал и источника излучения, что иногда приводит к получению ложного максимума. Такие максимумы обычно для предела ультрафиолетовой области около и ниже 220 нм, следовательно, показания ниже 220 нм нельзя считать достоверными, если не доказано отсутствие рассеянного света или его количеством можно пренебречь.
Поправку на рассеяние света можно определить путем измерения поглощения для двух или более различающихся слоев, где поглощения должны быть в прямой зависимости от толщины слоя.
Глава 3. Инфракрасная спектрофотометрия
.1 Основа метода
Спектрофотометрия в инфракрасной области сравнительно недавно стала применяться в фармакопейном анализе. Она была впервые введена в ГФХ, Фармакопею США XVI, Британскую фармакопею 1963 г. и во Второе издание Международной фармакопеи.
Известно, что молекулы вещества, независимо от его физического состояния и его природы, находятся в динамическом состо